虎仗提取物白藜芦醇诱导胃癌细胞HGC27凋亡

目的 :观察虎仗提取物白藜芦醇对胃癌细胞HGC2 7细胞周期和增殖的影响及凋亡诱导作用 .方法 :采用MTT法和软琼脂集落形成实验观察白藜芦醇对细胞增殖的影响 ,Annxin V&PI染色及流式细胞仪检测观察白藜芦醇对细胞周期的影响及诱导凋亡的作用 .结果 :MTT实验发现白藜芦醇作用HGC2 7细胞 2 4h后 ,细胞存活率显著下降 (P <0 .0 1)并呈剂量依赖性 ,软琼脂集落形成实验发现HGC2 7细胞在0 .5mmol/L白藜芦醇作用下无细胞集落的形成 ,Annxin V&PI染色及流式细胞仪检测发现白藜芦醇可引起HGC2 7阻滞于G1期 ,并可诱导HGC2 7发生凋亡 (8.39% ) .结论 :白藜芦醇可抑制胃癌细胞HGC2 7增殖并可诱导细胞发生凋亡 .

青蒿琥酯对胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的 探讨青蒿琥酯对大胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 体外培养HGC27细胞,采用不同浓度青蒿琥酯处理24、48、72 h,MTT法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;青蒿琥酯（浓度分别为20、40、80 mg/L）处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测Casepase-3、Caspase-9相对活性、Western blot法检RUNX-3蛋白表达情况.结果 青蒿琥酯（浓度10～100 mg/L）能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态.青蒿琥酯（浓度分别为20、40、80 mg/L）作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为11.5％、21.4％、36.6％,而对照组凋亡率仅为2.2％;处理后Casepase-3相对活性分别为（0.19±0.02）、（0.25±0.04）和（0.31±0.03）,对照组为（0.11±0.02）,Casepase-9相对活性分别为（0.18±0.02）、（0.23±0.03）和（0.30±0.04）,对照组为（0.10±0.02）,与对照组比较,青蒿琥酯处理组Casepase-3、Caspase-9相对活性显著增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;RUNX-3蛋白表达上调,呈剂量依赖性.结论 青蒿琥酯能抑制HGC27细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3、Caspase-9活性、上调RUNX-3蛋白的表达有关.青蒿琥酯是一种前景广阔的抗肿瘤药物.

白藜芦醇对胃癌细胞HGC27细胞周期的影响

目的:研究白藜芦醇对胃癌细胞株HGC27细胞细胞周期的影响。方法:不同浓度的白藜芦醇作用于HGC27细胞,用流式细胞术分析细胞周期。结果:白藜芦醇作用后,HGC27细胞的增殖速度减缓,DNA合成减少。白藜芦醇在较低浓度时即可诱导G0/G1阻滞。结论:白藜芦醇可诱导胃癌细胞发生G0/G1阻滞,S期减少。

EGCG通过抑制COX-2表达及PGE_2合成诱导胃癌细胞系HGC27凋亡

目的：探讨EGCG对胃癌细胞系HGC27细胞凋亡的影响及其机制。方法：体外培养的HGC27细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同浓度EGCG处理24、48、72 h,对照组加入同等体积的培养基,MTT法测定其对HGC2细胞增殖的影响;EGCG（浓度分别为0、10、20、40μg/mL）处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度计检测Casepase-3、Casepase-9相对活性,Rh123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,western blot法检测环氧合酶2（COX-2）基因表达,ELISA法检测PGE2含量。结果：EGCG（浓度10-80μg/mL）能显著抑制HGC27细胞增殖,呈剂量和时间依赖性;EGCG（浓度分别为10、40、80μg/mL）作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为14.8%、25.8%、37.7%,对照组凋亡率为0.6%;Casepase-3、Casepase-9相对活性显著增加,线粒体膜电位降低,COX-2的表达降低,PGE2合成减少。结论：EGCG可通过抑制HGC27细胞COX-2表达及PGE2合成,激活线粒体凋亡途径,抑制细胞增殖并促进其凋亡。EGCG可能是一种前景广阔的抗肿瘤药物。

