HH方治疗HBV转基因小鼠抗病毒作用及其对TLR3／TLR4的影响

目的:观察HH方治疗乙肝病毒(HBV)转基因小鼠抗HBV的疗效及其作用机制。方法:HBV转基因小鼠随机分4组,模型组小鼠给予同体积生理盐水,苦参素组小鼠给予同体积含0.15 g/(kg·d)苦参素混悬液,高、低剂量HH方组小鼠分别给予同体积含7、2 g/(kg·d)HH混悬液。5周后,ELISA法检测血清及肝组织乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag),常规HE染色观察肝组织病理变化,定量PCR法检测血清中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)及肝组织中HBVDNA、Toll样受体(TLR)3/4 mRNA,Western blot法检测TLR3/4蛋白表达。结果 :高剂量HH方[7 g/(kg·d)]可以减轻肝细胞轻度脂肪变性、肝细胞轻度水肿及Kuffer细胞增生等病理改变,对肝组织炎细胞浸润未见明显缓解。高剂量HH方可以显著降低HBV转基因小鼠肝脏和血清中的HBs Ag、HBVDNA水平,差异具有统计学意义(P<0.05),与苦参素组比较差异无统计学意义(P>0.05)。高剂量HH方可以显著增强肝组织TLR3、TLR4的mRNA及蛋白表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:高剂量HH方有一定抗HBV作用,推测与增强TLR3、TLR4表达进而影响干扰素分泌有关。

新HH方对HBV转基因小鼠脾脏源DC相关的免疫耐受状态影响的研究

目的:探讨新HH方对乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)转基因小鼠脾脏源树突状细胞(Dendritic cell,DC)相关的"免疫耐受"状态影响。方法:取新HH方治疗过和未治疗过的转基因小鼠脾脏来源的单个核细胞,以重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant Mouse Granulocyte Macrophage-Colony Stimulatory Factor,rmGMCSF)和重组小鼠白细胞介素-4(Recombinant Mouse IL-4,rmIL-4)培养诱导DC,流式细胞仪检测其表面共刺激分子(CD80、CD86),MTT法检测其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,酶联免疫法(ELISA)法测定培养上清液中白介素-12(Interleukin-12,IL-12)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)水平。结果:新HH方组小鼠DC的表面协同刺激分子(CD 86)表达水平(13.7±3.1)、刺激同种异体淋巴细胞增殖能力(1:50和1:10 SI分别为1.22±0.09、1.69±0.10)和细胞因子IL-12水平(256.72±29.75)均高于对照组(154.69±11.32)(P<0.05),细胞因子IL-10水平(45.32±11.28)均低于对照组(76.79±16.26)(P<0.05)。结论:新HH方可以促进HBV转基因小鼠DC的成熟,上调其表面协同刺激分子CD86的表达,增强了其促淋巴细胞细胞增殖和分泌IL-12的能力,加强其抗原递呈能力,抑制分泌IL-10,从而打破DC相关的免疫耐受状态。