基于HIF-1α-iNOS信号通路探讨瑞舒伐他汀联合缺血后处理对糖尿病小鼠的心肌保护作用

目的:探讨瑞舒伐他汀联合缺血后处理对糖尿病小鼠心肌的作用并分析其保护作用的机制。方法:应用高脂高糖饮食的方法构建2型糖尿病小鼠动物模型,随机分为假手术组(sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(IpostC组)及瑞舒伐他汀联合缺血后处理组(RPO+IpostC组),每组10只。分析各组小鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表达及血浆炎症因子、血清一氧化氮(NO)水平变化,观察各组小鼠心肌梗死面积、心肌组织HE染色结构变化。结果:与I/R组、IPostC组相比,RPO+IpostC组HIF-1α,i NOS蛋白表达显著上调(P<0.05);与IpostC组相比,RPO+IpostC组小鼠血清NO和血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平均明显降低,血浆IL-10升高(P<0.05);经显微镜观察显示,sham组小鼠的心肌细胞HE染色结构正常,RPO+IpostC组小鼠心肌细胞HE染色后损伤相对较小;与I/R组相比,IpostC组和RPO+IpostC组小鼠缺血面积(AAR/LV)、梗死面积(IRR/AAR)均明显减小,且RPO+IpostC组小鼠AAR/LV、IRR/AAR最小(P<0.05)。结论:瑞舒伐他汀联合缺血后处理可以通过对糖尿病小鼠HIF-1α-i NOS信号通路进行调节,进而上调HIF-1α、i NOS蛋白表达,减轻炎症反应,降低心肌细胞缺血再灌注损伤,保护心肌。

HIF-1α在妊娠期高血压疾病胎盘中的表达

目的 通过比较缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在妊娠期高血压疾病和正常妊娠胎盘中的表达,探讨其与妊娠期高血压疾病发病机制的相关性.方法 采用SP免疫组化法检测30例妊娠期高血压疾病患者及20例正常孕妇胎盘组织中缺氧诱导因子 -1α蛋白的表达部位.Western-blot检测两组胎盘组织的蛋白表达量.结果 妊娠期高血压疾病组胎盘组织缺氧诱导因子缺氧诱导因子-1α的表达明显高于正常妊娠组（t=-5.710,P〈0.05）.结论 妊高征患者胎盘组织缺氧诱导因子-1α明显高于正常孕妇,表明缺氧诱导因子缺氧诱导因子-1α在妊娠期高血压疾病发病中起重要作用.

广西何首乌GXHSWAQⅠ在鼻咽癌细胞放射增敏过程中对基因HIF-1α的影响

目的:探讨广西何首乌中蒽醌类化合物GXHSWAQⅠ,在鼻咽癌CNE-1细胞的放射增敏过程中对乏氧诱导因子表达的影响。方法:MTT比色法确定GXHSWAQⅠ对鼻咽癌CNE-1细胞株体外增敏剂量和放射增敏比,HE染色观察GXHSWAQⅠ放射增敏后细胞形态学的改变,逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测GXHSWAQⅠ作用前后,乏氧诱导因子HIF-1α的表达情况。结果:无细胞生长抑制作用浓度的GXHSWAQⅠ低浓度(3.90mg/L)和高浓度(7.80mg/L)组的放射增敏比分别为1.23和1.58,放射和联合用药的细胞发生明显的细胞形态学改变,同时下调基因HIF-1α的表达。结论:GXHSWAQⅠ对鼻咽癌CNE-1细胞具有放射增敏作用,其机制与下调乏氧诱导因子HIF-1α表达有关。

放射性^(125)碘粒子对肺腺癌A549 细胞荷瘤裸鼠HIF-1α 表达的影响

目的探讨^(125)I放射性粒子抑制裸鼠人肺腺癌移植瘤生长的机制。方法构建人肺腺癌A549荷瘤裸鼠模型,将20只裸鼠随机平均分为实验组和对照组,每组10只。实验组移植瘤植入22.2 MBq活度125I粒子,对照组植入0 MBq空源粒子。测量移植瘤长径、短径,30 d后取下移植瘤,免疫组化法检测乏氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白表达,荧光定量PCR法检测HIF-1αmRNA表达。结果实验组在植入粒子后第10天开始移植瘤生长速度放缓,30 d时体积小于对照组[(1213.8±567.6)vs(1712.1±437.4)]mm3,但差异无统计学意义(t=1.554,P>0.05)。两组移植瘤组织中HIF-1α均有表达,实验组HIF-1α蛋白表达低于对照组[(86.7±4.2)vs(102.7±3.7)],差异有统计学意义(t=9.039,P<0.05);实验组HIF-1αmRNA表达低于对照组[(0.223±0.0814)vs(0.879±0.0259)],差异有统计学意义(t=24.285,P<0.05)。结论125I粒子可抑制裸鼠人肺腺癌A549移植瘤生长,并在蛋白质、mRNA水平降低移植瘤组织HIF-1α的表达。

