一种检测HFRS病毒滴度的新方法——微孔培养细胞IFA

检测出血热肾病综合症（HFRS）病毒滴度,以往一般采用乳小白鼠接种或Vero E6细胞培养瓶培养,然后冰冻切片或刮片,再免疫荧光法（IFA）测定。前一种方法虽较敏感,但必须具备特殊的饲养条件和冰冻切片机。Vero E6细胞容易培养,但检测多个滴度需要大量细胞,工作量较大,我们利用微孔培养细胞简便的特点,建立了直接在微孔板上进行IFA检测HFRS病毒滴度的方法,并与细胞培养瓶方法比较。 材料和方法 一、病毒:HFRS病毒Z10株Ⅰ型,本文所测为4批疫苗病毒;Z37株本室从HFRS患者血清中分离,经中国药品生物制品检定所疫苗一室（以下简称中检所）鉴定为Ⅱ型,76—118和UR株,分别为Ⅰ型和Ⅱ型国际标准株,由中检所惠赠。 二、Vero E6细胞:从中检所引进,本室传代。 三、抗流行性出血热病毒荧光抗体（抗-EHFV荧光抗体）:本室标记。 四、微孔培养细胞IFA（简称微孔法）:在96孔细胞培养板上制备Vero E6细胞单层;将病毒按10倍系列稀释,各取10ul病毒悬液接种入微孔中,每个稀释度4孔;置板于5%CO2、37℃培养箱吸附1.5小时后。