白藜芦醇通过PLIN2调控ATGL/CGI58和Rab7/LC3β促进肝脂质分解

目的明确白藜芦醇(resveratrol,RSV)通过围脂滴蛋白2(perilipin 2,PLIN2)增强脂质分解的作用,并从脂解和脂噬途径阐明其作用机制。方法建立HHL-5细胞脂肪变性模型,分为对照组、棕榈酸组、siPLIN2转染组和不同浓度RSV处理组(5、10、20、40μmol/L)。采用CCK-8、细胞内甘油三酯(TG)含量测定、Bodipy染色检测不同浓度RSV对脂肪变性HHL-5细胞活力和脂肪分解的影响,采用Real-time qPCR、Western blot、免疫荧光染色检测肝脂质分解相关分子表达及平均荧光强度变化情况,并联合PLIN2 siRNA转染技术验证RSV促进肝脂质分解的通路。结果与对照组比较,棕榈酸组的甘油三酯含量和脂滴平均荧光强度升高(P<0.05),脂质分解相关分子PLIN2、ATGL、CGI58、Rab7、LC3β表达和平均荧光强度及共定位程度均明显降低(P<0.05)。40μmol/L RSV处理后可以减少脂肪变性HHL-5细胞的脂肪蓄积(P<0.05),并增加脂质分解相关分子的表达和平均荧光强度及共定位程度(P<0.05)。敲减PLIN2后,RSV调控脂解和脂噬相关分子以及改善肝细胞脂肪变性的作用消失(P<0.05)。结论RSV通过上调PLIN2,从而促进ATGL/CGI58和Rab7/LC3β的表达及其相互作用,最终增强肝脂质分解。

黄芪甲苷联合丹参酚酸B对肝细胞过氧化损伤的保护作用及其机制研究

目的:探讨黄芪甲苷联合丹参酚酸B对HHL-5肝细胞过氧化损伤的保护作用机理。方法:采用1640完全培养基培养HHL-5细胞株,3次传代后分为正常组、过氧化损伤模型组、黄芪甲苷组、丹参酚酸B组、黄芪甲苷联合丹参酚酸B组。采用过氧化氢诱导细胞过氧化损伤,丹参酚酸B和黄芪甲苷给药浓度均是10-5mol/L。qRT-PCR法检测细胞TLR4、NF-κB mRNA的表达水平,细胞爬片免疫组化法检测TLR4、NF-κB蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液中TNFα和SOD的含量。结果:与正常组比较,模型组TLR4、NF-κB mRNA和蛋白的表达水平显著增加,细胞上清液中TNFα的含量明显升高,SOD的含量明显降低(P<0.001)。与模型组比较,丹参酚酸B和黄芪甲苷干预组TLR4、NF-κB mRNA和蛋白的表达水平显著下降,细胞上清液中TNFα的含量明显降低,SOD的含量明显升高(P<0.01)。与黄芪甲苷或丹参酚酸B组比较,黄芪甲苷联合丹参酚酸B干预组TLR4、NF-κB mRNA和蛋白的表达水平显著下降,细胞上清液中TNFα的含量明显降低,SOD的含量明显升高(P<0.05)。结论:丹参酚酸B和黄芪甲苷能保护肝细胞的过氧化损伤且二者具有协同作用,该保护作用与抑制TLR4-NF-κB-TNFα炎症损伤通路相关。