MS-302三道测量分析系统的应用及HI-6在离体膈神经-膈肌上抗梭曼的作用机制探讨

目的探讨抗神经毒化合物HI-6在离体膈神经-膈肌上抗梭曼的作用机制。方法采用MS-302三道测量分析系统,观察大鼠离体膈神经-膈肌的收缩功能,同时,测定膈肌乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,观察药物对膈肌AChE活性的直接影响。结果(1)采用MS-302三道测量分析系统对膈神经-膈肌标本强直收缩曲线下的面积进行测量,较为直接地反映了膈神经-膈肌标本的生理功能,结果精确。(2)HI-6 10和100μmol/L对正常膈神经-膈肌收缩功能影响不明显,1 mmol/L对正常膈神经-膈肌收缩功能有抑制作用。HI-6 10μmol/L预防和治疗给药时,对梭曼抑制的标本收缩功能既没有保护作用也没有拮抗作用;100μmol/L给药有一定的保护和拮抗作用;剂量增加到1 mmol/L时,保护作用和拮抗作用都明显增强,且保护作用在30 min内最佳。(3)预先给予HI-6不能减弱梭曼对大鼠离体膈肌AChE的抑制,梭曼中毒后给予HI-6对梭曼抑制的膈肌AChE活性无显著影响。结论HI-6对梭曼抑制的离体膈神经-膈肌收缩功能的恢复可能是直接生理对抗作用,在本实验条件下未见膈肌酶活力有明显的恢复。

L-2000,L-1600和HI-6抗小鼠梭曼中毒效能比较

目的 在小鼠上进行L 2 0 0 0 ,L 16 0 0及HI 6抗梭曼中毒效能 (PR)比较 ,为全面评价L 2 0 0 0的抗毒作用提供实验依据。方法 药物预防和急救小鼠梭曼中毒ED50 测定 ;药物急救小鼠梭曼中毒PR值测定 ;药物小鼠急性毒性测定。结果 ①L 2 0 0 0预防小鼠梭曼中毒强度比L 16 0 0强 5 .2倍 ,比HI 6强2 .9倍。②L 2 0 0 0和L 16 0 0等剂量 (10mg·kg- 1)预防或急救小鼠梭曼中毒PR比较 ,两者差别均不显著。在等毒性剂量 (1/5LD50 )条件下 ,L 2 0 0 0比L 16 0 0强 ,两者差别显著 (P <0 .0 1) ,L 2 0 0 0不如HI 6强 ,两者差别显著 (P <0 .0 1)。③L 2 0 0 0 ,L 16 0 0和HI 6伍用抗胆碱能药L 16 0 2 +L 16 0 3,急救小鼠梭曼中毒 ,均有明显的协同作用 ,HI 6无论是等剂量(10mg·kg- 1)或等毒性 (1/5LD50 ) ,其抗毒效能大于L 2 0 0 0和L 16 0 0 (P <0 .0 1) ,L 2 0 0 0和L 16 0 0差别不显著。④以L 16 0 2 +L 16 0 3为底药 ,HI 6与L 2 0 0 0合用均比单独使用好 ,差别显著 (P <0 .0 5 ) ,说明两者有协同作用。⑤L 2 0 0 0预防或急救小鼠梭曼中毒时其治疗指数和安全系数均大于HI 6和L 16 0 0 ,其大小顺序是L 2 0 0 0 >HI 6 >L 16 0 0。结论L 2 0 0 0预防和治疗小鼠梭曼中毒效价强度比L 16 0 0和HI 6强 。

HI-6对梭曼染毒大鼠膈肌胆碱酯酶的重活化作用

目的研究HI-6对膈肌局部梭曼染毒大鼠膈肌胆碱酯酶的重活化作用。方法将大鼠麻醉后固定,沿腹正中线切开腹腔,暴露膈肌。梭曼局部染毒膈肌1和10 min后,局部或全身给予HI-6,于给药后24和72 h处死大鼠,取出中毒部位膈肌,用硫胆碱酶法显示终板的AChE活性,观察HI-6对胆碱酯酶的重活化作用。结果膈肌局部梭曼中毒1和10 min后,局部给予HI-6 24和72 h对局部中毒膈肌胆碱酯酶均没有重活化作用,在光镜下观察不到棕褐色椭圆形的运动终板;而膈肌局部梭曼中毒1和10 min后,全身给予HI-6对局部中毒膈肌胆碱酯酶有明显的重活化作用,在光镜下可见到肌纤维上又出现了棕褐色椭圆形的运动终板。结论HI-6全身给药对早期膈肌局部中毒的神经运动终板胆碱酯酶有重活化作用。