白藜芦醇在诱导人胃癌HGC27细胞凋亡中的机制研究

目的探讨白藜芦醇(Res)干预人胃癌HGC27细胞后,PTEN与p-Akt信号通路中,VEGF、MMP-9表达差异并探讨其相互关系。方法应用体外HGC27细胞培养技术,采用CCK-8实验测定Res对HGC27细胞生长抑制率的影响;采用流式细胞术分析细胞周期;采用Western blotting检测Res对HGC27细胞中凋亡相关基因PTEN和p-Akt的影响;采用ELISA法检测Res干预前后HGC27细胞的VEGF和MMP-9蛋白分泌水平的变化。结果 Res对HGC27细胞的生长抑制率存在浓度和时间依赖性(P<0.05);Res干预HGC27后48 h,细胞周期分析显示DNA合成期(S期)细胞比例明显减少,并呈现剂量相关性(r=-0.930,P=0.007);PTEN相对表达量与Res干预浓度呈正相关(r=0.951,P=0.04);p-Akt、VEGF和MMP-9相对表达量均与Res干预浓度呈负相关(r=-0.969,P=0.03;r=-0.894,P=0.02;r=-0.881,P=0.01)。结论 Res能够抑制人胃癌HGC27细胞的增殖,并且诱导其凋亡,其机制可能与上调PTEN的表达和抑制Akt的磷酸化有关,并通过调控VEGF和MMP-9的分泌实现HGC27的增殖抑制及凋亡。

二乙酰去水卫矛醇对胃癌细胞系HGC27生长和凋亡的影响

目的:探讨二乙酰去水卫矛醇(DADAG)对胃癌细胞系HGC27生长的影响。方法:在培养的人胃癌细胞系HGC27中,加入DADAG作用24、48、72、96h后,用MTT法检测细胞生长情况,用BECKMAN COULTER流式细胞分析仪检测细胞的凋亡百分率。结果:DADAG对胃癌细胞系HGC27的半数抑制浓度(IC50)为6.29mg/L。加入浓度为8.0mg/L的DADAG,24、48、72、96h时HGC27细胞的生长抑制率分别为31.58%、43.04%、49.51%和63.91%;凋亡率分别为22.553%、29.331%、33.237%、35.117%。结论:DADAG在体外具有明显的抑制胃癌细胞系HGC27生长的作用。

STAT3对PTEN缺失的HGC27细胞增殖的影响

目的:初步探索STAT3与HGC27胃癌细胞增殖的关系。方法:用T4 DNA连接酶将外源片段与酶切后的p LKO.1载体连接,将构建的重组质粒转染293T细胞,48 h后收集上清用于感染HGC27细胞,Western印迹检测蛋白的表达,生长实验检测其对肿瘤细胞增殖的影响。结果:基因测序和双酶切鉴定表明敲低STAT3质粒构建成功;慢病毒质粒有效抑制HGC27细胞中STAT3蛋白水平,抑制STAT3对HGC27细胞的增殖有明显抑制作用。结论:在PTEN缺失的HGC27胃癌细胞中STAT3促进肿瘤增殖,但STAT3并不是在所有PTEN缺失的肿瘤细胞中都发挥抑制肿瘤形成的作用。

野生型p53基因转染对人胃癌细胞系HGC27生长的抑制作用

目的 研究野生型p5 3基因对人未分化胃癌细胞系HGC2 7生长的抑制作用。方法 用表达人野生型p5 3基因全长cDNA的真核载体pcDNA3 p5 3,转染人未分化胃癌细胞系HGC2 7,对转染后细胞进行生长曲线、细胞生长抑制率及流式细胞术分析 ,观察其生物学特性变化。结果 外源野生型p5 3基因在HGC2 7细胞内稳定表达 ,经pcDNA3 p5 3转染的HGC2 7细胞生长速度受到明显抑制 ,流式细胞分析显示G1期增加 ,S期下降 ,细胞出现凋亡。结论 野生型p5 3基因能在HGC2 7细胞内表达 。

吗啡对胃癌细胞系HGC27细胞增殖的影响及其机制

目的探讨吗啡对人胃癌细胞系HGC27细胞增殖的影响及其机制。方法体外培养的HGC27细胞,用不同浓度吗啡处理24、48、72 h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;实验组用吗啡（浓度分别为0.05、0.1、0.2μmol/L）处理HGC27细胞48 h,对照组加入不含药物的培养基,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测细胞凋亡蛋白酶-3（Casepase-3）相对活性、western blot法检p16、bcl-2、bax基因表达情况。结果吗啡（浓度0.025～0.4μmol/L）能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;吗啡（浓度分别为0.05、0.1、0.2μmol/L）作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为9.4%、11.5%、21.4%,而对照组凋亡率仅为2.2%;Casepase-3相对活性显著增加,处理后Casepase-3相对活性分别为（1.32±0.08）、（1.85±0.06）和（2.45±0.07）,对照组为（0.92±0.07）;p16和bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,呈剂量依赖性。结论吗啡能抑制HGC27细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调p16表达,进而引起bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,并增加细胞Casepase-3活性有关。

