Cytotoxic and inhibitory activity of ceramide on cancer cell lines

The inhibitory activity of ceramide on cancer cells was evaluated and its cytotoxicity on different cancer cell lines was measured. Ceramide was separated from bovine brain and spinal cord, and extracted by organic solvents. The crude extract was purified by using silicic acid column. Detection and identification of purified extract were carried out by using three assays: visualization, spectrophotometry and infrared. Cytotoxic effect of different concentrations (7, 15, 30 and 60 μM) of ceramide on HEp-2, RD, AMGM5, REFAM3 and AMN3 cancer cell lines was studied. Results showed that ceramide at 30 μM imposed cytotoxic activity on all cancer cell lines especially on AMGM5. Effect of ceramide at 30 μM on cell division of human lymphocyte was also examined. Significant reductions in mitotic and blast indices were observed. In addition, No genotoxic effects or chromosomal aberration were detected in lymphocyte chromosomes when ceramide was tested in vitro.

动物细胞系的染色体组型与遗传变异率分析

在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞库，即７种动物肾细胞系（Ｆ－８１、ＣＲＦＫ、ＭＤＣＫ、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－２、ＭＡ－１０４、ＢＨＫ－２１）的种子库和工作库的基础上，通过细胞染色体组型、Ｇ带核型、染色体数目变异率、结构畸变率分析，了解７种细胞系传代培养不同代次的染色体变异情况。以相应的细胞株皮下接种裸鼠形成肿瘤实验、软琼脂细胞克隆形成率与植物凝集素作用下细胞凝集实验为对照，筛选出无致癌／致瘤性、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的细胞系（Ｆ－８１、ＣＲＦＫ、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－２）或极低致癌性的ＭＤＣＫ细胞系用于制苗，发现肿瘤细胞系高变异率株可在裸鼠体内快速选育成功。细胞系染色体遗传特征决定致瘤性质并具有种属特异性，得到一些１００％成瘤和１００％不成瘤的细胞株并探讨了与染色体组型的关系。对于肿瘤的发病机理及实验治疗，都是非常好的模型。一些细胞系不仅成瘤而且还可转移（致恶性横纹肌样瘤的ＢＨＫ－２１和Ｖｅｒｏ细胞株），其他致瘤细胞株只成瘤不转移或不明显转移。

多色荧光原位杂交应用于食管鳞状细胞癌早期诊断的探讨

背景与目的:染色体畸变检测已被用作一些癌症的诊断指标,但食管癌迄今尚无染色体水平的标志。本研究旨在分析食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)及其癌前病变部分染色体畸变情况,探讨多色荧光原位杂交技术(multicolor fluorescence in situ hybridization,M-FISH)辅助ESCC早期诊断及癌前病变风险预警的可行性。方法:选取文献报道最常发生改变的3、8、10、12、17和20号染色体,用其特异性着丝粒探针,采用M-FISH对来自113个病例的124份食管病变组织间期细胞核进行分析,统计各染色体的畸变情况,并分析其与ESCC染色体增加(增益)与临床病理参数之间的关系。结果:3、8、10、12、17和20号染色体在ESCC中增益畸变率分别为80.9%(93/115)、81.0%(94/116)、70.5%(79/112)、75.9%(85/112)、68.7%(79/115)和82.8%(48/58),与各项临床参数之间的相关性均无统计学意义(均P>0.05)。同时,6个染色体在ESCC癌前病变中的增益畸变率分别为62.5%(5/8)、75.0%(6/8)、62.5%(5/8)、87.5%(7/8)、87.5%(7/8)和100%(3/3);在早期ESCC的增益畸变率分别为80.0%(12/15)、93.8%(15/16)、71.4%(10/14)、64.3%(9/14)、75.0%(12/16)和63.6%(7/11)。结论:3、8、10、12、17及20号染色体在ESCC及其癌前病变组织中均存在较高的染色体数目畸变率;M-FISH检测有助于早期诊断ESCC,并可能作为ESCC癌变风险预警的一种方法。

硫芥诱导小鼠染色体畸变和微核形成作用的研究

目的 研究硫芥对中国仓鼠肺成纤维细胞 (chinesehamsterfibroblastcellline ,CHL)染色体的诱变作用及对小鼠骨髓微核率的影响。方法 培养CHL细胞 (±S9) ,以不同浓度硫芥处理 2 4h后常规方法制备染色体 ,观察畸变类型并计算畸变率。KM小白鼠皮下注射硫芥染毒 ,2 4h后处死动物 ,取双侧股骨 ,行骨髓涂片和姬姆萨染色 ,计数含微核嗜多染红细胞(polychromaticerythrocyte ,PCE)数。结果 硫芥处理的CHL细胞染色体畸变率显著增加 ,出现裂隙、断裂、缺失、多倍体等多种类型畸变 ,并呈量效依赖趋势。S9不影响硫芥诱导的CHL细胞染色体畸变形式和畸变率。与对照组比较 ,注射硫芥小鼠骨髓PCE微核率显著增加 (P <0 .0 1) ,硫芥剂量越大 ,微核形成率越高。结论 硫芥能直接诱发细胞染色体损伤。