HIF-1α及ERCC1基因多态性与晚期非小细胞肺癌铂类化疗近期疗效的相关性研究

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)C1772T(C→T,rs11549465)和切除修复交叉互补基因1(ERCC1)codon 118(C→T,rs11615)基因多态性与接受顺铂方案化疗的晚期非小细胞肺癌患者疗效的关系。方法对经病理确诊的晚期NSCLC患者68例,采用含铂方案化疗2个周期后评价疗效,采用聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法检测患者外周血HIF-1αC1772T和ERCC1 codon 118进行多态性分析,比较各基因型与晚期非小细胞肺癌患者近期疗效的相关性。结果 HIF-1αC1772T基因型频率分别为:C/C型占83.82%(57/68)、C/T型占16.17%(11/68),未发现T/T型;ERCC1 codon 118基因型频率分别为:C/C型占61.76%(42/68)、C/T型占32.35%(22/68)、T/T型占5.88%(4/68)。68例患者中,完全缓解(CR)1例,部分缓解(PR)21例,疾病稳定(SD)30例,疾病进展(PD)16例;总有效率为32.35%。C/C型HIF-1αC1772T基因型患者采用铂类药物治疗的近期疗效与C/T+T/T基因型比较,差异无统计学意义(P=0.694);C/C型ERCC1基因型患者采用铂类药物治疗疗效是C/T+T/T型患者的4.125倍,差异有统计学意义(95%可信区间:1.208~14.097,P=0.019),同时携带HIF-1αC1772T C/C和ERCC1 codon 118 C/C基因型患者,对铂类药物的疗效存在一定的联合作用(P=0.001)。结论 HIF-1αC1772T和ERCC1 codon 118基因型可能是晚期NSCLC患者铂类药物敏感性的预测因子。

重楼皂苷Ⅰ对低氧喉癌Hep-2细胞增殖和HIF-1α、VEGF表达的影响

目的研究重楼皂苷Ⅰ对低氧喉癌Hep-2细胞增殖及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法采用MTT法检测重楼皂苷Ⅰ对细胞增殖的影响,实时定量PCR(RT-PCR)法检测低氧条件下重楼皂苷Ⅰ对Hep-2细胞HIF-1αmRNA、VEGF mRNA表达的影响。采用Western blot法检测低氧条件下,重楼皂苷Ⅰ对Hep-2细胞VEGF、HIF-1α、信号传导与转录激活因子3(STAT-3),磷酸化信号传导与转录激活因子3(p-STAT-3)蛋白表达的影响。结果重楼皂苷Ⅰ对低氧喉癌Hep-2细胞的增殖有抑制作用;其中,1.5、3、6μg/ml浓度组重楼皂苷Ⅰ可下调低氧Hep-2细胞HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白的表达。同时,重楼皂苷Ⅰ抑制了STAT-3、p-STAT-3的表达。结论重楼皂苷Ⅰ能抑制低氧条件下喉癌Hep-2细胞增殖和HIF-1α、VEGF的表达,可能与其下调STAT-3表达及抑制STAT-3的磷酸化有关。

土贝母苷甲通过调控糖代谢重编程抑制肝癌细胞增殖

目的探讨土贝母苷甲(TBMS I)对肝癌细胞增殖的影响及其分子机制。方法采用MTS实验和克隆形成实验检测不同浓度TBMS I对肝癌细胞株MHCC97-H生长的影响。采用检测葡萄糖摄取、乳酸生成、乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞外液pH、细胞氧耗和线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性的实验,分析TBMS I对肝癌细胞糖酵解、氧化磷酸化的影响。采用qRT-PCR和Western blot实验检测肝癌细胞株MHCC97-H中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达。结果TBMS I作用使肝癌细胞的增殖能力下降,且呈一定的剂量和时间依赖效应;使葡萄糖摄取和乳酸生成减少,LDH活性降低,细胞外培养液pH升高,细胞氧耗和线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性增加。结论TBMS I通过抑制HIF-1α的表达抑制细胞糖酵解和促进氧化磷酸化,进而抑制肝癌细胞增殖。

