花生COP1基因的克隆及表达特征分析

为了探究花生中COP1基因的序列及表达特征,本研究从花生中克隆获得2个COP1基因,分别命名为AhyCOP1a和AhyCOP1b,以此为基础进行了相关分析。结果显示,AhyCOP1a和AhyCOP1b分别长2103 bp和2049 bp,均含有13个外显子和12个内含子。聚类结果显示AhyCOP1a和AhyCOP1b与双子叶作物的COP1基因聚成一类,且分别与AduCOP1和AipCOP1亲缘关系最近,表明AhyCOP1a和AhyCOP1b的进化分别始于花生野生种Ar⁃achis duranensis和A.ipaensis。此外,AhyCOP1a和AhyCOP1b分别有6个和7个WD40重复基序。各类物种的COP1基因在N端相似度较低,在C端WD40结构域部分相似性较高,表明WD40结构域是COP1基因的主要核心功能区域。组织表达结果显示,AhyCOP1a和AhyCOP1b在地上部的表达显著高于地下部,花中最高,其次为叶和茎。但AhyCOP1a在地下组织的表达量在显著高于AhyCOP1b,暗示AhyCOP1a在地下组织发育过程中的作用更大。此外还发现光照可以促进花生COP1基因的表达,表明花生中COP1基因的表达受光照显著影响。总之,本研究结果初步明确了花生中COP1基因的序列及表达特征,为后续深入探究COP1基因的分子功能奠定了基础。

鳙IGFBP1分子特征及基因表达模式研究

从鳙(Hypophthalmichthys nobilis)基因组中获得胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1,insulin-like growth factor binding protein 1)基因序列,并对其蛋白质理化和进化特征以及基因表达模式进行分析。鳙IGFBP1开放阅读框(ORF)为789 bp,编码262个氨基酸,蛋白分子量为28139.23 u,等电点(pI)为7.42,具有1个信号肽但不具有跨膜结构,推测其为亲水性分泌蛋白。鳙IGFBP1蛋白具有两个保守的IB和TY结构域,与鲤形目鱼类IGFBP1有较高的序列同源性。鳙IGFBP1的基因时空表达分析结果显示:体节期表达量显著上调,出膜后表达水平迅速下降;成鱼肝脏中的表达量最高,皮肤、肠、性腺等组织也有一定的表达,其余组织的表达量较低。对群体中具有显著生长差异的个体进行IGFBP1表达分析,结果显示在极大个体与极小个体的肝脏组织中具有极显著性差异(P<0.01),提示该基因在鳙快速生长中发挥了正调控作用。研究结果对鳙生长调控分子机制研究及遗传改良研究具体理论和潜在应用价值。

猪萨佩罗病毒HNHB-01株VP1基因的表达与分子特征

猪萨佩罗病毒(PSV)VP1蛋白是位于病毒粒子表面的结构蛋白,发挥主要的抗原效应。为了弄清PSV HNHB-01株VP1基因的表达与分子特征,本研究设计针对VP1基因的特异性引物,通过RT-PCR扩增获得VP1基因,并重组到真核表达载体pCAGGS上,经Western blot、间接免疫荧光鉴定,成功表达VP1蛋白。随后基于PSV HNHB-01株全基因序列以及VP1基因序列与其他参考毒株的基因序列构建遗传进化树,分析遗传进化关系。结果表明:实验室分离的HNHB-01株与2017年分离的HNXX-01株亲缘关系最近,与日本株JPSV-1315关系接近;HNHB-01 VP1基因与国内2016-2017年流行的毒株HNXX-01、PSV-A2、JXXY-a2的VP1基因高度同源,与国外2009年流行的日本毒株JPSV1315的VP1基因亲缘关系较近;HNHB-01株VP1氨基酸与HNXX-01株VP1氨基酸同源性最高,同源性为99.32%。三级结构分析表明,VP1蛋白存在3条位于蛋白结构外侧的抗原表位区,对应的氨基酸序列分别为20~30 aa、90~100 aa和265~275 aa。本研究为PSV感染的诊断与预防提供依据,并为今后研究VP1基因的功能和开发疫苗奠定基础。

