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质粒介导的NDRG2 shRNA抑制其在人肿瘤细胞HHCC中的表达 被引量:2
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作者 张翊 裴德宁 +2 位作者 饶春明 药立波 王军志 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期267-269,286,共4页
目的 构建含有针对NDRG2的shRNA的质粒 ,抑制NDRG2在HHCC细胞中的表达。方法 用PCR方法从人基因组DNA中扩增出 336bp的U6 启动子 ,与 2 9bp的NDRG2靶序列的反向重复序列和pSNAV质粒相连。连接后的pSNAVU6 质粒转染入HHCC细胞 ,检测它... 目的 构建含有针对NDRG2的shRNA的质粒 ,抑制NDRG2在HHCC细胞中的表达。方法 用PCR方法从人基因组DNA中扩增出 336bp的U6 启动子 ,与 2 9bp的NDRG2靶序列的反向重复序列和pSNAV质粒相连。连接后的pSNAVU6 质粒转染入HHCC细胞 ,检测它们对NDRG2表达的影响。结果 pSNAVU6 重组质粒能抑制NDRG2的表达。 展开更多
关键词 RNA干扰 质粒 肿瘤细胞 转录后基因沉默 表达 NDRG2
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苦马豆素对肝癌细胞在体内外生长的抑制作用 被引量:23
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作者 孙纪元 朱妙章 +3 位作者 王四旺 谢艳华 王剑波 缪珊 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期221-224,共4页
目的研究苦马豆素(Sw)对肝癌细胞在体内外生长的抑制作用。方法采用体外抑瘤试验培养人源性肝癌HHCC细胞的方法,通过MTT法等试验测定其体外抑癌浓度;体内试验采用小鼠的鼠源性肝癌H22移植瘤法,通过对抑瘤率及病理切片的观测,探讨其抑瘤... 目的研究苦马豆素(Sw)对肝癌细胞在体内外生长的抑制作用。方法采用体外抑瘤试验培养人源性肝癌HHCC细胞的方法,通过MTT法等试验测定其体外抑癌浓度;体内试验采用小鼠的鼠源性肝癌H22移植瘤法,通过对抑瘤率及病理切片的观测,探讨其抑瘤作用。结果3.84μg.ml-1的Sw体外作用72 h后,HHCC细胞的存活率明显下降(P<0.05),其24 h的IC50为0.4μg.ml-1;SW在3、61、2 mg.kg-1时,对肝癌H22实体移植瘤的抑制率分别为13.2%、28.9%、27.3%;对腹水型H22的小鼠生命延长率分别为48.40%、64.16%、58.22%,病理切片显示,用药后肿瘤组织明显出血、坏死和炎症细胞浸润。结论苦马豆素对人源性和鼠源性肝癌生长都有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 苦马豆素 肝癌 HttCC细胞 %瘤细胞 MTT实验
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重组人NDRG2蛋白对肿瘤细胞抑制作用研究 被引量:5
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作者 张翊 陈杰 +3 位作者 裴德宁 饶春明 药立波 王军志 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第3期204-207,共4页
目的:考察原核表达的重组人NDRG2蛋白对肿瘤细胞的作用。方法:通过设置不同浓度的蛋白剂量并设置对照 组,采用细胞MTT比色法和细胞计数检测NDRG2蛋白对7901、HHCC细胞的抑制效果,流式细胞仪检测细胞周期的变化,体 内实验采用裸鼠抑瘤试... 目的:考察原核表达的重组人NDRG2蛋白对肿瘤细胞的作用。方法:通过设置不同浓度的蛋白剂量并设置对照 组,采用细胞MTT比色法和细胞计数检测NDRG2蛋白对7901、HHCC细胞的抑制效果,流式细胞仪检测细胞周期的变化,体 内实验采用裸鼠抑瘤试验。结果:重组人NDRG2对肿瘤细胞生长有较强的抑制作用,约50μg/ml浓度时对肿瘤细胞生长的 抑制作用明显,流式细胞术结果显示肿瘤细胞G1期变化,体外能抑制裸鼠肿瘤的生成。结论:重组人NDRG2蛋白在体内体 外具有一定的抑制肿瘤细胞生长作用,在肿瘤治疗方面将具有一定的意义。 展开更多
关键词 NDRG2 hhcc细胞 7901细胞 肿瘤抑制
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双位点核酶细胞内抑制乙型肝炎病毒基因的表达(英文) 被引量:1
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作者 李谨革 周永兴 +4 位作者 连建奇 贾战生 冯志华 李光玉 王平忠 《第四军医大学学报》 1999年第8期645-649,共5页
目的:构建针对乙型肝炎病毒(HBV)C区基因(2029-31及2063-65位点)的双位点核酶的真核表达载体.观察其在细胞内对HBV基因表达的抑制作用.方法:利用亚克隆技术.从质粒pGEMRzl23切下EcoRI-BamHI片段,双粘端克隆于真核质粒pBBS212... 目的:构建针对乙型肝炎病毒(HBV)C区基因(2029-31及2063-65位点)的双位点核酶的真核表达载体.观察其在细胞内对HBV基因表达的抑制作用.方法:利用亚克隆技术.从质粒pGEMRzl23切下EcoRI-BamHI片段,双粘端克隆于真核质粒pBBS212中,将该质粒与P1.2Ⅱ(含HBV全序列)共转染HHCC细胞(人肝癌细胞株).观察该核酶对HBV基因表达的抑制作用.结果:在HHCC细胞中p1.2Ⅱ可表达出HBsAg及HBeAg该核酶对HBeAg的合成抑制率达65%.结论:该双位点核酶可能通过针对HBVC区mRNA的剪切作用,阻断C区mRNA的表达.抑制了HBeAg的合成。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 核酶 hhcc细胞
