苏铁总黄酮对Lewis肺癌模型小鼠VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB表达的影响

目的:探讨苏铁总黄酮对Lewis肺癌模型小鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、核转录因子(NF-κB)表达的影响。方法:采用HE染色法观察肿瘤组织的病理形态变化,免疫组化法和Western blot法检测肿瘤组织中VEGF、b FGF、HIF-1α、NF-κB蛋白的表达,荧光定量PCR法检测肿瘤组织中VEGF、b FGF、HIF-1α、NF-κBmRNA的表达。结果:免疫组化法、Western blot法和荧光定量PCR法的检测结果显示,三者结果基本一致,与模型组比较,苏铁总黄酮各给药组VEGF、b FGF、HIF-1α、NF-κB基因表达量和对VEGF、b FGF、HIF-1α、NF-κB蛋白表达表达率均降低,差异具有显著性(P<0.05)。结论:苏铁总黄酮治疗肺癌的作用机制可能为通过抑制侵袭转移相关基因VEGF、b FGF、HIF-1α、NF-κB的表达,进一步抑制侵袭转移相关功能蛋白VEGF、b FGF、HIF-1α、NF-κB的表达,从而发挥抗肺癌侵袭转移作用。

Ⅰ～Ⅲ期胃癌中VEGF、 HIF-1α和TGF-β1表达的临床意义及其预后价值

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和转移生长因子-β1(TGF-β1)在Ⅰ～Ⅲ期胃癌中的表达及其临床意义和预后价值。方法收集2004年1月至2006年12月在解放军总医院接受根治性手术且TNM分期为Ⅰ～Ⅲ期的胃癌病例。采用组织芯片及免疫组化法检测VEGF、HIF-1α和TGF-β1的表达,并分析其表达与临床病理特征及预后的关系。结果全组343例患者中,VEGF、HIF-1α和TGF-β1的阳性表达率分别为49.3%、30.9%和39.1%,且三者表达两两相关。全组患者的中位随访时间为70.0个月,至随访截止时间,出现复发或转移者232例,死亡218例,中位无疾病生存期(DFS)为23.0个月,中位生存期(OS)为31.1个月。单因素分析显示,年龄、是否全胃切除、是否含印戒细胞癌、Lauren分型、脉管癌栓、肿瘤直径、TNM分期、辅助化疗、VEGF及HIF-1α表达与DFS和OS有关(P<0.05);VEGF、HIF-1α和TGF-β1三者共阳性组的中位DFS(8.6个月)和中位OS(17.7个月)均小于双阳性、单阳性及三者共阴性组(P<0.05)。Cox多因素分析显示,是否全胃切除、是否辅助化疗、TNM分期、VEGF及HIF-1α表达均为影响DFS和OS的独立预后因素。结论对于接受根治性手术治疗的Ⅰ～Ⅲ期胃癌患者,VEGF和HIF-1α阳性表达可能是影响胃癌患者的不良预后因素。

益肾解毒汤对5/6肾切除大鼠肾组织中HIF-1α、CTGF和TGF-β_1表达的影响

目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、CTGF和TGF-β1在肾间质纤维化中的表达及作用,观察益肾解毒汤对其表达的影响。方法:用5/6肾切除大鼠制作肾间质纤维化模型,分假手术组,模型组,氯沙坦组和益肾解毒汤组。术后8周,常规HE染色观察肾脏组织病理变化,用Masson染色法检测胶原在肾脏的沉积;Western blot法检测HIF-1α、CTGF和TGF-β1在肾组织中的表达。结果:与假手术组比较,模型组肾组织中HIF-1α、CTGF和TGF-β1蛋白水平均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,益肾解毒汤组肾组织中HIF-1α、CTGF和TGF-β1蛋白水平均明显降低(P<0.01)。结论:HIF-1α通过调节CTGF和TGF-β1的表达,抑制细胞外基质降解而导致肾间质的纤维化,益肾解毒汤可通过减少HIF-1α蛋白水平来减轻肾间质纤维化。