HI-6对正常及梭曼抑制大鼠离体膈神经-膈肌标本收缩功能的影响

目的 探讨HI 6对抗梭曼中毒所致呼吸抑制重活化作用外的其他可能作用机制。方法 采用MS 30 2三道生理记录仪 ,建立大鼠离体膈神经 膈肌收缩标本 ,观察HI 6对梭曼中毒膈神经 膈肌标本收缩功能的影响。结果 ①梭曼 (2mg·L- 1)中毒后 ,膈肌收缩功能明显下降 ,中毒 10min内强直收缩曲线下面积下降至最低点 ,且在 3h内无明显恢复。②梭曼中毒前给予不同浓度的HI 6 (0 .0 1,0 .1,1.0mmol·L- 1) ,发现HI 6 (0 .1,1.0mmol·L- 1)对梭曼中毒所致膈肌强直收缩具有明显保护作用 ,且保护作用随着浓度的增加逐渐增强。③梭曼中毒后再给予HI 6 (0 .0 1,0 .1,1.0mmol·L- 1) ,发现 0 .0 1mmol·L- 1HI 6对中毒大鼠离体膈肌收缩功能无任何拮抗作用 ;当浓度增至 0 .1mmol·L- 1时 ,对膈肌强直收缩有一定的拮抗作用 ,但无统计学意义 ;但 1.0mmol·L- 1HI 6可显著对抗梭曼中毒所致膈肌收缩功能下降。结论 HI 6对梭曼中毒所致大鼠离体膈神经 膈肌收缩功能抑制具有明显拮抗作用 ,提示HI

双吡啶单肟HI-6药代动力学的动物种间相关性

给5种哺乳动物iv双吡啶单肟HI—6 20mg/kg,其药物代谢动力学均呈二室开放模型,部分药动学参数可表示为体重的指数函数。将5种动物的采血时间转换为生理等价时间,建立了预测人血浆中HI—6浓度的经验函数式。经人体资料验证,预测值与实测值基本一致。

HI-6和阿托品并呼吸机治疗氧化乐果中毒呼吸肌麻痹的实验研究

目的 探讨不同剂量HI- 6和阿托品联合呼吸机治疗氧化乐果中毒所致呼吸肌麻痹的疗效。方法 实验大鼠给予 2LD50 的氧化乐果染毒 ,以 1 0mg/kg阿托品对抗胆碱能症状。当大鼠出现呼吸频率减慢、呼吸困难时即行气管插管并辅助机械通气。A组阿托品继续原剂量治疗 ,B、C、D组HI- 6依次按50mg/kg、 80mg/kg、 1 0 0mg/kg于呼吸机治疗即刻及治疗后 1、 2、 3h肌肉注射 ,阿托品减至首剂量的 1 / 3～2 / 3 ,以维持阿托品化为度。经联合治疗 1、 2、 3h后试行脱机 ,以任何一次脱机超过 60min视为联合治疗成功。一次脱机后大鼠存活超过 60min或第 3次脱机后迅速死亡 ,均需取游离膈神经膈肌标本经MS - 30 2生理药理分析仪作膈肌功能测定。结果 A组膈肌功能恢复不佳 ,无一只大鼠脱机成功 ;B、C两组膈肌功能恢复良好 ,3h脱机成功率分别为 80 %和 60 % ,明显高于A组 (P <0 0 1 )。D组膈肌功能测定虽较好 ,但脱机成功率很低。外加乙酰胆碱 (ACh)后 ,B、C、D组膈肌功能均随时间延长而逐渐变小。结论 只有适量HI- 6联合阿托品并辅助呼吸机治疗氧化乐果中毒所致的呼吸肌麻痹 ,才能加速中毒大鼠膈肌功能恢复 。