裸鼠高致瘤性人白血病细胞系染色体核型分析

目的 :探讨人白血病细胞系 K5 6 2 - n和 HL6 0 - n在裸鼠体内高致瘤性的细胞遗传学机制。 方法 :对裸鼠体内致瘤性不同的 K5 6 2细胞、K5 6 2 - n细胞及其衍生的各克隆株和 HL- 6 0细胞、HL6 0 - n细胞及其衍生的各克隆株 ,进行染色体核型分析。 结果 :K5 6 2细胞染色体数目变异范围为 44～ 71,干系核型为亚三倍体 ,染色体众数为 6 2± 2 ;裸鼠高致瘤性 K5 6 2 - n细胞系 ,干系为近二倍体细胞 ,染色体众数为 46 ;分析比较致瘤性不同的 K5 6 2、K5 6 2 - n细胞及其无致瘤性克隆株 K5 6 2 - n/ A的核型 ,发现 1、2、11、12、16、18、2 0、2 1、2 2等染色体的改变与 K5 6 2 - n细胞系的致瘤性增高有关。 HL- 6 0细胞染色体数目变异范围为 38～ 71,干系为近二倍体细胞 ,染色体众数为 45± 1;裸鼠高致瘤性 HL6 0 - n细胞系 ,干系核型转变为近三倍体 ,其染色体众数为 6 3± 1,HL6 0 - n细胞系衍生的 HL6 0 - A、HL6 0 - B、HL6 0 - E、HL6 0 - F各克隆株也都是近三倍体 ;分析比较 HL- 6 0细胞系及HL6 0 - n细胞系不同致瘤性克隆株的染色体核型变化 ,发现 Mar3、19、2 1、2 2、5号等染色体的变化与 HL6 0 - n细胞的高致瘤性相关。 结论 :K5 6 2 - n、HL6 0 - n细胞系致瘤性的增高涉及多条染色体的复杂变化。

喉鳞状细胞癌Hep-2细胞系常规及高分辨染色体分析

目的 :探讨喉鳞状细胞癌 Hep- 2细胞系染色体畸变及其核型特征 ,认识喉癌的细胞遗传学改变与其发病机制的相关性。方法 :应用常规和高分辨 G显带方法进行核型分析。结果 :Hep- 2细胞系的染色体数目变化于 5 4～ 84条之间 ,众数为 6 9～ 74条。可识别其结构的稳定的标记染色体为 13条 ,部分核型中存在双微体 ,是基因扩增的细胞遗传学标志。结论 :喉癌 Hep- 2细胞系属超三倍体细胞 ,存在染色体数目和结构畸变并具有稳定的标记染色体及基因扩增。结构畸变涉及易位、缺失和等臂染色体。染色体断裂重接导致染色体重排 ,3、5、6和

环磷酰胺、噻替哌诱发人支气管上皮细胞的染色体畸变

目的与方法 :以永生化人支气管上皮细胞 (BEAS - 2B)受环磷酰胺、噻替哌诱导并发生癌性转化的细胞为模型 ,运用染色体G—显带技术 ,观察环磷酰胺、噻替哌的遗传毒作用引起的细胞转化过程中的染色体动态畸变。结果 :BEAS - 2B细胞染色体众数 46条 ,近二倍体 ,核型稳定 ,携带有M1,M2 ,M3三个标志染色体。环磷酰胺转化细胞 (BEAS -CP)为二倍体核型 ,丢失了 1个 14号染色体 ,增加了M 4异常染色体 ,该畸变可能与细胞转化的始动 ,促进和进展有关。噻替哌转化细胞 (BEAS-T)在培养过程中渐趋多倍体细胞 ,15代以后部分细胞的 14和 2 1号染色体各丢失 1条 ,BEAS -T 2 3代在软琼脂上形成克隆的细胞 (BEAS -ST)是多倍体细胞 ,并具有高频率的非稳定性畸变 ,BEAS -T 2 5代时为 3% ,BEAS -ST为 34 % ,多倍体背景上出现 2对巨型三着丝粒染色体。结论