萝卜硫素对人胃癌细胞HGC27的抑制作用及其机制研究

目的探讨萝卜硫素对人胃癌细胞HGC27的抑制作用及其可能的作用机制。方法以HGC27人胃癌细胞株为研究对象,设置萝卜硫素低、中、高剂量组(20、40、80μg/mL)和溶剂对照组,CCK8法测定细胞存活率,DCFH-DA法测定ROS活性,HPLC法测定ATP含量,Western blot测定Bax、Bcl-2及p53蛋白的表达水平。结果 HGC27细胞经过不同浓度萝卜硫素干预处理后,低、中、高剂量组的HGC27细胞相对存活率显著降低(P<0.05),随着剂量升高存活率降低越明显,而且还随着干预处理时间的延长持续降低;细胞中ROS和APT水平经药物干预后显著降低(P<0.05);免疫印迹结果发现Bax和p53蛋白表达水平随剂量升高显著增加,而Bcl-2蛋白表达水平随药物剂量升高显著降低(P<0.05)。结论萝卜硫素能够抑制人胃癌细胞HGC27的生长,其机制可能与萝卜硫素清除细胞内ROS、抑制细胞ATP生存、下调抗凋亡蛋白Bcl-2及上调促凋亡蛋白Bax和抑癌蛋白p53的表达有关。

敲低CXCR4表达抑制胃癌细胞HGC27的增殖

目的:初步探索CXCR4与胃癌细胞HGC27增殖的关系。方法:构建携带CXCR4短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体质粒,并转染至293T细胞中,48 h后收集上清感染HGC27细胞,用Western印迹鉴定其干扰CXCR4蛋白表达的效果,采用CCK8实验检测敲低CXCR4表达对HGC27细胞增殖的影响。结果:双酶切鉴定和基因测序表明敲低CXCR4慢病毒载体质粒构建成功;慢病毒感染后有效抑制HGC27细胞中CXCR4蛋白水平,敲低CXCR4表达对HGC27细胞增殖有显著的抑制作用。结论:CXCR4参与了胃癌细胞HGC27的增殖,提示CXCR4有望成为一个新的胃癌治疗靶点。

角蛋白18对人胃癌HGC27细胞增殖、迁移、凋亡及化疗敏感性的影响

目的探究角蛋白18(CK18)对人胃癌HGC27细胞增殖、迁移、凋亡及化疗敏感性的影响。方法通过构建CK18敲低HGC27细胞株和使用CK18单克隆抗体两种方法抑制HGC27细胞中CK18的表达。对比细胞增殖、迁移、凋亡及化疗敏感性的变化。结果分别构建CK18低表达的HGC27细胞株和使用CK18单克隆抗体抑制HGC27细胞中CK18的表达后,细胞的增殖、迁移能力明显低于野生型HGC27细胞,凋亡率和化疗敏感性明显高于野生型HGC27细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CK18可促进人胃癌HGC27细胞的增殖,迁移,抑制细胞凋亡,降低细胞对化疗药物的敏感性。

DADS抑制XIAP介导的人胃癌HGC27细胞增殖、迁移和侵袭

目的 研究二烯丙基二硫(DADS)对X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)过表达胃癌HGC27细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 建立XIAP过表达HGC27细胞株;实验设置为Vector组、Vector+DADS组、XIAP组和XIAP+DADS组;DADS处理细胞后,Western blotting检测各组XIAP;MTT和平板克隆实验分析各组细胞的增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力。结果 XIAP过表达细胞增殖率和克隆形成率增高,迁移和侵袭的细胞数增加;DADS处理XIAP过表达细胞后,XIAP表达降低的同时,细胞增殖率和克隆形成率下降,迁移和侵袭的细胞数减少。结论 过表达XIAP促进HGC27细胞增殖和迁移侵袭;DADS下调XIAP,抑制HGC27细胞增殖、迁移和侵袭。

支架蛋白RACK1与蛋白激酶WEE1互作调控胃癌细胞株HGC27增殖的作用研究

目的研究活化的蛋白激酶C受体(Receptor for activated protein kinase C,RACK1)与蛋白激酶WEE1互作调控胃癌细胞株HGC27生长增殖及其作用机制。方法采用Lipofect AMINE 2000在HGC27细胞中过表达RACK1,Western blotting检测HGC27细胞中WEE1蛋白表达;免疫共沉淀验证RACK1和WEE1在HGC27细胞内存在相互作用;细胞内免疫荧光观测RACK1与WEE1在HGC27细胞中的表达定位情况。结果过表达RACK1后WEE1在胃癌细胞HGC27中的表达降低,RACK1与WEE1在HGC27细胞内存在相互作用且共定位在细胞质内。结论 RACK1与WEE1共同作用调控胃癌的发生发展过程,为RACK1成为临床上胃癌治疗的潜在靶点提供理论基础和实验依据。