HI-6复方救治有机磷和氨基甲酸酯类农药中毒患者临床观察

双吡啶单肟HI-6,化学名为(吡啶-2-醛肟-1-1甲基)-(4-氨基甲酰基-吡啶-1-甲基)醚氯盐,〔1-(2-hydroxyiminomethyl-pyridinium)-2-(4-carboxyamido-pyridinium)

HI-6人体血清白蛋白纳米粒的制备及其对梭曼中毒小鼠脑AChE重活化作用评价

迅速恢复中毒乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)活性是神经性毒剂中毒救治最关键的环节.血脑屏障的存在限制了具有重活化作用的抗毒药物以有效治疗剂量进入中枢.本研究以已知重活化作用最强的重活化剂酰胺磷定(HI-6)为目标药物,通过去溶剂化法制备了人体血清白蛋白纳米粒,通过静电作用将HI-6分子装载在纳米粒表面,合成装载HI-6的人体血清白蛋白纳米粒;在斑马鱼及神经性毒剂梭曼染毒小鼠上,对药物穿透血脑屏障能力及中枢中毒AChE重活化作用进行了评价.结果表明,装载HI-6人体血清白蛋白纳米粒在物理表征上符合纳米药物基本特征;相对于自由HI-6,HI-6人体血清白蛋白纳米粒能够透过血脑屏障,并将中枢中毒AChE活性提升2倍以上,表明人体血清白蛋白纳米粒成功携带HI-6分子进入中枢.本文建立了一种无毒、高效、小尺寸中枢靶向性纳米粒的制备方法,基于该方法制备的纳米重活化剂,在脑内可有效释放目标药物并迅速发挥解毒作用.

HI-6对梭曼中毒酶的重活化与功能间关系的研究

HI-6是属双季胺单肟类化合物。其结构式如下。这类化合物能对抗梭曼及沙林中毒,主要作用可能是对中毒酶的重活化。我们也曾提及HI-6是8个重活化剂中最强的一个。它既然能重活化组织中被抑制了的胆碱酯酶(GhE),那么,能否恢复组织器官被梭曼阻抑了的功能呢?79年的工作中见到大鼠梭曼膈肌局部中毒后终板新生的ChE与功能的恢复较密切相关,重活化的ChE与功能间的关系又如何呢?为了回答这些问题而进行本研究。

应用6-σ方法分析薄型覆铜板Hi-Pot试验失败原因与改进方案

应用6-σ方法、工具研究分析了薄型覆铜板Hi-Pot试验失败的原因并提出了针对性的改进方案。

6×His-tag在抗菌肽表达纯化中的应用及其对抗菌肽活性的影响

为方便抗菌肽的体外表达和纯化,以蝎子防御素为对象,在其编码基因末端加入6×His-tag,在酵母表达系统中表达,获得有活性的防御素Sd和融合蛋白Sd-His。进一步纯化、体外抑菌活性及热酸稳定性等试验发现,6×His-tag不但没有降低防御素的抑菌活性,反而有稍微的增强趋势。结果表明,6×His-tag可用于抗菌肽的融合表达且不影响其活性,为抗菌肽的表达纯化提供了一个更简便有效的方法。

利用N-端融合(His)_6标签观察家蚕核型多角体病毒泛素蛋白的亚细胞定位

为了给家蚕核型多角体病毒(BmNPV)泛素蛋白(UB)的功能研究提供亚细胞定位信息,利用Red重组系统和BmN-PV的bacmid系统,进行2次同源重组,成功地将(His)6标签编码序列引入到BmNPV泛素基因(ub)起始密码子ATG和第2个密码子CAA之间,使得表达的BmNPV UB的N-端融合(His)6标签。通过对(His)6的免疫荧光分析观察到BmNPV UB在BmN细胞中呈现3种方式的亚细胞定位:均匀地分布于整个细胞;主要分布于细胞核;分布于细胞核,同时在细胞质中出现零星的点分布。BmNPV UB具有多种不同的亚细胞定位方式,提示其功能的多样性。

