Edims: an event-driven internal memory synchronized readout prototype ASIC chip developed for HFRS-TPC

HFRS(HIAF FRagment Separator) will be the radioactive secondary beam separation line on High-Intensity heavy-ion Accelerator Facility(HIAF) in China. Several TPC detectors, with high count rates, are planned for particle identification and beam monitoring at HFRS. This paper presents an event-driven internal memory and synchronous readout(EDIMS)prototype ASIC chip. The aim is to provide HFRS-TPC with high-precision time and charge measurements with high count rates and a large dynamic range. The first prototype EDIMS chip integrated 16 channels and is fabricated using a 0.18-μm CMOS process. Each channel consists of a charge-sensitive amplifier, fast shaper, slow shaper, peak detect-and-hold circuit, discriminator with time-walk compensation, analog memory, and FIFO. The token ring is used for clock-synchronous readout. The chip is taped and tested.

一种检测HFRS病毒滴度的新方法——微孔培养细胞IFA

检测出血热肾病综合症（HFRS）病毒滴度,以往一般采用乳小白鼠接种或Vero E6细胞培养瓶培养,然后冰冻切片或刮片,再免疫荧光法（IFA）测定。前一种方法虽较敏感,但必须具备特殊的饲养条件和冰冻切片机。Vero E6细胞容易培养,但检测多个滴度需要大量细胞,工作量较大,我们利用微孔培养细胞简便的特点,建立了直接在微孔板上进行IFA检测HFRS病毒滴度的方法,并与细胞培养瓶方法比较。 材料和方法 一、病毒:HFRS病毒Z10株Ⅰ型,本文所测为4批疫苗病毒;Z37株本室从HFRS患者血清中分离,经中国药品生物制品检定所疫苗一室（以下简称中检所）鉴定为Ⅱ型,76—118和UR株,分别为Ⅰ型和Ⅱ型国际标准株,由中检所惠赠。 二、Vero E6细胞:从中检所引进,本室传代。 三、抗流行性出血热病毒荧光抗体（抗-EHFV荧光抗体）:本室标记。 四、微孔培养细胞IFA（简称微孔法）:在96孔细胞培养板上制备Vero E6细胞单层;将病毒按10倍系列稀释,各取10ul病毒悬液接种入微孔中,每个稀释度4孔;置板于5%CO2、37℃培养箱吸附1.5小时后。

HFRSV在玻璃平皿表面和鼠粪尿中自然衰亡的研究

室温下用第２１代感染肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）的乳小鼠脑悬液滴加于无菌玻璃平皿和盛有鼠粪尿的平皿中，再立即以１６４０细胞培养液反复洗涤后回收，对鼠脑悬液和回收液分别进行ＴＣＩＤ５０测定，计算玻璃平皿表面ＨＦＲＳ病毒的存活情况。结果ＨＦＲＳ病毒在玻璃平皿表面存活率为５３．７９８４％；自然衰亡率为４６．２０１６％。病毒加入鼠粪尿中的存活率为０．００１２％；自然衰亡率为９９．９９８８％。

HFRS患者血浆中TNF、sIL-2R、IL-6、IL-4和IFN-γ水平的变化及其意义

目的 :探讨肾综合征出血热 (HFRS)患者血浆中的TNF、sIL 2R、IL 6、IL 4和IFN γ水平的变化及其与血清中丙氨酸转氨酶ALT活性水平的相关性。方法 :利用双mAb夹心ELISA法检测HFRS患者血浆中细胞因子的水平 ,应用美国RA 10 0 0全自动生化仪检测患者血清中ALT的水平。结果 :HFRS患者血浆中TNF、IL 6、IL 4、IFN γ和sIL 2R水平分别为 (95 .82± 12 .0 4 )、(36 2 .4 6± 14 1.2 6 )、(17.76± 3.5 2 )、(116 .18± 19.80 )ng/L及 (89882 0± 12 72 0 0 )U/L ,健康对照组依次为 (17.89± 1.6 8)、(4 3.81± 18.0 8)、(4 .86± 1.14 )、(7.5 7± 2 .4 1)ng/L及(6 6 730± 2 96 90 )U/L、(P <0 .0 1) ;患者血清中ALT的水平也显著升高 ,为正常对照的 4 .4倍。通过相关性分析 ,发现TNF、sIL 2R、IL 6和IFN γ水平与患者血清中ALT的水平高度相关 (P <0 .0 1)。结论 :HFRS患者体内TNF、sIL 2R、IL 6和IFN γ水平显著升高 ,且与患者体内ALT水平的升高高度相关 。

