维A酸衍生物ECPIRM对皮肤T细胞淋巴瘤HH细胞增殖、凋亡的影响及其机制初探

目的探讨维A酸衍生物ECPIRM对人皮肤T细胞淋巴瘤HH细胞的增殖抑制作用及潜在机制。方法以0(对照组)、5、10、20μmol/L ECPIRM处理HH细胞72 h,采用CCK8法检测ECPIRM对HH细胞增殖活力的影响,采用流式细胞仪检测ECPIRM对HH细胞凋亡的影响。以10μmol/L ECPIRM处理HH细胞72 h,采用转录组学测序分析ECPIRM对HH细胞基因表达的调控作用,结合KEGG通路分析和GO功能富集分析比较ECPIRM诱导的差异表达的相关基因。采用反转录qPCR验证相关通路中关键基因的表达变化。组间差异采用单因素方差分析,采用LSD-t检验进行两两比较。结果CCK8结果显示,ECPIRM对HH细胞IC50为(4.91±2.48)μmol/L,对照组与5、10、20μmol/L ECPIRM组HH细胞活力分别为100.00%±2.87%、49.58%±4.53%、48.36%±2.88%、31.44%±2.46%,4组细胞活力差异有统计学意义(F=162.86,P<0.001),5、10、20μmol/L组细胞活力均低于对照组(t值分别为15.36、15.73和20.89,均P<0.001)。流式细胞仪检测结果显示,4组细胞凋亡率差异有统计学意义(11.51%±1.84%、23.83%±5.72%、36.19%±8.33%、49.75%±4.10%,F=17.62,P<0.001),10、20μmol/L组细胞凋亡率均高于对照组(t值分别为4.46、6.92,均P<0.01)。转录组学分析发现,ECPIRM诱导的增殖抑制作用可能与类固醇的代谢调控有关。反转录qPCR验证发现,10μmol/L ECPIRM组L-氨基酸氧化酶(IL4I1)、乙酰辅酶A乙酰转移酶2(ACAT2)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶1(HMGCS1)、甲羟戊酸二磷酸脱羧酶(MVD)、3-β-羟基类固醇-8,7-异构酶(EBP)、极低密度脂蛋白受体(VLDLR)、3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)mRNA相对表达与对照组比较明显受到抑制(均P<0.05)。结论维A酸衍生物ECPIRM对HH细胞可发挥显著的抗增殖及凋亡诱导作用,其机制可能与类固醇代谢关键基因的表达抑制有关。

铁过载引发人肝细胞HH4N-糖链表达差异研究

肝脏铁过载是血液系统疾病患者进行骨髓移植后的典型并发症之一,长期铁过载可引发肝脏细胞凋亡和器官损坏,然而铁过载的分子调控机理迄今仍不清楚。以培养的枸橼酸铁铵过载人肝细胞HH4和正常人肝细胞HH4为研究对象,细胞裂解提取总蛋白,分子筛超滤管分离获得总糖肽,PNGase F酶解释放出N-糖链,Sepharose 4B除盐纯化N-糖链,再利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)技术比较N-糖链变化情况。同时,采用荧光细胞凝集素免疫组化方法验证糖链分析结果。结果在铁过载人肝细胞和正常细胞中均检测到16种N-糖链,但糖链丰度存在明显差异。与正常人肝细胞相比,铁过载人肝细胞中高甘露糖型糖链的含量降低,而杂合型、复杂型、平分型、岩藻糖化和唾液酸化糖链的含量明显升高。凝集素免疫组化结果显示铁过载后细胞对凝集素Con A的亲和作用减弱,而对PHA-E、AAL、LCA和MAL-II的亲和作用增强,与糖链质谱分析结果相一致。研究为进一步探索人肝细胞铁过载模式下N-糖链表达差异的分子机理提供了技术支持。

The role of the hedgehog/patched signaling pathway in epithelial stem cell proliferation: from fly to human

The hedgehog-patched (hh-ptc) intercellular signaling pathway has recently been shown to control the proliferation of epithelial stem cells in both Drosophila and vertebrates. Mutant and ectopic expression analyses in Drosophila suggest that the HH protein diffuses from the signaling cells to promote the proliferation of nearby ovarian somatic stem cells by antagonizing the suppression of its receptor PTC towards the CI transcription factor in the stem cells. Consequently, the transcription of CIdependent genes leads to stem cell proliferation. This regulatory pathway appears to function also in vertebrates,where defects in ptc cause basal cell carcinoma, tumors of epidermal stem cell origin. Basal cell carcinoma can also be induced by ectopic expression of Sonic hedgehog (shh) or Glil, the vertebrate homolog of ci. These studies suggest the conservation of the hh signaling pathway in controlling epithelial stem cell divisions among different organisms.

西达本胺联合苦参碱对皮肤T细胞淋巴瘤细胞系增殖、凋亡的影响及可能的凋亡机制

目的研究西达本胺联合苦参碱对皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞系的增殖抑制和凋亡诱导作用,探讨其凋亡机制。方法采用0.4μmol/L西达本胺、0.6g/L苦参碱单药或联合分别作用HH、Hut78细胞24、48、72 h后,MTS法检测HH、Hut78细胞增殖率。二甲基亚砜(DMSO)处理HH、Hut78细胞作为对照组。西达本胺、苦参碱单药或联合作用两细胞系48 h后,流式细胞仪检测HH和Hut78细胞凋亡率,Western免疫印迹法检测各组细胞凋亡相关蛋白的表达。统计分析采用重复测量、单因素方差分析,组间两两比较采用LSDV检验。结果与对照组相比,西达本胺、苦参碱单药或联合均能一定程度抑制HH、Hut78细胞增殖(F=15.88.558.26,P<0.05、<0.001)048 h时,Hut78细胞系苦参碱组(20.98%±1.53%)、西达本胺组(22.44%±7.74%)和联合组细胞凋亡率(44.53%±1.85%)均显著高于对照组(8.42%±4.23%;LSD-t=4.76,5.31、13.69,均P<0.05),且联合组显著高于苦参碱组和西达本胺组(LSD-t=8.93、8.37,均P<0.01)。HH细胞系苦参碱组(13.98%±3.86%)、西达本胺组细胞凋亡率(13.61%±1.62%)与对照组(11.44%±1.43%)相比差异无统计学意义(均P>0.05),但联合组(20.94%±0.64%)显著高于对照组、苦参碱组和西达本胺组(LSD-t=7.37,5.40,5.69,均P<0.05)。HH细胞系中,联合组caspase-3剪切体蛋白表达显著高于对照组、苦参碱组和西达本胺组(均P<0.05),而E-cadherin、p65、p-Bad及Bcl-2蛋白表达显著低于其他3组(均P<0.05)。Hut78细胞系中,苦参碱组、西达本胺组和联合组E-cadherin、p65>p-Bad、Bcl-2蛋白表达均显著低于对照组(均P<0.05),仅西达本胺组和联合组caspase-3剪切体蛋白表达显著高于对照组(均P<0.05)。HH及Hut78细胞4组Bad蛋白表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论西达本胺联合苦参碱可抑制HH、Hut78细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与调控细胞凋亡相关蛋白E-cadherin、p65、p-Bad、Bcl-2及caspase-3剪切体蛋白表达有关。