涎腺腺样囊性癌组织中PCNP、TGF-β1表达及与其临床病理特征的相关性分析

目的 探讨涎腺腺样囊性癌(SACC)组织中PCNP、转化生长因子β1(TGF-β1)表达及与其临床病理特征的关系。方法 选取58例SACC患者,所有患者行手术治疗,术中采集癌组织及癌旁正常组织送检,采用免疫组化SP染色法检测两种组织内PCNP、TGF-β1阳性表达情况,并分析PCNP、TGF-β1表达与患者年龄、性别、体质量指数、肿瘤位置、淋巴结转移、肿瘤大小、神经侵犯的关系。结果 癌组织内PCNP、TGF-β1阳性表达率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);PCNP阳性、TGF-β1阳性患者肿瘤大小≥3 cm、神经侵犯占比高于PCNP阴性、TGF-β1阴性者,差异有统计学意义(P<0.05);PCNP阳性、TGF-β1阳性患者年龄、性别、体质量指数、肿瘤位置、淋巴结转移情况与PCNP阴性、TGF-β1阴性患者相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PCNP、TGF-β1在SACC组织内表达较高,与肿瘤大小、神经侵犯存在密切关系,或可为临床治疗提供新的方向。

热应激对从江香猪十二指肠黏膜结构、HIF-1及其相关蛋白表达的影响

旨在研究热应激(heat stress,HS)对从江香猪十二指肠黏膜屏障结构的影响,同时跟踪检测低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)的表达特征及调控机制。试验选取24头育肥期从江香猪,随机分为6组,除对照组(Con),其余5组进行不同时间热应激处理(6、12、24、48、72 h),试验过程中检测从江香猪直肠温度和呼吸频率,试验结束时采集各组从江香猪十二指肠。苏木精-伊红染色(HE)和阿利新蓝-过碘酸雪夫反应(AB-PAS)观察各组十二指肠组织结构和杯状细胞数量变化;TUNEL染色检测十二指肠细胞凋亡率;实时荧光定量(qRTPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学分别检测紧密连接相关蛋白、HIF-1及其上游调控因子HSP90和PHD-2的表达变化。结果显示,与对照组相比,热应激可使从江香猪直肠温度和呼吸频率明显升高,肠绒毛高度下降,隐窝深度增加,绒腺比降低,闭合蛋白(Occludin)和紧密连接蛋白1(ZO-1)表达水平呈时间依赖性下降,杯状细胞数量增多。TUNEL检测结果显示,HS处理72 h后,十二指肠上皮细胞凋亡率显著上升(P<0.001)。免疫组织化学、qRT-PCR和Western blot对HIF-1α、HSP90和PHD-2的表达进行检测,结果显示,相较于对照组,HS处理72 h后十二指肠黏膜上皮HIF-1αmRNA和蛋白表达量随HS时间延长而增加;HSP90阳性细胞在对照组和热应激组中均集中于黏膜上皮,其表达趋势与HIF-1α一致;PHD-2表达特征与HSP90相反,其表达强度在HS组中明显减弱,且随HS时间增加,PHD-2 mRNA和蛋白水平均呈时间依赖性下降。以上结果说明,HS可引起十二指肠上皮细胞凋亡,损伤十二指肠黏膜屏障;HIF-1的表达升高与十二指肠细胞凋亡密切相关,且可能同时受HSP90和PHD-2调控。

暗纹东方鲀TGF-β1基因的克隆、表达特征及生长性状相关SNP位点筛选

为探究暗纹东方鲀(Takifugu fasciatus)TGF-β1基因与其生长性状的关联及作用,采用RACE技术克隆了暗纹东方鲀TGF-β1基因,分析了其基因结构与表达特征,并通过直接PCR扩增法对TGF-β1基因进行多片段比对,在此基础上筛选出与生长性状相关的SNP位点。研究发现TGF-β1基因cDNA全长共2217 bp,包含5′UTR 51 bp,3′UTR 1014 bp,ORF 1152 bp,编码383个氨基酸。氨基酸序列比对分析表明,暗纹东方鲀TGF-β1基因与红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)同源性最高(92.82%)。进化树分析表明,暗纹东方鲀TGF-β1基因编码氨基酸序列与红鳍东方鲀聚为一支,与鲈形目鱼类亲缘关系最近(68.46%~73.33%)。qRT-PCR检测显示,TGF-β1基因在暗纹东方鲀8种不同组织(心脏、肝脏、脑、脾脏、肾脏、肌肉、中肠和鳃)都有表达,其中肾脏表达量最高,心脏和脾脏表达量次之。通过SNP位点不同基因型与个体生长性状的相关性分析,发现TGF-β1上的SNP g.3908 C>A位点与暗纹东方鲀多项生长性状有关,其中CC型是优势基因型,且CC型个体体宽、肥满度较高。研究结果证实TGF-β1基因与暗纹东方鲀生长性状有一定的相关性,可为暗纹东方鲀分子标记辅助育种提供基础资料。