染色体畸变与膀胱移行细胞癌临床病理相关性研究

目的探讨通过多色荧光原位杂交(Multicolor Fluorescence in Situ Hybridization,M-FISH)检测3、7、9、17号染色体数目畸变情况与膀胱移行细胞癌(Bladder Transition Cell Carcinoma,BTCC)临床分期与病理分级的关系。方法采用3、7、17号染色体着丝粒探针和9p21区带探针对46例BTCC尿脱落细胞进行M-FISH检测,得出其敏感性,并分析染色体畸变与BTCC生物学特性的相关关系。结果①M-FISH的灵敏度为73.90%(34/46)。②M-FISH在肿瘤Ta^T1、T2~T4的阳性率分别为50.00%和84.38%,其阳性率与BTCC临床分期呈正相关性(P<0.05)。③M-FISH在肿瘤G1、G2、G3的阳性率分别为42.86%、80.00%和100.00%,其阳性率与BTCC病理分级呈正相关性(P<0.05)。④M-FISH在复发性BTCC的敏感性为83.33%(10/12)。结论使用M-FISH技术检测尿脱落细胞3、7、9、17号染色体数目畸变在无创性辅助诊断BTCC,分析其浸润深度和恶性程度及对预后复发的监测具有重要的参考价值。

猪松果体提取液对雌激素诱导的小鸡生殖器官代谢的作用

猪松果体提取液对雌性小鸡输卵管和雄性小鸡睾丸核酸和蛋白质合成均有刺激作用．猪松果体提取液还可加强雌二醇对小鸡输卵管的刺激，削弱雌二醇对小鸡睾丸的抑制作用．猪松果体提取液和雌二醇共同作用也会加速小鸡松果体蛋白质的合成．

甲磺酸丹诺沙星诱发中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)染色体畸变试验

采用体外培养中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)对喹诺酮类新药甲磺酸丹诺沙星(Danofloxacinmesylate)的诱变性进行了检测,旨在对该药的遗传毒性作出评价,为安全用药提供数据。结果表明:加或不加代谢活化系统S9,甲磺酸丹诺沙星对CHL细胞未见致染色体畸变作用。

JAR细胞染色体着丝粒点变异的研究

目的探讨染色体着丝粒点(Cd)的变异与JAR细胞染色体非整倍性畸变的关系。方法肿瘤细胞株传代后用常规方法制备染色体,用直接法制备胚胎绒毛组织染色体标本,采用Cd-核仁组织区(NOR)同步银染分析技术研究JAR细胞染色体Cd的变异。结果 JAR细胞染色体Cd缺失率为1.33%、Cd迟滞复制率为1.23%、小Cd率为1.73%、Cd-NOR融合率为0.62%,与健康人胚胎绒毛细胞染色体Cd相比较,JAR细胞染色体Cd缺失、Cd迟滞复制显著升高(P<0.0125),而小Cd、Cd-NOR融合其差异无统计学意义。结论 JAR细胞染色体非整倍性畸变可能主要源于Cd缺失、Cd迟滞复制。

人视网膜母细胞瘤细胞系SO-Rb50的建立及其生物学特性

从54例视网膜母细胞瘤(Rb)实体瘤体外培养研究中,在我国首先建成一个人类Rb连续细胞系:SO-Rb50,至今已连续传代32个余月,275代.形态学观察、免疫组化反应、染色体分析及裸小鼠皮下移植成瘤,均证实SO-Rb50细胞系是视网膜母细胞瘤细胞系.

人T淋巴瘤细胞系HTL－90的细胞遗传学研究

本文采用Ｇ显带技术对人Ｔ淋巴瘤细胞系ＨＴＬ－９０作了细胞遗传学研究。该细胞系染色体众数为４７，在所有细胞中均发现多数染色体结构和数目异常。本文对Ｔ淋巴瘤细胞系某些特定染色体作了分析和文献复习，１１号染色体长臂的易位或缺失可能是Ｔ细胞淋巴瘤的特征性染色体改变之一。