益肺活血颗粒对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内低氧诱导因子-1α和活性氧的影响

目的观察益肺活血颗粒对低氧培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth musclecells,PASMCs)内低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的影响。方法采用血清药理学方法制备不同浓度的益肺活血颗粒(yifeihuoxue granule,YFHXG)含药血清,采用组织块贴壁法原代培养大鼠PASMCs,取对数生长期PASMCs随机分为常氧组、缺氧组、缺氧+YFHXG组(16.5、3.3、0.66 g/kg)。用噻唑蓝比色法测定各组PASMCs的增殖效应,免疫组化法测定细胞内HIF-1α蛋白的表达,激光共聚焦显微镜测定细胞内ROS的含量。结果与常氧组相比,缺氧组PASMCs增殖明显活跃,HIF-1α蛋白表达及ROS含量增加;与缺氧组相比,缺氧+YFHXG高、中浓度组大鼠PASMCs的生长明显受抑制,而且HIF-1α蛋白表达及ROS含量降低。结论缺氧可以直接刺激PASMCs的增殖。YFHXG可以显著抑制低氧对大鼠PASMCs的促增殖作用,其机制可能是通过降低细胞内HIF-1α蛋白表达及ROS的水平来实现的。

乏氧对IL-17调控牙周膜细胞RANKL及OPG表达的影响

目的探究不同乏氧条件下IL-17对人牙周膜成纤维细胞RANKL及OPG表达的影响。方法在常氧(氧体积分数20%)及不同乏氧条件下:轻度乏氧(氧体积分数10%)、中度乏氧(氧体积分数5%)、重度乏氧(氧体积分数2%)IL-17处理人牙周膜成纤维细胞24 h。通过CCK8比色法检测细胞增殖情况,实时定量RT-PCR和Western-blot方法检测细胞中骨吸收相关因子RANKL及骨保护因子OPG的表达水平。结果氧体积分数10%、5%时,人牙周膜成纤维细胞的增殖与时间呈正相关关系,氧体积分数2%时,细胞增殖受到明显抑制。乏氧培养后随氧体积分数的降低,人牙周膜成纤维细胞RANKL蛋白及mRNA的表达升高,OPG的蛋白及mRNA表达呈现先升后降的趋势。结论当氧体积分数在5%左右时最大程度上调RANKL/OPG比例,提示中度乏氧可促进IL-17调控人牙周膜成纤维细胞骨吸收相关因子的表达,并参与牙槽骨的改建。

HIF-1α和Cox-2在骨肉瘤细胞中的表达及与临床预后的相关性分析

目的本实验旨在研究骨肉瘤细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和环氧化酶-2(cyclooxygenase 2,Cox-2)的表达及分析其与临床预后的相关性。方法从我院自2003年1月至2009年1月就诊的骨肉瘤患者中筛选出18例,采集临床指标包括患者性别、年龄、发病部位、Enneking分期、组织病理学分型及术后随访患者生存情况。另选8例纤维结构不良患者作为阴性对照。采用免疫组化SP法进行肿瘤组织中HIF-1α和Cox-2表达的检测。结果 HIF-1α、Cox-2的表达均定位于细胞核内,呈棕黄(褐)色颗粒,在所有骨肉瘤患者均有表达,但表达的数量及着色强度有所差异,而纤维结构不良中无表达。单因素方差分析结果表明,HIF-1α的表达程度与患者性别(F=0.535,P=0.713)、年龄(F=0.311,P=0.865)、部位(F=1.211,P=0.353)无关,与患者的肿瘤分期(F=6.205,P=0.005)、转移灶有无(F=7.583,P=0.002)及病理类型(F=9.893,P=0.001)有关;Cox-2的表达程度与患者性别(F=1.102,P=0.381)、年龄(F=1.809,P=0.192)、部位(F=0.267,P=0.848)无关,与患者的肿瘤分期(F=7.583,P=0.003)和病理类型(F=4.721,P=0.018)及转移灶的存在与否(F=6.222,P=0.007)有关。相关分析结果表明,HIF-1α、Cox-2表达的相关系数为0.902(P<0.001),有统计学意义。Log-rank单因素生存分析表明,HIF-1α表达(P=0.001)、Cox-2表达(P=0.006)、肿瘤分期(P=0.041)、病理学分类(P=0.025)及转移灶的存在与否(P=0.001)和骨肉瘤患者预后相关,而性别(P=0.774)、年龄(P=0.089)、发病部位(P=0.117)与患者预后无关。Cox回归模型结果提示HIF-1α、Cox-2是骨肉瘤预后相关的重要因素,且HIF-1α和Cox-2的高表达提示患者预后不良。结论 (1)HIF-1α及Cox-2在所有骨肉瘤患者均有表达,但表达的数量及着色强度有所差异。(2)HIF-1α及Cox-2在骨肉瘤中表达呈正相关。(3)HIF-1α及Cox-2在骨肉瘤中的表达与肿瘤分期,转移灶的有无及病理类型有关,且高表达与较差的预后相关。