PEG3、STMN1基因在非小细胞肺癌的表达及其与临床病理特征、血管生成相关性研究

目的 探讨父系表达基因3(PEG3)、抑微管装配蛋白1(STMN1)基因在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达及其与临床病理特征和血管生成的关系。方法 收集宁夏医科大学总医院肿瘤医院2021年1月—2023年1月经病理证实的96例NSCLC患者癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测和免疫组织化学检测癌组织与癌旁组织PEG3、STMN1、VEGF及CD105 mRNA的表达;比较不同临床病理特征NSCLC患者癌组织PEG3、STMN1的阳性表达率;采用Pearson法分析PEG3、STMN1与VEGF及CD105关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析PEG3、STMN1对NSCLC的诊断价值。结果 与癌旁组织比较,PEG3在NSCLC组织中表达降低(P <0.05),STMN1、VEGF及CD105在NSCLC组织中表达升高(P <0.05);NSCLC组织中STMN1、VEGF及CD105阳性率分别为62.50%、69.79%和72.92%,分别高于癌旁组织5.21%、10.42%和13.54%(P <0.05),NSCLC组织中PEG3阳性率为8.33%低于癌旁组织73.96%(P <0.05);不同年龄、性别及肿瘤类型NSCLC患者的PEG3及STMN1表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),不同TNM分期、淋巴结转移及分化程度NSCLC患者的PEG3及STMN1表达水平比较,差异有统计学意义(P <0.05);NSCLC组织的PEG3与STMN1、VEGF及CD105均呈负相关(P <0.05),NSCLC组织的STMN1与PEG3呈负相关(P <0.05),与VEGF及CD105均呈正相关(P <0.05);PEG3诊断NSCLC的曲线下面积为0.750(95%CI:0.453,0.936)、敏感性为73.66%(95%CI:0.650,0.937)、特异性为79.62%(95%CI:0.590,0.956);STMN1诊断NSCLC的曲线下面积为0.796(95%CI:0.540,0.942)、敏感性为80.30%(95%CI:0.744,0.978)、特异性为81.12%(95%CI:0.612,0.996);PEG3+STMN1联合诊断的曲线下面积为0.935(95%CI:0.753,0.995)、敏感性为92.33%(95%CI:0.751,0.930)、特异性为77.12%(95%CI:0.735,0.948)。结论 NSCLC组织PEG3降低、STMN1升高,与肺癌TNM分期、分化程度相关,其可以加快肿瘤血管生成,能够一定程度提高疾病诊断价值。

CPNE1在不同临床病理特征胃癌患者中的表达情况及其与预后的相关性

目的 探究Copine-1(CPNE1)在不同临床病理特征胃癌患者中的表达情况及其与预后的相关性。方法 将南华大学附属第二医院2019年11月~2023年11月期间收治并确诊的82例胃癌患者作为研究对象,检测CPNE1蛋白在肿瘤组织及癌旁组织中的表达水平,根据肿瘤组织及癌旁组织切片综合评分结果分为高表达组(染色评分≥3分)、低表达组(染色评分<3分),评估CPNE1蛋白在不同临床特征胃癌患者中的表达水平;采用Kaplan-Meier曲线估计总生存率,单因素与多因素Cox回归模型分析CPNE1蛋白高表达与临床肿瘤病理特征以及患者总生存期的相关性。结果 82例胃癌患者中有48例患者肿瘤组织中CPNE1蛋白呈现高表达;相较于癌旁组织,肿瘤组织切片综合染色评分偏高(P <0.05);不同临床病理特征(淋巴结是否转移、TNM分期、是否血管侵犯)胃癌患者的CPNE1蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(P <0.05);根据Kaplan-Meier曲线,年龄≥65岁、CPNE1蛋白高表达、神经侵犯、TNM分期Ⅲ~Ⅳ、淋巴结转移的胃癌患者生存率更低(P <0.05);经多因素Cox回归模型分析发现,CPNE1蛋白高表达、神经侵犯、TNM分期Ⅲ~Ⅳ、淋巴结转移是影响胃癌患者总生存期的独立危险因素(P <0.05)。结论 CPNE1蛋白在胃癌患者的肿瘤组织中呈高表达状态,是影响胃癌患者总生存期的独立危险因素之一,临床上可将CPNE1蛋白水平作为胃癌患者预后状况评估的标志物。

