革螨、恙螨体内HFRSV-RNA定位检测方法研究

用地高辛素标记肾综合征出血热病毒cDNA分子探针 ,检测肾综合征出血热病毒在革螨、恙螨体内的分布定位 ,并对原位分子杂交的步骤进行研究。结果表明 :病毒核酸信号呈弥散分布 ,主要位于卵巢细胞 ,中肠及支囊细胞。在铺片时 ,明胶 -硫酸铬钾与多聚赖氨酸的效果相似 ,4%多聚甲醛的固定效果较好 ,可有效防止脱片。预杂交中加入SpermDNA和yeasttRNA ,可有效地减少背景染色 ;42℃杂交 16h ,显色 7h 。

原位分子杂交检测HFRSVRNA方法研究

采用非放射性标记物－地高辛碱性磷酸酶标记肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）ｃＤＮＡ制备分子探针，检测ＨＦＲＳＶ在鼠肺、恙螨体内分布定位，并对原位分子杂交的各环节进行探讨。结果表明：鼠肺的吞噬细胞、支气管粘膜上皮细胞、血管内皮细胞等均见有阳性颗粒，在恙螨卵巢细胞、中肠及支囊上皮细胞也存在阳性颗粒；在前处理中，明胶硫酸铬钾与多聚赖氨酸的铺片效果相似；室温２ｈ，４２℃１ｈ，４％多聚甲醛处理冰冻切片，可有效防止脱片，且保持良好的细胞形态结构；探针ＰＣＲ标记法优于随机引物标记法；预杂交液加入ｓｐｅｒｍＤＮＡ和ｙｅａｓｔｔＲＮＡ，不用硫酸萄聚糖，可有效地减少背景染色；４２℃杂交１６ｈ。

用PCR技术检测小盾纤恙螨体内HFRSV－RNA的初步研究

用ＰＣＲ技术检测小盾纤恙螨体内ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的初步研究南京军区军事医学研究所（２１０００２）张云，李先富，唐家琪，李越希，吴光华陕西省卫生防疫站张家驹，姜克俭，甘粤怀，周燕平１９８９年以来我所与陕西省卫生防疫站协作先后用４种方法对小盾纤恙螨自然感...

套式反转录-聚合酶链反应检测恙螨及鼠肺内肾综合征出血热病毒RNA

选择覆盖肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）膜蛋白（ＭＰ）基因的保守区核苷酸序列合成２对引物，采用异硫氰酸胍一步抽提ＲＮＡ，建立了ＲＴ－ＰＣＲ检测鼠体恙螨及游离恙螨体内ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的方法，扩增产物经凝胶电泳及斑点印迹杂交证实具有特异性。结果显示，ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５０只组、１０只组、游离螨５０只组，ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠肺１０００ｍｇ、５００ｍｇ组经ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性；ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５只组，ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠体恙螨５０只和１０只组，游离螨１０只和５只组，鼠肺ＨＦＲＳＶ抗原阳性１００ｍｇ组均未见有明显扩增带。进一步用套式反转录－聚合酶链反应（ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ）检测，在ＲＴ－ＰＣＲ未测出ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的各组中均检测有ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ。结果表明ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ具有高特异、高敏感的特点，可用于检测恙螨体内微量ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ，为确认恙螨作为ＨＦＲＳＶ的传播媒介提供了分子生物学证据。

原位分子杂交检测上海真厉螨与柏氏禽刺螨体内肾综合征出血热病毒的研究

目的：提供革螨传播肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）的分子生物学证据。方法：用上海真厉螨与柏氏禽刺螨叮咬ＨＦＲＳＶ接种乳小鼠，取叮咬后ｄ１０及ｄ１００以上的上海真厉螨与柏氏禽刺螨冰冻切片，用地高辛标记ＨＦＲＳＶｃＤＮＡ核酸探针原位分子杂交检测其体内病毒ＲＮＡ。结果：叮咬野鼠型（７６－１１８株）接种乳小鼠后ｄ１０上海真厉螨检出病毒ＲＮＡ，在细胞浆、细胞核中及核膜上呈细密颗粒状或全浆阳性，见于生殖器官细胞、胃及支囊上皮细胞及脑皮质细胞；叮咬家鼠型（ＵＲ株）病毒接种乳小鼠后ｄ１２螨亦检出病毒ＲＮＡ，病毒的细胞组织分布与野鼠型相同；分别检测野鼠型螨３１只和家鼠型２３只，其中阳性分别为１７只和１０只；叮咬野鼠型病毒接种乳小鼠后ｄ１３２，家鼠型ｄ１０２螨仍能检出病毒ＲＮＡ。柏氏禽刺螨叮咬野鼠型病毒接种乳小鼠ｄ１０，检测螨２０只，其中阳性１２只，病毒ＲＮＡ主要分布于生殖器官细胞内。结论：上海真厉螨与柏氏禽刺螨均可经叮咬获得ＨＦＲＳＶ，上海真厉螨可分别感染野鼠型和家鼠型ＨＦＲＳＶ，野鼠型在螨群体内至少可维持１３２ｄ，家鼠型１０２ｄ，具有贮存两型病毒的作用，是ＨＦＲＳＶ的适宜媒介和贮存宿主，在动物宿主间交叉传播两型ＨＦＲＳＶ中?