HLA-I类抗原与HFRS的相关性研究

目的 探讨 HL A- 类基因多态性与肾综合征出血热 (Hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)的相关性。方法 应用微量淋巴毒试验对中国北方地区 5 6例 HFRS患者 (HFRS组 )及健康人群 (对照组 ) HL A- 类基因频率分布进行了检测。结果 HFRS组 HL A- B39和 HL A- B4 0抗原出现频率均为 7.14 % ,对照组皆为 0 ,两组比较差异具有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 HL A- B39和 HL A- B4 0基因可能与中国北方地区人群HFRS的易感性有关。

胶体金免疫电镜技术鉴定一株抗HFRS病毒囊膜糖蛋白和核蛋白双特异性McAb

采用超薄切片和胶体金免疫电镜技术鉴定抗HFRS病毒McAb 3G1,结果发现其既对成熟病毒颗粒和囊膜颗粒标记阳性,又对颗粒状包涵体及丝状颗粒包含体标记阳性,从而提示该株McAb可能具有HFRS病毒囊膜糖蛋白和核蛋白双特异性。

吉林地区HFRS病原体基因型分析

为调查吉林地区褐家鼠中汉坦病毒病原体基因型及其分布情况,采用免疫荧光法检测吉林市区及吉林市所属各县市收集的鼠肺标本,对汉坦病毒抗原阳性标本以巢式RT-PCR法扩增S基因片段上的核苷酸序列并测序,将扩增片段的核苷酸序列与已知病毒序列进行同源性分析及系统进化树分析。序列分析发现吉林地区褐家鼠携带的汉坦病毒均为汉城病毒,S3亚型;未发现普马拉病毒存在。结果表明吉林市褐家鼠主要携带S3亚型的汉城型汉坦病毒。

人源性噬菌体抗体库的构建及抗HFRS病毒抗体的筛选

目的：构建人源性 Ｆａｂ 噬菌体抗体基因库并筛选可表达与肾综合征出血热（ Ｈ Ｆ Ｒ Ｓ）病毒抗原特异结合之 Ｆａｂ 抗体的重组克隆． 方法：利用逆转录、聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）等技术从 Ｈ Ｆ Ｒ Ｓ恢复期患者外周血淋巴细胞（ Ｐ Ｂ Ｌ）中扩增出人 Ｉｇ Ｇ抗体重链 Ｆｄ 基因及κ轻链基因，将之克隆入噬菌体载体ｐ Ｃｏｍ ｂ３，构建人源性 Ｆａｂ 噬菌体抗体基因库． 并利用噬菌体表面呈现技术，对此抗体库进行淘筛、富集． 结果：①成功地构建了人源性 Ｆａｂ 抗体基因库，库容量为 ３×１０６ ． ②从噬菌体抗体库中淘筛得到了能表达人源性抗 Ｈ Ｆ Ｒ Ｓ病毒 Ｆａｂ 抗体的重组克隆． 结论：利用噬菌体抗体库技术，可以获得能表达人源性抗 Ｈ Ｆ Ｒ Ｓ病毒抗体的重组克隆．