子痫前期患者缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达特征及检测意义研究

目的:研究子痫前期患者缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达特征及检测意义。方法:将2022年1月—2022年12月在本院确诊为子痫前期的60例孕妇纳入子痫前期组,将确诊为妊娠高血压的60例孕妇纳入妊娠高血压组,另将同期在本院分娩的40例正常妊娠产妇纳入对照组。均检测三组孕妇的胎盘HIF-1αmRNA相对表达量及其阳性检出率,并分析子痫前期组孕产妇不同临床特征的胎盘HIF-1αmRNA表达量和胎盘HIF-1αmRNA对不同严重程度子痫前期孕妇的检查价值。结果:与对照组比较,妊娠高血压组、子痫前期组孕妇胎盘HIF-1αmRNA相对表达水平明显更高;与妊娠高血压组孕妇比较,子痫前期组孕妇胎盘HIF-1αmRNA相对表达水平明显更高(P<0.05)。与轻度子痫前期孕妇比较,重度子痫前期孕妇胎盘HIF-1αmRNA相对表达水平明显更高(P<0.05)。与对照组比较,妊娠高血压组、子痫前期组胎盘HIF-1αmRNA阳性检出率明显更高;与妊娠高血压组比较,子痫前期组孕妇胎盘HIF-1αmRNA阳性检出率明显更高(P<0.05)。胎盘HIF-1αmRNA对轻度子痫前期和重度子痫前期检测中的AUC均>0.85,灵敏度分别为93.75%、100%,特异度分别为92.86%、96.88%。结论:胎盘HIF-1α参与了子痫前期的发生、发展当中,在子痫前期检测中具有较高的敏感性和特异性,其组织中的HIF-1αmRNA相对表达量变化情况可有效反映出患者的病情严重程度,具有较高的检测准确率。

脑膜瘤组织中Ki-67蛋白、ADAMDEC1蛋白表达及其与临床病理特征相关性分析

目的:探讨脑膜瘤组织中增殖细胞核抗原(Ki-67)蛋白、解聚素金属蛋白酶癸蛋白1(ADAMDEC1)蛋白表达及与临床病理特征间的关系。方法:选取2018年1月至2021年1月本院的82例脑膜瘤患者作为观察组,另选同期因外伤行颅脑手术的患者60例作为对照组。所有患者均行手术治疗,术中采集脑膜瘤标本及正常脑组织标本,均行免疫组化染色法检测Ki-67、ADAMDEC1表达,比较两组Ki-67、ADAMDEC1表达差异;并比较不同Ki-67蛋白、ADAMDEC1蛋白表达患者年龄、性别、肿瘤大小、WHO分级、瘤周水肿、脑膜尾征、骨侵犯等病理特征方面差异;所有脑膜瘤患者均随访2年,记录疾病复发情况,并分析疾病复发与Ki-67蛋白、ADAMDEC1蛋白表达间的关系。结果:观察组Ki-67蛋白、ADAMDEC1蛋白阳性表达率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Ki-67蛋白阳性组、ADAMDEC1蛋白阳性组WHO分级Ⅱ~Ⅲ级、瘤周水肿、骨侵犯占比高于Ki-67蛋白阴性组、ADAMDEC1蛋白阴性组,差异有统计学意义(P<0.05);82例患者随访2年,共出现11例复发,复发率为13.41%(11/82);Ki-67蛋白阳性组、ADAMDEC1蛋白阳性组复发率略高于Ki-67蛋白阴性组、ADAMDEC1蛋白阴性组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:脑膜瘤组织内Ki-67蛋白、ADAMDEC1蛋白表达水平高,且与WHO分级、瘤周水肿、骨侵犯存在密切关系,可辅助临床完善早期治疗方案,改善患者预后。

