伊氏锥虫HGPRT缺陷株驯化及生物学特性观察

为了获得伊氏锥虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶（ＨＧＰＲＴ）缺陷株，用不同浓度的８－氮鸟嘌呤（８－ＡＧ）和８－ＡＧ加紫外线照射的方法，对伊氏锥虫体外培养株进行了为期６０～１０１ｄ诱导驯化。结果，以每毫升含８－ＡＧ４０μｇ的培养液培养驯化，再配合紫外线照射，以及以每毫升含８－ＡＧ６０μｇ的培养液培养驯化，均获得了伊氏锥虫ＨＧＰＲＴ缺陷株。试验表明，培养虫体经过２～３个死亡期后逐步进入适应期，虫数升高到（１．５～２．５）×１０６／ｍＬ，饲养细胞通常于２～５ｄ变黑、崩解，应适时更换。培养驯化的１３株克隆虫株，经６－巯基鸟嘌呤（６－ＴＧ）抗性测定，１０株存活。克隆株在３倍量氨基喋呤的ＨＡＴ选择性培养液中死亡。生物学试验表明，ＨＧＰＲＴ缺陷株在无ＨＴ的培养液中生长良好，对小鼠致病力有下隆的趋势，虫血症和小鼠死亡时间比对照组延长１倍多。抗体凝集试验表明，ＨＧＰＲＴ缺陷株未发生抗原变异现象。超微结构显示，ＨＧＰＲＴ缺陷株的动基体、核和核仁比对照组明显增大，核膜电子密度区也明显增宽。

人胃癌次黄嘌呤-鸟便嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷株的建立

本研究首先用化学突变剂MNNG处理人胃癌细胞系(BGC 823),以提高突变率。然后用递增浓度的鸟便嘌呤类似物8-AG选择次黄嘌呤-鸟便嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷细胞,8-AG递增浓度为1~20μg/ml,历时半年。获得抗8-AG毒性的突变细胞,在HAT培养基中不能生存。经HGPRT酶的同位素法测定,发现野生型与突变型的BGC 823细胞有明显差别。本文还对缺陷型BGC 823的A、B、C、D、E、F株的应用进行了讨论。