膀胱移行细胞癌术后复发与染色体畸变的相关性研究

目的探讨膀胱移行细胞癌(TCCB)术后复发与染色体畸变的相关性及其临床意义。方法 35例TCCB组织(复发19例、未复发16例)采用荧光原位杂交技术(FISH)检测,观察其3、7、17号染色体及9号染色体p16基因的畸变情况。另选10例癌旁正常组织为对照。结果 19例复发性TCCB组织中,3、7、17号染色体及9号染色体p16基因的畸变率分别为42.11%、57.89%、84.21%和89.47%;在16例未复发性TCCB中分别为31.25%、37.50%、43.75%和50.00%。17号染色体和9号染色体p16基因位点的畸变率TCCB复发者明显高于未复发者(P均<0.05),其畸变与TCCB复发呈正相关(r分别为0.391和0.399,P均<0.05);在复发性TCCB的G1级与G2～3级组织中7号染色体异常差异有统计学意义(P<0.05),其畸变与TCCB组织分级呈正相关(r为0.565,P<0.05);各染色体异常与TCCB病理分期、复发次数均无相关性(P均>0.05)。结论 TCCB术后复发与9号染色体p16基因及17号染色体畸变呈正相关,复发性TCCB中7号染色体畸变与TCCB组织分级呈正相关。TCCB患者术后定期随访并行FISH监测,对于及早发现病变并及时治疗具有重要临床意义。

用FISH技术检测肝癌及喉癌细胞系染色体畸变

目的探讨肝癌及喉癌细胞系染色体畸变。方法选用９种染色体特异性探针，分别对肝癌及喉癌细胞系的染色体进行荧光原位杂交检测。结果在两种细胞系中，这些探针均呈现异常的杂交信号。肝癌细胞系中主要是结构畸变，而喉癌细胞系中染色体数目畸变占主要地位。两种细胞系中染色体畸变所涉及的范围极广，而且畸变类型极为复杂。结论与常规的细胞遗传学分析方法比较，荧光原位杂交技术具有快速、准确、灵敏等优点。

两个人食管癌细胞系的建立及染色体分析

目的结合传统细胞遗传学和新近发展起来的分子细胞遗传学方法，对１９８７年我室建立的两例食管癌细胞系ＥＣ８７１２和ＥＣ８７３３进行细胞遗传学分析。方法采用组织块培养法，用１．５％牛血清的１９９培养液，成功地建立了这两个细胞系，做了初步的生物学鉴定，并采用染色体Ｇ显带、染色体荧光原位杂交和比较基因组杂交等方法进行了细胞遗传学和分子遗传学的检测。结果发现两个细胞系经异种接种均形成移植性肿瘤，染色体为非整倍体，他们均有Ｙ染色体丢失、１ｐ缺失、２ｑ易位、５ｐ扩增，ＥＣ８７３３有８ｑ、１３ｑ扩增，ＥＣ８７１２有１７ｐ缺失。结论提示检出的这些畸变可能与肿瘤的发生、发展有关。

体内外染色体畸变实验检测朱砂的遗传毒性

目的：用仓鼠的骨髓细胞与CHL细胞经行体内外染色体畸变实验评价朱砂的遗传毒性。方法：体内染色体畸变实验用毛足属仓鼠给予朱砂混悬液（2.0,4.0,8.0 g·kg-1）连续灌胃5 d,处死前2 h腹腔注射秋水仙素。处死后取骨髓细胞制备染色体。油镜下观察每只动物骨髓细胞的有丝分裂指数和100个中期分裂相细胞的畸变类型。CHL细胞染色体畸变实验用朱砂浸出液终质量浓度为6.3,12.5,25.0 g·L-1作用于CHL细胞,培养24,48 h,终止培养前4 h加入秋水仙素。收获细胞,制备染色体,油镜下观察CHL细胞的200个中期分裂相细胞的畸变类型。结果：（1）与空白组比较,朱砂浸出液12.5,25.0 g·L-1给药组的CHL细胞染色体畸变率均升高（P〈0.05,P〈0.01）,且有明显的量效关系。（2）仓鼠体内实验与朱砂血清给药CHL细胞的畸变率无显著性差异。结论：（1）在本实验中朱砂浸出液在12.5 g·L-1以上时能致体外CHL细胞染色体畸变,而朱砂混悬液在8.0 g·kg-1下仓鼠体内染色体畸变实验未出现阳性结果。（2）仓鼠体内染色体畸变实验可作为研究中药新药遗传毒性评价实验方法之一。