薄荷茉莉酸受体McCOI1a基因的克隆与表达模式分析

【目的】茉莉酸(jasmonic acid,JA)受体COI1在调节植物生长发育、逆境响应方面具有重要作用。克隆薄荷McCOI1a基因,并分析其蛋白特征与表达模式,为薄荷分子育种提供基因资源。【方法】基于转录组数据从薄荷叶片中克隆McCOI1a,并通过生物信息学分析、烟草叶片瞬时表达、实时荧光定量PCR技术对McCOI1a的蛋白特性、亚细胞定位、基因表达模式进行分析。【结果】McCOI1a基因全长1842 bp,编码613个氨基酸;McCOI1a蛋白具有保守的F-box和LRR结构域,与丹参SmCOI1蛋白同源性最高;亚细胞定位结果显示McCOI1a蛋白定位于细胞核;McCOI1a在不同组织中均有表达,在根中表达量最高,在叶序中表达呈逐渐上升的趋势;在叶片中,McCOI1a在MeJA、干旱、NaCl、AlCl3、CdCl2、CuCl2处理下的表达呈不同程度的上调,并且AlCl3处理下其上调最明显,表达量最高可达1206倍;在根中,McCOI1a的表达在CuCl2处理下呈先下调而后上调的模式,在其余处理下,McCOI1a的表达都呈现出不同程度的下调。【结论】McCOI1a响应MeJA和非生物逆境胁迫,可能在调控薄荷生长发育、逆境响应方面发挥重要作用。

尼罗罗非鱼CD209v-1基因表达特征及其功能鉴定

【目的】明确分化群抗原209(CD209)变体CD209v-1与罗非鱼机体免疫功能的相关性,为深入探析CD209及其家族成员在鱼类免疫系统中的作用机制提供理论依据,同时为罗非鱼细菌性疾病的防治及新型疫苗研发打下基础。【方法】采用PCR扩增尼罗罗非鱼CD209v-1基因(OnCD209v-1)开放阅读框(ORF),利用Berry-Psite、InterProScan、TMHMM 2.0、ExPASy、SignalP 4.1及SWISS-MODEL等在线软件进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测OnCD209v-1基因在尼罗罗非鱼各组织中的表达情况。随后克隆OnCD209v-1基因胞外段构建pET-OnCD209v-1重组原核表达质粒,经原核诱导表达后,通过细菌结合试验和凝集试验体外探究rOnCD209v-1蛋白对多种水生动物致病菌的识别结合及凝集功能。【结果】OnCD209v-1基因ORF长780 bp,共编码259个氨基酸残基;OnCD209v-1基因编码蛋白相对分子量为29.424 kD,理论等电点(pI)为6.54,在第113~246位氨基酸间存在1个保守的C型凝集素(CTL)结构域。OnCD209v-1氨基酸序列与横线扁鼻丽鱼CD209氨基酸序列的相似性最高(86.49%),基于CD209氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示尼罗罗非鱼与横线扁鼻丽鱼先聚在同一分支上,二者的亲缘关系较近。OnCD209v-1基因在尼罗罗非鱼各组织中均有表达,尤其以肝脏和肠道中的相对表达量较高,其次是血液。原核诱导表达获得的rOnCD209v-1蛋白能识别并结合多种致病菌,且在Ca2+存在的情况下对嗜水气单胞菌、大肠杆菌、无乳链球菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌具有凝集活性。【结论】OnCD209v-1基因是罗非鱼CD209基因的变体,具有1个保守的CTL结构域,广泛表达于罗非鱼各组织中;原核诱导表达获得的rOnCD209v-1蛋白能识别并结合嗜水气单胞菌、大肠杆菌、哈维氏弧菌、无乳链球菌、副溶血弧菌及金黄色葡萄球菌等常见致病菌,在Ca2+存在的情况下对多种病原菌具有凝集活性。即OnCD209v-1基因作为重要的免疫分子参与了罗非鱼响应细菌感染的免疫过程。