微量快速检测HFRS病毒特异性抗体的自身血凝实验

目的 验证微量快速自身血凝实验用于检测肾综合征出血热（HFRS）病毒抗体的实用性。方法 采用直接玻片自身血凝试验检测临床诊断为HFRS病人全血中的特异性抗体,采用间接免疫荧光法作平行对照。结果 检测HFRS病人全血54份,自身血凝实验49例（90.7％）为阳性,而间接免疫荧光仅45例（83.33％）阳性;用自身血凝实验检测90例正常人全血,其中89例不出现凝集。结论 检测HFRS病人全血中病毒抗体的自身血凝实验是一种简便,微量,快速的试验诊断方法,非常适合基层医疗单位使用。

单克隆抗体对HFRS病毒两种粗制抗原相对亲和力的测定

采用ELISA测定32株抗HFRS病毒McAb对该病毒两种粗制抗原的相对亲和力,发现每一株McAb对两种病毒抗原的亲和力相同或基本相同,而各株McAb对同一病毒抗原的亲和力则有所不同,有些差别很大。按50％最大结合浓度分析,可分为3组。1组13株McAb为0.003～0.8μg/ml,Ⅱ组9株McAb为0.1～8μg/ml,Ⅲ组10株McAb为50～300μg/ml。这一结果为选择应用这些McAb提供了依据。

西安市出血热高发乡镇双价HFRS灭活疫苗普种后防控效果评价

目的 优化免疫针次，提高疫苗接种率，观察双价出血热肾病综合征（HFRS）沙鼠肾细胞灭活疫苗对姬鼠型疫区防病效果，为制定西安市出血热防治对策提供依据。方法 选择流行性出血热（EHF）发病率大于15／10万以上乡镇高危人群进行普种，年龄16～60岁。在其他因素不变的情况下，观察接种率、疫苗干预前后EHF发病率。对疫苗接种率、抗体阳转率进行检测，观察接种反应。结果 EHF高发乡镇疫苗接种率提高了38．92％，优化免疫针次前后疫苗接种率有明显差异。高发乡镇EHF发病率下降了58．60％，疫苗干预前后EHF发病率有明显差异。高发乡镇疫苗接种率为85．25％。加强后14d疫苗抗体阳转率为83．10％，接种双价疫苗人群无一例发病，疫苗的安全性良好。结论 双价HFRS沙鼠肾细胞灭活疫苗接种率有大幅度提高，防治EHF有明显效果，应在其他乡镇推广接种。

应用McAb和免疫血清对不同HFRS病毒株感染乳鼠保护作用的比较

HFRS病毒陈茱、76-118株和R22株100LD_(50)分别感染新生乳鼠。感染后24h,经腹腔分别接种McAb(3D8、3G1、8F8、8G3和8G2)和免疫血清(陈株、76-118株和R22株),结果发现,这5株McAb对陈林和76-118株感染乳鼠100％保护,而对R22株感染乳鼠只有McAb8F8有25％保护,而其佘McAb均无保护。免疫血清的保护实验也表明,陈株和76-118株可以交互保护。上述结果提示,陈株与76-118株保护性抗原较一致,但R22株与前两株差别较大。

HFRS病毒滇绒鼠分离株E-142全S基因序列分析

目的 了解肾综合征出血热病毒云南地区滇绒鼠分离株E - 14 2的分子生物学特征。方法 应用PCR方法克隆了该株全S基因。结果 序列测定结果表明E - 14 2株的S片段的全基因序列共 170 2个核苷酸 ,编码 4 2 9个氨基酸。四种核苷酸的比例分别为A32 79% ,G2 5 12 % ,T2 3 0 2 % ,C19 0 7% ,GC含量为 4 4 19% ,AT含量为5 5 81%。E - 14 2与汉坦病毒S基因核苷酸和氨基酸同源性比较表明 ,E - 14 2株与HTN型同源率为 86 6 %～90 4 % ,而与SEO型仅为 6 8 3%～ 6 9 6 % ,E - 14 2株病毒属于HTN型 ,但与HTN型其它毒株相差高达 9 6 %～13 4 %。结论 E - 14 2株病毒是HTN型的新亚型毒株。