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Influence of Apoptin on Up-regulation of the Expression of Bad and Bax
5
作者 GUOTai YANGQian 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2005年第3期301-305,共5页
The chicken anemia virus protein, apoptin, which manifests selectivity and specificity to tumor cells, induces a p53-independent and Bcl-2-insensitive type of apoptosis in various human tumor cells. In this study, the... The chicken anemia virus protein, apoptin, which manifests selectivity and specificity to tumor cells, induces a p53-independent and Bcl-2-insensitive type of apoptosis in various human tumor cells. In this study, the apoptin gene was cloned from the total DNA of chicken anemia virus, and the recombinant vector was constructed. We used oligonucleotide microarray to study the changes of four genes, including Bcl-2, Bcl-x_L, Bad and Bax. The post-transfection with the recombinant was also studied. The pro-apoptotic genes(Bad and Bax) and anti-apoptosis genes(Bcl-2 and Bcl-x_L) were up-regulated in contrast to the controls. According to the published data, either Bcl-2 or Bcl-x_L can form non-functional heterodimers by Bad and Bax binding together, resulting in blocking partly the release of cytochrome c from mitochondria. However, apoptosis could be inhibited by neither the endogenous Bcl-x_L nor Bcl-2 over-expression. The experiments show that the apoptin-induced apoptotic pathway is related to the up-regulation of Bad and Bax. Bad was up-regulated by apoptin; then this up-regulated product of Bad was in favor of displacing Bax from binding to Bcl-x_L or Bcl-2. Consequently, Bax exerted a pro-apoptotic dysfunction to mitochondria, thereby inducing the release of cytochrome c. Finally, apoptin induced the apoptosis of HHCC cells. These results indicate that the oligonucleotide microarray can reveal the genes related to the apoptosis induced by apoptin in HHCC cells. 展开更多
关键词 hhcc cell APOPTIN MICROARRAY Bad and Bax
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凋亡蛋白对Bcl-2家族几个基因表达影响 被引量:1
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作者 国泰 杨谦 +2 位作者 高洪雷 孙璟晗 王笑梅 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1180-1182,共3页
凋亡蛋白(Apoptin)只诱导肿瘤细胞或转化的细胞凋亡,但其作用机制还不十分清楚.从鸡贫血病毒总DNA中克隆出凋亡蛋白基因,构建pcDNA3.1/CT-Apoptin-GFP-TOPO融合表达的载体.用该载体转染HHCC单层传代细胞24 h后,观察到绿色荧光蛋白表达,... 凋亡蛋白(Apoptin)只诱导肿瘤细胞或转化的细胞凋亡,但其作用机制还不十分清楚.从鸡贫血病毒总DNA中克隆出凋亡蛋白基因,构建pcDNA3.1/CT-Apoptin-GFP-TOPO融合表达的载体.用该载体转染HHCC单层传代细胞24 h后,观察到绿色荧光蛋白表达,同时观察到细胞形态呈凋亡特征变化.提取细胞总RNA,按SuperArray芯片操作方法检测到实验组Bcl-2家族中的BimL,Bcl-2,Bax和Bak基因上调表达.Bcl-2家族在细胞凋亡的过程中作用重要.凋亡蛋白诱导HHCC细胞凋亡过程中,促凋亡的BimL,Bax 和Bak基因上调,抗凋亡的Bcl-2基因也上调.可能BimL与Bcl-2竞争性结合导致Bax或Bak释放,最终诱导细胞凋亡.揭示Bcl-2家族的基因参与凋亡蛋白诱导的HHCC细胞凋亡过程. 展开更多
关键词 凋亡蛋白 hhcc细胞 BCL-2 FAMILY GENES
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