杂交鲟“鲟龙1号”(Huso dauricus♀×Acipenserschrenckii♂)atp1α1与atp1β1基因的克隆、序列分析及碱胁迫下鳃的表达特征

为探究碳酸盐碱度胁迫下杂交鲟“鲟龙1号”(Huso dauricus♀×Acipenser schrenckii♂)Na+/K+-ATP酶的分子响应机制,在水温(17±2)℃下,将体长(133.17±16.75)mm、体质量(12.43±3.99)g的30日龄“鲟龙1号”幼鱼饲养在曝气自来水[测定碱度为(3.16±0.03)mmol·L^(-1)(对照组,C组)]和用99%纯度的食用小苏打配置的碱度分别为(7.61±0.12)mmol·L^(-1)(T1组)、(12.10±0.05)mmol·L^(-1)(T2组)和(15.30±0.85)mmol·L^(-1)(T3组)的曝气自来水中。养殖到第30 d时,采集对照组杂交鲟的鳃、皮肤、肌肉、心脏、肝脏、脾脏、头肾、肠道、眼、胃和肾脏和3个试验组的鳃,基于“鲟龙1号”的转录组数据,筛选差异表达基因atp1α1(Na+/K+-ATP酶α1亚基)与atp1β1(Na+/K+-ATP酶β1亚基),采用RACE技术克隆获得atp1α1基因与atp1β1基因的c DNA全长序列并分析其序列信息,采用荧光定量PCR技术分析了组织表达差异和碱度暴露鲟龙1号鳃的表达特征。结果显示,atp1α1基因的c DNA全长序列为3 407 bp,编码1 027个氨基酸(NKAα1),atp1β1基因的c DNA全长序列为2 170 bp,编码304个氨基酸(NKAβ1)。NKAα1和NKAβ1的二级结构主要为α-螺旋与无规则卷曲,有多个跨膜区,潜在磷酸化位点均为丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)。同源比对结果发现,“鲟龙1号”的NKAα1和NKAβ1均与小体鲟(Acipenser ruthenus)的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,atp1α1基因在鳃中高表达,显著高于其他组织(P<0.05);atp1β1基因在心脏、肝脏、鳃和肠道中高表达;atp1α1基因在鳃的表达水平随碱度上升呈先上升后下降趋势,当碱度为7.61 mmol·L^(-1)时表达水平达最高;碱度高于12.10 mmol·L^(-1)时,atp1α1基因与atp1β1基因的表达水平均低于正常。综上所述,“鲟龙1号”的atp1α1基因与atp1β1基因分别编码NKA蛋白的重要亚基,参与了碳酸盐碱度应答,本研究为揭示鲟的耐盐碱分子调控机制提供理论基础。

宫颈癌组织MNX1-AS1、FR-α水平与病理特征的关系及其诊断意义

目的 探讨宫颈癌组织MNX1反义RNA 1(MNX1-AS1)、叶酸受体-α蛋白(FR-α)水平与病理特征的关系及其诊断意义。方法 选取2018年1月至2018年10月在本院进行手术治疗的85例宫颈癌患者为研究对象,纳入观察组,另选我院收治的50例宫颈炎患者为对照组。采集观察组患者的癌组织、癌旁组织及对照组宫颈组织标本,三组标本以免疫组化法检测MNX1-AS1、FR-α的表达率和表达水平并进行组间比较,分析宫颈癌组织MNX1-AS1、FR-α表达与病理特征及预后的关系。结果 观察组宫颈癌组织及癌旁组织的MNX1-AS1、FR-α阳性表达率高于对照组,且宫颈癌组织阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。观察组宫颈癌组织、癌旁组织的MNX1-AS1、FR-α表达水平高于对照组,且宫颈癌癌组织MNX1-AS1、FR-α水平高于癌旁组织(P<0.05)。MNX1-AS1、FR-α表达与宫颈癌患者的年龄病理分型、肿瘤直径、分化程度无关,而与宫颈癌肿瘤的FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。对观察组患者进行为期3年的随访观察,MNX1-AS1、FR-α阳性组的3年生存率低于阴性组(P<0.05)。结论 宫颈癌患者中MNX1-AS1、FR-α呈现高表达,并能对宫颈癌组织的浸润、转移、分期发挥协同作用,与宫颈癌的发生、发展及预后密切关联,对宫颈癌有重要的诊断意义。

糜子PmLEA1基因的克隆及其在非生物逆境胁迫下的表达模式分析

LEA蛋白是一类逆境胁迫下诱导产生的蛋白,为了解糜子PmLEA1基因在逆境中的作用,从河曲红糜子中克隆出PmLEA1基因,利用生物信息学方法预测并分析PmLEA1蛋白的性质和结构特征。结果表明,糜子PmLEA1基因全长549bp,编码蛋白的分子量为17863.57Da,氨基酸数目为182个,二级结构以无规则卷曲为主,属亲水性蛋白,其蛋白序列与柳枝稷LEA蛋白序列的同源性最高,无跨膜转运信号,不是膜上受体。实时荧光定量PCR结果表明,PEG-6000、NaCl、甘露醇、ABA、GA、H2O2、IAA、MeJa、SA胁迫下的PmLEA1基因相对表达量均发生不同程度的变化;各胁迫下PmLEA1基因的相对表达量变化在根中最大,叶片次之,茎中相对变化最小,且表达量总体上呈现先升高后降低的变化趋势;PEG-6000胁迫下PmLEA1基因的相对表达量变化量大。上述结果说明,糜子PmLEA1基因参与了抗旱调控和不同激素信号传导过程。研究结果为糜子的遗传改良提供了优良的抗旱基因,并为其他禾本科作物LEA基因的挖掘提供了研究思路。

