三氧化二砷对体外人小肠癌HIC细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨三氧化二砷(ATO)对体外人小肠癌HIC细胞增殖及凋亡的影响。方法:复苏冻存的人小肠癌HIC细胞培养至对数生长期,分别加10、15、20、40及60μmol/L ATO作为实验组,等量磷酸盐缓冲液(PBS)作为空白对照组,采用实时无标记细胞分析(RTCA)系统连续120 h动态监测各组人小肠癌HIC细胞的细胞指数(CI)值,并计算24和36 h时的细胞增殖抑制率;取对数生长期的人小肠癌HIC细胞,以分别加入10、15、20及40μmol/L ATO作为实验组,加等量PBS作为空白对照组,采用流式细胞仪检测各组人小肠癌HIC细胞48 h的凋亡情况。结果:ATO抑制人小肠癌HIC细胞增殖的抑制率随浓度及作用时间的延长而增高(P<0.05),ATO诱导人小肠癌HIC细胞的凋亡率随浓度的增加而增高(P<0.05)。结论:ATO可以在体外抑制人小肠癌HIC细胞的增殖,并诱导细胞凋亡的发生。

三氧化二砷对体外人小肠癌HIC细胞增殖的作用和机制

目的探讨三氧化二砷(ATO)对体外人小肠癌HIC细胞增殖的作用及其机制。方法取处于对数生长期的人小肠癌HIC细胞,5个实验组分别用10、15、20、40及60μmol/L的ATO处理,用等量磷酸盐缓冲液(PBS)处理作为空白对照组,采用实时无标记细胞分析(RTCA)系统120 h连续监测各组人小肠癌HIC细胞的细胞指数(CI)值变化;取处于对数生长期的人小肠癌HIC细胞,4个实验组分别用10、15、20及40μmol/L ATO处理,等量PBS处理作为空白对照组,采用Western blot检测各组人小肠癌HIC细胞多克隆抗体糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)的表达。结果实验组经过10、15、20、40及60μmol/L ATO处理后的人小肠癌HIC细胞CI值均较空白对照组明显下降,其下降趋势随着ATO浓度的增加更明显;10、15、20及40μmol/L ATO组人小肠癌HIC细胞GSK-3β、cyclin B1、cyclin D1及c-Myc等相关周期蛋白的表达水平均较空白对照组均下降(P<0.05),且随着ATO浓度的增高,周期相关蛋白的表达水平越低。结论 ATO可抑制体外小肠癌小肠癌HIC细胞的增殖,其机制可能与相关周期蛋白cyclin B1、cyclin D1、GSK-3β及c-Myc的表达下调有关。

IL-24融合蛋白表达载体的构建及其对人小肠癌细胞的生长抑制作用

目的:构建人白细胞介素-24(IL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达．研究IL-24融合蛋白对人小肠癌细胞(HIC)的生长抑制作用．方法:用PCR从质粒TRAP-hIL-24中扩增人 IL-24 cDNA片段,并将该片段插入DGEX-KG 原核表达载体中,实现插入基因的融合表达．用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定．提取并纯化IL-24融合蛋白,以不同浓度与 HIC细胞共培养72 h,同时设立相应浓度梯度的GST蛋白组、HIC细胞对照组及空白孔,采用MTT法检测各组人小肠癌细胞的体外增殖结果:酶切结果证实,成功地构建了pGEX- KG-IL-24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr) 同预期值相一致,融合蛋白为Mr53 000,GST 蛋白为Mr29 000．IL-24融合蛋白以浓度依赖性的关系抑制HIC细胞的生长,并且在20和40 mg／L时的抑制率明显高于GST蛋白．结论:成功地构建了重组表达载体pGEX-KG- IL-24,并在E.coli BL21中表达．IL-24融合蛋白对HIC细胞生长有抑制作用．