新型卟啉类光敏药物介导的PDT对两种胃癌细胞HGC27和MGC803的杀伤效应

目的观察本实验室自行合成的新型卟啉类光敏药物对2种人胃癌细胞HGC27和MGC803的光动力学治疗（PDT）作用及作用机制。方法以人胃癌细胞HGC27和MGC803为实验细胞株。实验分为4组：空白对照组（无药物孵育、无光照），单纯光敏药物组（药物孵育、无光照），单纯光照组（无药物孵育、有光照），光敏药物＋光照组（药物孵育，同时有光照）。本实验采用光漂白法（bleaching法）测定了该新型光敏药物随着光照时间延长自身的稳定性；采用MTT法检测了光动力学作用后肿瘤细胞的存活率；通过共聚焦激光显微镜（LSCM）观察了该光敏药物在HGC27和MGC803细胞内的具体定位（线粒体或者溶酶体）。结果随着光照时间的延长，该新型卟啉类光敏药物自身稳定性较好；无光照条件下对HGC27和MGC803细胞生长无任何影响（P〉0．05）；光照存在时对HGC27和MGC803细胞具有强烈的杀伤作用（P〈0．05），且在浓度为3．125umol／L时对于2种细胞的杀伤作用即达到最大；单纯光照对2种肿瘤细胞生长无任何影响；该光敏药物均定位于HGC27和MGC803细胞溶酶体内。结论对于HGC27和MGC803胃癌细胞，该新型卟啉类光敏药物是一种很好的光动力治疗药物。

支架蛋白活化蛋白激酶C受体1在胃癌细胞中的表达及其与胃癌细胞增殖的关系

目的探讨活化蛋白激酶C受体1C(RACK1,GNB2L1)在胃癌细胞HGC27中的表达及过表达RACK1对HGC27生长增殖的影响。方法体外培养胃癌未分化细胞HGC27和正常胃黏膜上皮细胞系GES-1,收集细胞48 h后,提取mRNA和蛋白,利用RT-PCR检测RACK1 mRNA在HGC27和GES-1细胞中的表达;利用Western blotting法检测RACK1蛋白在两种细胞中的表达;以人胚肾HEK293细胞c DNA为模板,构建pc DNA3.1Aflag-RACK1重组质粒,利用Lipo2000转染入HGC27细胞中,Western blotting法检测质粒的转染效率,MTT法检测过表达RACK1对HGC27胃癌细胞系生长增殖的影响。结果 HGC27胃癌细胞中RACK1的mRNA和蛋白水平表达低于GES-1细胞(P<0.01)。双酶切鉴定和测序分析表明,pc DNA3.1A-flag-RACK1重组质粒构建成功。将该质粒转入HGC27细胞后,与未转染组相比,空载转染组RACK1蛋白表达无明显区别(P>0.05),pc DNA3.1-RACK1转染组RACK1蛋白表达明显升高(P<0.01);转染pc DNA3.1A-flag-RACK1转染组细胞存活率在72 h和96 h明显少于pc DNA3.1空载对照组(P<0.01)。结论支架蛋白RACK1的mRNA和蛋白水平在HGC27细胞中低表达,上调RACK1的表达可明显抑制HGC27细胞增殖。

牛磺酸通过线粒体凋亡途径诱导胃癌细胞凋亡

目的：探讨牛磺酸对人胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法：体外培养的HGC27细胞,用不同浓度牛磺酸处理24、48、72 h,MTT法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;牛磺酸（浓度分别为20、40、80 mmol/L）处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Rh123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,western blot法检Bcl-2、Bax、细胞色素C（cyt-c）、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达情况。结果：牛磺酸（浓度10~160 mmol/L）能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;牛磺酸（浓度分别为20、40、80 mmol/L）作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为15.2%、23.3%、35.4%,而对照组凋亡率仅为3.4%;线粒体膜电位降低,Bax、细胞色素C表达上调,而Bcl-2表达下调,Casepase-3、Caspase-9酶原均有活化,可见裂解后片段,呈剂量依赖性。结论：牛磺酸能抑制HGC27细胞的增殖并可能是通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。