牦牛MPC1和MPC2基因克隆及其组织表达特征分析

【目的】明确牦牛线粒体丙酮酸载体编码基因(MPC1和MPC2)的分子生物学特性及其组织表达特征,为揭示MPC基因在牦牛适应高原环境和能量代谢中的作用机制提供理论依据。【方法】选取麦洼牦牛为研究对象,PCR扩增牦牛MPC1和MPC2基因编码区(CDS)序列,利用在线生物信息学分析软件预测其蛋白结构及理化性质,并以实时荧光定量PCR检测MPC1和MPC2基因在不同年龄(0.5、1.5和2.5岁)牦牛各组织中的表达情况。【结果】牦牛MPC1基因CDS序列长330 bp,共编码109个氨基酸残基;MPC2基因CDS序列长384 bp,共编码127个氨基酸残基。基于MPC1和MPC2基因CDS序列相似性构建的系统发育进化树显示,牦牛分别与黄牛和水牛的亲缘关系最近,与绵羊的亲缘关系最远。牦牛MPC1和MPC2蛋白均为稳定的亲水性蛋白,丙氨酸和亮氨酸含量较高,有跨膜结构但无信号肽,均存在1个MPC结构域;其二级结构以α-螺旋为主(分别占57.80%和55.12%),三级结构模型为5xpd.1.A。MPC1和MPC2基因在2.5、1.5和0.5岁牦牛心脏中的相对表达量均最高,其次是肾脏和肝脏,而在脾脏中的相对表达量最低;MPC1和MPC2基因在不同年龄段牦牛各组织中的表达趋势不一致,可能与基因表达的组织特异性及二者在牦牛不同生长发育阶段发挥的作用不同有关。【结论】MPC1和MPC2基因在反刍动物间具有高度的保守性,其表达存在组织特异性和时序性,尤其在心脏中高表达,且编码蛋白中富含丙氨酸和亮氨酸,说明MPC1和MPC2基因在牦牛改善肉品质及适应高原环境的过程中扮演着重要角色,但二者在牦牛不同生长发育阶段发挥的作用有所差异。

子宫内膜癌组织中IGF2BP1mRNA,PEG10mRNA表达及与增殖基因表达的相关性和预后研究

目的研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulinlike growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)mRNA,父系表达遗传印记基因10(patrilineal expression of genetic imprinting gene 10,PEG10)mRNA表达及与增殖基因表达的相关性及预后。方法选取2017年1月~2019年1月湖北理工学院附属妇幼保健院诊治的100例EC患者。实时荧光定量PCR检测EC癌组织和癌旁组织中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA,细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA,细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)mRNA表达。免疫组织化学检测IGF2BP1,PEG10蛋白表达。相关性采用Pearson相关分析。Kaplan-Meier曲线分析不同IGF2BP1,PEG10表达组EC患者的预后差异。COX回归分析EC患者的预后影响因素。结果EC癌组织中IGF2BP1 mRNA(1.84±0.33),PEG10 mRNA(2.12±0.40),PCNA mRNA(3.14±0.42),cyclinD1 mRNA(2.81±0.36),CDK4 mRNA(2.37±0.34)高于癌旁组织(0.78±0.21,0.91±0.25,0.74±0.13,0.67±0.21,0.59±0.18),差异具有统计学意义(t=25.652~54.588,均P<0.05)。癌组织中IGF2BP1(70.00%),PEG10(72.00%)蛋白阳性率高于癌旁组织(100%,9.00%),差异具有统计学意义(χ^(2)=75.000,82.363,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA表达与PCNA mRNA,cyclinD1 mRNA,CDK4 mRNA表达呈正相关(r=0.562~0.625,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA与PEG10 mRNA表达呈显著正相关(r=0.663,P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、并发淋巴结转移EC癌组织中IGF2BP1(86.49%,87.50%),PEG10(89.19%,90.63%)阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(60.32%,61.90%)、无淋巴结转移(61.77%,63.24%),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.863~8.608,均P<0.05)。IGF2BP1阳性组患者三年总体生存率70.00%(49/70)低于阴性组的90.00%(27/30);PEG10阳性组患者三年总体生存率为69.44%(50/72),低于阴性组的92.86%(26/28),差异具有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.133,5.491,P=0.042,0.019)。FIGO分期Ⅲ期(OR=1.449,95%CI:1.148~1.830)、并发淋巴结转移(OR=1.442,95%CI:1.124~1.850),IGF2BP1阳性(OR=1.637,95%CI:1.239~2.163)及PEG10阳性(OR=1.576,95%CI:1.136~1.187)是影响EC患者生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论EC中IGF2BP1,PEG10表达升高,两者与增殖基因表达呈正相关,是EC预后评估的肿瘤标志物。