雄黄致体内外染色体畸变

目的:用仓鼠体内染色体畸变试验和中国仓鼠肺细胞CHL细胞染色体畸变试验评价雄黄的遗传毒性。方法:体内染色体畸变试验用毛足属仓鼠连续ig 5 d给予33.25,66.5,133 mg.kg-1剂量雄黄悬浊液,处死前2 h ip秋水仙素。处死后取骨髓细胞制备染色体。油镜下观察每只动物骨髓细胞的有丝分裂指数和100个中期分裂相细胞的畸变类型。CHL细胞染色体畸变试验用雄黄浸出液终质量浓度为0.15,0.3,0.6 g.L-1作用于CHL细胞,培养24 h或48 h,终止培养前4 h加入秋水仙素。收获细胞,制备染色体,油镜下观察CHL细胞有丝分裂指数和200个中期分裂相细胞的畸变类型。结果:①雄黄265.0 mg.kg-1组和雄黄530.0 mg.kg-1组ig给药和雄黄浸出液(1.2,2.4 g.L-1)作用于CHL细胞显示有明显的抑制有丝分裂作用。②与阴性对照组比较,雄黄ig给药仓鼠体内染色体畸变率和雄黄体外给药CHL细胞染色体畸变率均显著升高,差异有极显著意义,且有明显的量效关系。但体内试验的畸变率低于体外试验。③雄黄给药后CHL细胞染色体畸变试验中可见较多的染色体断片,而仓鼠体内染色体畸变试验中未发现,这可能与体内外药物作用的方式不同。结论:①雄黄能致体内外细胞染色体畸变,具有遗传毒性。②仓鼠体内染色体畸变试验可作为中药新药遗传毒性评价试验组合的方法之一。

高转移卵巢上皮性癌基因表达谱中差异表达基因与染色体拷贝数变异的相关性

目的采用基因芯片技术研究高转移卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞株HO-8910PM和正常卵巢上皮组织基因表达谱的差异表达基因及其与染色体拷贝数变异的相关性。方法利用全基因组表达谱芯片、单核苷酸多态性（SNP）扫描芯片分别检测高转移卵巢癌和正常卵巢上皮组织之间的差异表达基因以及染色体拷贝数变异情况，并采用生物信息学方法对检测结果进行相关性分析。筛选部分染色体片段和差异表达基因，用荧光原位杂交技术和实时荧光定量PCR技术进行验证。结果通过对表达谱芯片和SNP扫描芯片整合分析显示，高转移卵巢癌细胞中有379个SNP位点，共385个差异表达基因（其中有6个SNP位点发现各有2个基因）。这些SNP位点染色体拷贝数扩增的有240个，缺失的有139个。染色体定位分析发现，385个差异表达基因散在分布于各条染色体上，其中3号染色体最多，有34个（占8．8％，34／385）；其次是2、9、10、1和11号染色体分别有33个（8．6％）、28个（7．3％）、27个（7．0％）、25个（6．5％）、24个（6．2％）；6和12号染色体各有23个（6．0％）；4和5号染色体各有22个（5．7％）；这10条染色体占总数的67．8％（261／385）。基因的功能分类：385个差异表达基因属于酶及其调控子基因的最多（99个，占25．7％），其次是信号传导基因（54个，占14．0％），第3类是核酸结合基因（50个，占13．0％），第4类是蛋白结合基因（36个，占9．4％）；以上4大类共占差异表达基因总数的62．1％（239／385）。结论肿瘤的转移是多基因共同作用的结果。4大类（酶及其调控子、核酸结合、蛋白结合、信号传导）差异表达基因是今后研究卵巢癌转移相关的重要基因。1、2、3、4、5、6、9、11和12号染色体是值得关注的转移相关位点所在的染色体。

茶多酚对^(60)Co γ辐射诱发CHL细胞染色体畸变和微核形成作用的影响

目的研究茶多酚(tea polyphenols,TP)对60Coγ辐射诱发中国仓鼠肺成纤维细胞(Chinese hamster fibroblast cell line,CHL)染色体畸变和小鼠骨髓微核形成作用的影响。方法将CHL细胞(±S9)分为空白对照组、阳性对照组、辐射模型组,TP保护组(分别加TP12.5、25、50μg/ml)6组,除空白和阳性对照组外均给予2 Gy ^(60)Coγ照射后继续培养24 h,常规制备染色体,观察畸变类型并计算畸变率。50只KM小鼠分为正常对照组、辐射模型组,TP保护组(高、中、低剂量分别于照射后给TP725、145、29 mg/kg灌胃),每组10只,给药后14天给予6 Gy ^(60)Coγ照射,24 h后处死动物,取双侧股骨,行骨髓涂片和姬姆萨染色,计数含微核嗜多染红细胞(polychromatic erythrocyte,PCE)数。结果中、高剂量组TP(25、50μg/ml)可显著降低^(60)Coγ诱发的CHL染色体畸变率,S9不影响CHL细胞染色体畸变形式和畸变率。高、中剂量TP保护组(725、145 mg/kg)小鼠PCE微核率与辐照模型组相比较,相差显著(P<0.05)。结论茶多酚能部分对抗^(60)Coγ辐射诱发的CHL细胞染色体畸变和微核形成,对染色体损伤具有保护作用。