缺血缺氧脑损伤大鼠IL-6和TNF-α的变化及其临床意义

目的:探讨缺血缺氧脑损伤大鼠白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的动态变化及其临床意义。方法:90只Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,再将实验组按造模后4h、8h、12h、24h和48h不同时点分为5个亚组。利用夹闭双侧颈总动脉,并进行缺氧的方法制备模型。以放射免疫分析(RIA)测定血清和脑组织中IL-6和TNF-α的变化。结果:造模后48h内,血清和脑组织中IL-6和TNF-α的水平呈动态变化。实验组中各亚组的两者含量均明显高于对照组(P<0.01或P<0.05)。血清和脑组织中两者分别在24h和12h时达到峰值。结论:缺血缺氧后不同时点IL-6和TNF-α的含量呈动态变化;两者可作为缺血缺氧后脑组织损伤程度及修复的临床指标。

新型1,6-二(1,2,4-三唑-1-基)己烷的Ag(Ⅰ)配合物合成及其对阴离子污染物吸附性能的表征

为了获得高效去除阴离子污染物的新型金属有机框架材料,首先制备1个具有良好柔韧性的1,2,4-三唑类多齿衍生物功能配体1,6-二(1,2,4-三唑-1-基)己烷(L),在此基础上采用水热合成法制备了1个结构新颖的Ag(Ⅰ)配合物,即{[Ag(H_2O)(L)]·NO_3}n,产率为53%.对该配合物的晶体学结构进行表征,并且使其与Cr_2O_7^(2-)和MnO_4^-发生阴离子交换,考查配合物去除阴离子污染物的性能.研究结果表明,配合物{[Ag(H_2O)(L)]·NO_3}n具有新颖的一维链状结构.吸附2种阴离子后配合物的颜色变深,而对应的阴离子溶液颜色变浅.吸附24 h后Cr_2O_7^(2-)和MnO_4^-浓度分别下降了53%和67%,配合物的NO_3^-离子浓度也出现降低.这一结果证实了该配合物确实能够通过离子交换反应有效捕获溶液中的Cr_2O_7^(2-)和MnO_4^-阴离子污染物.

新型真核表达质粒pcDNA6/myc-his-EGFP B的构建及其在重组基因表达中的应用(英文)

增强型绿色荧光蛋白(EGFP, enhanced green fluorescent protein)、myc抗原和6×His已在众多真核表达载体中用作重组蛋白的表达标记,EGFP能发出的绿色荧光,myc抗原能用相应的抗体检测,6×His能被相应的树脂特异吸附。但目前为止,没有一个质粒表达载体能够同时整合三者的功能。本研究构建了一个能够同时整合EGFP、myc抗原和6×His功能的新型真核质粒表达载体,我们将其命名为pcDNA6/myc-his-EGFP B。值得注意的是,为确保目的基因与EGFP基因融合表达后,融合表达产物各组成部分能够保持原有的生物活性,我们运用LINKER程序在EGFP基因的5’端设计了一段编码八肽的连接DNA序列。将一段含有人白细胞介素2(IL-2, humaninterleukin 2)信号肽编码序列的基因亚克隆进pcDNA6/myc-his-EGFP B的多克隆位点中,使之与EGFP、myc抗原和6×His融合表达,构建成质粒pMHES。用pcDNA6/myc-his-EGFP B和pMHES转染2.2.15细胞,48h后成功观察到绿色荧光;用pcDNA6/myc-his-EGFP B尾静脉注射Balb/c小鼠,8h后在小鼠肝脏冰冻切片中同样观察到绿色荧光。用同源建模软件Modeller8V2模拟IL-2与EGFP、myc抗原和6×His融合表达产物的三维结构,结果表明:IL-2、EGFP、myc和6×His各部分互不干扰,连接八肽具有一定的柔性。以上结果表明pcDNA6/myc-his-EGFP B可望作为外源基因在哺乳动物细胞中表达研究和基因治疗的新型载体。

苯基-(3,5-二叔丁基-4-羟基苄基)丙二酸二(1,2,2,6,6-五甲基-4-哌啶)酯的合成

以苯基丙二酸二乙酯、N-甲基-2,2,6,6-四甲基-4-哌啶醇和2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚为主要原料,合成了紫外线吸收剂苯基-(3,5-二叔丁基-4-羟基苄基)丙二酸二(1,2,2,6,6-五甲基-4-哌啶)酯。重点考察了苯基丙二酸二乙酯和N-甲基-2,2,6,6-四甲基-4-哌啶醇的酯交换反应、苯基丙二酸双(1,2,2,6,6-五甲基-4-哌啶)酯与4-羟基-3,5-二叔丁基苄基氯的烃基化反应。结果表明,微纳米碳酸钾具有较好的催化作用,产品总收率达到80%。化合物的结构通过1HNMR和13CNMR进行了表征。