HFRS、HAV疫苗联合接种的反应性及免疫原性

目的 :为观察驻吉林省灾区某部新兵进行肾综合征出血热 (HFRS)灭活疫苗I型及甲肝 (HAV)减毒活疫苗联合接种的反应性及免疫原性 ,为部队防疫工作提供可靠依据。方法 :对2 0 0名新兵随机分为HFRS灭活I型疫苗及HAV减毒活疫苗联合接种的观察组 ,对照组为 (单独接种HAV减毒活疫苗单甲组、单独接种HFRS灭活I型疫苗的单出组 )。观察接种后反应性及HFRS灭活疫苗接种后 ,测特异性IgG荧光抗体 ,计算阳转率 ,HAV减毒活疫苗接种后用酶联反应竞争抑制法检测血清中抗 -HAV(IgG)抗体OD值并进行对比统计学处理。结果 :联合组及单甲、单出组疫苗接种后均无明显不良反应 ,无一人发病 ;联合接种组抗 -HFRS抗体的阳转率及抗 -HAV(IgG)抗体的阳转率 ,均明显高于单出接种组及单甲接种组。结论 :HFRS灭活疫苗I型及HAV减毒活疫苗联合接种是安全的 ,有效的 。

双McAb-ELISA夹心法检测HFRS病毒血凝素抗原的实验研究

作者采用抗HFRS病毒血凝素McAb和HRP标记的同一种McAb,建立了检验HFRS病毒血凝素抗原的双McAb-ELISA夹心法。经取代试验和抗原阻断试验均证明本法具有高度特异性,重复性也良好。用本法和血凝试验平行地检测了10批粗提HFRS陈株感染鼠脑的血凝素抗原,检出率分别为100％和70％,而前法滴度明显高于后法(GMT 1:506和1:26),有显著性差异(P<0.01)。用本法检验了10种从不同疫区不同宿主分离的HFRS病毒株的感染鼠脑或Vero—E6培养上清,结果均为阳性,虽血凝素抗原滴度高低不一,却再次说明不同HFRS病毒株血凝素之间有群共同性,因此本法在HFRS的临床诊断,流行病学监测,疫苗效价鉴定中都有实用价值,可取代血凝试验。

HFRS混合型疫区家鼠传病作用的研究

于1987.4～1988.3在安徽颍上HFRS混合型疫源地抽取91名当年发病病人进行病例对照研究。在野外感染因素相近情况下调查室内鼠密度、带毒率及人群隐性感染率,结果表明,病例组上述三指标均大于对照组。另在城关镇幼儿园进行城镇儿童HFRS隐性感染调查,发现与野鼠接触机会极少的城镇儿童中存在HFRS隐性感染。此两项结果均提出了HFRS混合型疫源地中家鼠的传病作用。通过配对分析及Logistic模型多因素分析,对影响家鼠传病作用的因素进行了分析。

β2-M、CRP在HFRS患者血清中含量及其意义

目的:β2-微球蛋白(β2-M)、C-反应蛋白(CRP)在肾综合征出血热(HFRS)患者血清的变化,及其与病情发展及预后的关系。方法:选取肾综合征出血热患者111例(HFRS组),采用放射免疫法、胶乳法检测患者不同病期时血清β2-M、CRP水平,并设体检正常者30例为健康对照组进行对比观察。结果:HFRS患者β2-M在发病各期检测水平均高于正常对照组;HFRS危重型患者CRP高于中型患者(P<0.05);CRP发热第2病日阳性率为83.3%,高于同期尿蛋白阳性病例33.3%,且在热期、低血压期、少尿期也较对照组明显升高,于多尿期、恢复期逐渐下降并恢复正常。结论:β2-M、CRP水平可随病情好转,逐渐下降,表明β2-M、CRP可反映HFRS发展情况,有助HFRS的早期诊断及判断预后。