线纹海马Dmrt1基因的克隆与表达分析

Dmrt1广泛参与了不同物种的性别决定和性腺发育过程,为探究dmrt1在线纹海马中的分子特征及表达模式,本研究采用RACE-PCR克隆到了其cDNA全长1009 bp,包含87 bp的5’UTR、756 bp的ORF和166 bp的3’UTR,共编码251个氨基酸;氨基酸多重比对显示,线纹海马dmrt1在DM结构域内具有高度保守性;系统进化树分析表明,其与侏儒海马的dmrt1亲缘关系最近;RT-qPCR显示,dmrt1在线纹海马成体的性腺中呈显著的雄性偏好性高表达于精巢,表明其可能参与了线纹海马精巢的形成和维持。该研究为进一步深入研究线纹海马dmrt1在性别发育中的功能奠定了基础。

S相激酶相关蛋白和P27kip1蛋白表达与胃癌临床病理特征的相关性研究

在本次研究中主要分析细胞5相激酶相关蛋白以及P27kip1与胃癌的临床关系。方法 本次研究中针对67例临床诊断为胃癌的患者,利用免疫组化S-P法检测Skp2和P27kip1蛋白的表达情况,结果 在胃癌患者中Skp2蛋白表达率达33.33%,而对于正常患者来说,胃组织Skp2蛋白表达率为10.73%,两组数据具有明显统计差异。除此之外,根据研究发现Skp2蛋白阳性表达率与患者的肿瘤大小、年龄,性别以及病灶位置无明显关系,但与患者的肿瘤分化程度具有紧密联系。Skp2与P27kip1的表达是呈现负相关关系的。结论 临床上Skp2异常表达会从一定程度上加速细胞周期转化,以促进胃癌症状发生,在胃癌发生中,泛素-蛋白酶体途径发挥重要作用。

食管鳞状细胞癌组织中FOXM1和HIF-1α的表达及其与患者临床病理特征和预后的相关性

目的:探讨食管鳞状细胞癌组织中叉头框转录因子M1(forkhead box transcription factor M1,FOXM1)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达,并分析其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:收集我院2017年06月至2018年07月收治的60例食管鳞状细胞癌患者的肿瘤组织及临床资料。采用免疫组织化学染色法检测FOXM1和HIF-1α蛋白在60例食管鳞状细胞癌组织、配对的癌旁正常组织中的表达;根据HIF-1α高/低表达、FOXM1高/低表达、HIF-1α及FOXM1共表达与否将其分为三种表达方式,分析FOXM1和HIF-1α表达与食管鳞状细胞癌患者临床病理特征及预后的关系。结果:FOXM1蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的阳性表达率[68.33%(41/60)]显著高于远端正常食管组织[11.67%(7/60)](χ^(2)=40.139,P<0.001);HIF-1α蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的阳性表达率[73.33%(44/60)]显著高于远端正常食管组织[6.67%(4/60)](χ^(2)=51.164,P<0.001);FOXM1的表达与HIF-1α的表达呈显著正相关(r=0.319,P=0.013)。FOXM1和HIF-1α阳性共表达与食管鳞状细胞癌的浸润深度(T期)有关(P<0.05)。FOXM1和HIF-1α阳性表达的食管鳞状细胞癌患者的总生存期(overall survival,OS)和无病生存期(disease-free survival,DFS)明显低于阴性表达者(P<0.05),且FOXM1和HIF-1α阳性共表达的食管鳞状细胞癌患者的生存期最短(P<0.05)。结论:FOXM1、HIF-1α的阳性表达与食管鳞状细胞癌密切相关,FOXM1和HIF-1α的联合检测可作为食管鳞状细胞癌患者预后预测的指标及潜在的治疗靶点。