重活化剂抗有机磷中毒直接作用机制探讨

目的 为明确重活化剂直接抗有机磷化合物中毒作用机制 ,并为指导临床合理用药提供实验室依据。方法 肺神经 膈肌标本制备 ,观察有机磷化合物中毒和筒箭毒碱中毒所致肌麻痹 ,重活化剂对抗效果。结果 ①重活化剂对梭曼 (2mg·L- 1)所致膈肌麻痹模型强直收缩面积的影响 ,随重活化剂使用剂量增大 ,时间的延长 ,中毒膈肌强直收缩功能逐渐恢复。且这种恢复过程中没有发现明显的胆碱酯酶重活化现象。②重活化剂 (1mmol·L- 1)对抗 2μmol·L- 1箭毒化膈肌模型单收缩有较好恢复作用 ,对强直收缩抑制无明显影响。③重活化剂 (1mmol·L- 1)对抗箭毒 (0 .7μmol·L- 1)致肌麻痹的强直收缩有明显的恢复作用。④膈肌在经过有重活化剂的浴槽中孵育后 ,再建立箭毒化膈肌模型所需的箭毒浓度 ,要比没有经过孵育的膈肌箭毒化所需浓度大。其中L 2 0 0 0最明显。HI 6和双复磷次之。结论L 2 0 0 0等重活化剂的抗有机磷化合物中毒作用 ,除对磷酰化胆碱酯酶的重活化作用外 ,还可以通过其直接作用发挥抗毒效果 ,重活化剂在此过程中的作用如何 。

以最小反应模型分析HI-----6抗骨骼肌烟碱受体的作用

以最小反应模型分析ＨＩ６抗骨骼肌烟碱受体的作用陈厚昌，白敦衍１，蒋毅萍（第一军医大学药理教研室，１计算机教研室，广州５１０５１５，中国）关键词ＨＩ６；骨骼肌；胆碱能受体；信使ＲＮＡ；非洲爪蟾；卵母细胞目的：研究１（２ｈｙｄｒｏｘｙｉｍｉｎｏｍ...

纳米化酰胺磷定对梭曼中毒小鼠乙酰胆碱酯酶的重活化作用

目的：评价比较基于不同载药模式的纳米化酰胺磷定（HI-6）对梭曼中毒小鼠外周及中枢乙酰胆碱酯酶（AChE）的重活化作用。方法制备以人血清白蛋白纳米粒（HSA NP）为载体挂载 HI-6（HSA-HI-6 NP）、聚乳酸-羟基乙酸纳米粒（PLGA NP）为载体包裹 HI-6（PLGA-HI-6 NP）及纳米多孔硅球（MSN）为载体吸附 HI-6（MSN-HI-6）的3种纳米化 HI-6。电镜进行物理表征；测定体外释药速率。观察梭曼染毒（120μg·kg -1，sc）小鼠 iv 给予含恒量 HI-622 mg·kg -1的3种纳米化 HI-6对外周及中枢中毒 AChE 的重活化作用。结果3种纳米载体均符合纳米药物基本特征。体外释药速率为 HI-6＞HSA-HI-6 NP ＞MSN-HI-6＞PLGA-HI-6 NP。对中毒小鼠全血 AChE 的重活化作用结果显示给予 HSA-HI-6 NP，MSN-HI-6及HI-6组中毒小鼠全血 AChE 的重活化率在20％～30％，组间比较无显著差异；但均显著高于 PLGA-HI-6 NP（6．2％）给药组（P ＜0．01）；在中毒小鼠脑 AChE 的重活化作用结果中，HSA-HI-6 NP 组重活化率（15．3％）显著高于 PLGA-HI-6 NP（3．3％）组及 HI-6组（6．3％）（P＜0．01）；MSN-HI-6组（10．2％）则仅显著高于 PLGA-HI-6 NP（3．3％）给药组（P ＜0．01）。结论不同载药模式的纳米化 HI-6对外周及中枢中毒AChE 的重活化效率存在显著差异，HSA-HI-6 NP 对外周及中枢中毒 AChE 均具较高重活化作用。