TGF-β1通过抑制HIF-1α减少风湿性心脏病心肌细胞胶原合成

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在转化生长因子β1(TGF-β1)促风湿性心脏病心肌细胞胶原合成中的作用。方法:以体外培养风湿性心脏病(风心病)患者经瓣膜置换术后留取组织分离而来的心肌细胞为研究对象,依据加入TGF-β1的浓度将前期实验分为四组:0,5,10及20(μg/L),观察TGF-β1对风湿性心脏病心肌细胞胶原合成及HIF-1α表达的影响;而后实验选取10μg/L TGF-β1为干预浓度,将Scrambled si RNA或HIF-1αsi RNA转染入细胞内。48小时后,分别收集各组细胞,采用RT-PCR检测I型胶原的m RNA水平,Western Blot技术测定细胞内I型胶原和HIF-1α的蛋白表达水平。结果:与0、5及10μg/L浓度TGF-β1组相比,5、10及20μg/L浓度的TGF-β1分别显著地增加了风心病心肌细胞I型胶原及HIF-1α的表达。另外,HIF-1αsi RNA则明显减少了TGF-β1诱导的心肌细胞I型胶原生成。结论:HIF-1α介导了TGF-β1对风湿性心脏病心肌细胞I型胶原合成的促进作用。

糖原合成酶激酶-3β介导低氧诱导因子-1α抗心肌缺血/再灌注损伤的作用

目的通过稳定低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达,探讨其是否通过糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤。方法将雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组(Sham组)、心肌缺血/再灌组(I/R组)、HIF-1α稳定剂二甲氧乙二酰甘氨酸(dimethyloxalyl glycine,DMOG)+心肌缺血/再灌注组(DMOG+I/R组)、HIF-1α抑制剂YC-1+I/R组(YC-1+I/R组)、DMOG+GSK-3β抑制剂SB216763+I/R组(DMOG+SB216763+I/R组)。各组进行相应处理后,处死大鼠并采集样本,Western blot法检测心肌组织中HIF-1α、总GSK-3β、p-GSK-3β(Ser9)、UCP3蛋白表达量;Real-time PCR法检测心肌组织中VEGF、HO-1、Bcl2基因mRNA转录水平;HE染色法检测心肌损伤情况;免疫组化法检测心肌细胞炎性浸润情况;TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡情况。结果与I/R组相比,DMOG预处理组可上调I/R大鼠心肌组织中HIF-1α蛋白及其下游因子VEGF、HO-1、Bcl2 mRNA表达水平,并引起线粒体内膜UCP3蛋白及mRNA表达水平升高,同时明显上调p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达,并减轻心肌损伤、炎性细胞浸润及降低心肌细胞凋亡率(P <0. 05);与DMOG预处理组相比,给予GSK-3β抑制剂SB216763后,HIF-1α的心肌保护效应明显下降(P <0. 05)。结论 HIF-1α可减轻心肌缺血/再灌注损伤,其心脏保护作用应与GSK-3β的介导有关。

^(125)I粒子抑制肝癌移植瘤血管形成的实验研究

目的探讨放射性^(125)I粒子对肝癌裸鼠皮下移植瘤微血管形成的影响及其机制。方法构建人肝癌Huh7细胞裸鼠皮下移植瘤模型,将12只裸鼠用随机数表法分为观察组和对照组,每组6只。观察组移植瘤植入一枚活度为2.96×10^(7)Bq粒子,对照组植入一枚活度为0的空粒子。每4天测量1次移植瘤体积,记录肿瘤生长曲线。28 d后取下移植瘤,用免疫组织化学染色法检测CD31评估移植瘤微血管密度(MVD)。用免疫组织化学染色法检测血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达,并做半定量分析。用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF-A、HIF-1αmRNA的表达。结果观察组移植瘤的生长速度较对照组缓慢,粒子植入后12 d两组肿瘤体积差异有统计学意义(t=3.167,P<0.05),随着观察时间延长,两组肿瘤体积差距加大,在28 d时两组肿瘤体积分别为(963.61±89.56)mm^(3)和(602.10±75.98)mm^(3)(t=7.122,P<0.05)。两组移植瘤组织中CD31均有表达,观察组的MVD较对照组少,差异有统计学意义(t=6.360,P<0.05)。观察组VEGF-A、HIF-1αmRNA及蛋白的表达水平均低于对照组,差异均有统计学意义(t=10.480、6.414、10.890、12.250,P<0.05)。结论放射性^(125)I粒子通过降低肿瘤微血管密度抑制肝癌移植瘤的生长,其机制可能与VEGF-A、HIF-1α的mRNA及蛋白表达减少有关。