高效液相色谱-二酰胺基色谱柱HILIC模式下对人参口服液中三种人参皂苷的测定

建立高效液相色谱-酰胺基色谱柱HILIC模式,对人参口服液进行含量测定。采用Venusil HILIC为色谱柱(4.5 mm×250 mm),以水和乙腈为流动相进行等度洗脱,建立数学模型,分析整个测定流程。结果表明,人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)在10.0~500μg/mL范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))均大于0.9998,系统精密度实验RSD分别为1.01%,1.21%,1.05%,三种人参皂苷的回收率均较好。研究为人参口服液中人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)的检测提供参考和借鉴。

HILIC模式下UPLC-MS/MS测定多个注射剂中依地酸二钠含量

目的 建立并确证维生素C注射液、盐酸多巴胺注射液、注射用奥美拉唑钠、注射用泮托拉唑钠、注射用艾司奥美拉唑钠中依地酸二钠含量测定方法。方法 采用亲水作用色谱(HILIC)柱,以20 mmol/L乙酸铵溶液为流动相A,乙腈为流动相B进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,采用电喷雾电离源,多反应监测模式进行检测。结果 专属性、线性及范围、重复性、中间精密度、加样回收率、检测限与定量限、耐用性均符合规定,对照品溶液及供试品溶液稳定性均较好。结论 该方法可用于测定维生素C注射液、盐酸多巴胺注射液、注射用奥美拉唑钠、注射用艾司奥美拉唑钠、注射用泮托拉唑钠中EDTA-2Na含量。

HILIC/LC-MS直接分离测定大气颗粒物中的15种有机胺

本文建立了一种基于亲水作用液相色谱柱(HILIC)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)的大气颗粒物有机胺的直接测定方法。颗粒物样品经甲醇提取、富集、浓缩后,对不同色谱柱与分析条件进行测试、对比,发现HILIC色谱柱可有效分离有机胺类化合物,高浓度以及低pH值的缓冲溶液可缩短大部分有机胺的保留时间,而流动相中有机相比例增加会延长保留时间。优化的HILIC/LC-MS分析方法可同时测定11种脂肪胺、2种脂环胺、1种芳香胺及1种醇胺,结合内标的有机胺标准曲线的线性相关系数R^(2)为0.991—0.999。本方法的检出限(S/N=3)为0.59—75.46 ng·mL^(-1),加标回收率为59%—92%,具有较高的精密度。该方法初步应用于青岛冬季大气细颗粒物样品中有机胺的测定,为大气有机胺的深入研究提供了方法参考与技术支撑。

HILIC-MS/MS法检测动物源运动营养品中9种抗病毒药物残留

目的:加强动物源性运动营养品中抗病毒药物残留的监控.方法:建立一种亲水交互作用色谱—串联质谱测定动物源运动营养品中9种抗病毒药物组分的方法.样品前处理采用1%乙酸—乙腈提取,经PRi ME HLB小柱净化后检测.采用乙腈—10 mmol/L乙酸铵溶液(含0.1%甲酸)流动相体系,在梯度洗脱模式下,经Sielc Obelisc R柱分离,实现9种目标物组分的分离.结果:9种抗病毒药物组分在0.1~20.0ng/m L质量浓度范围内线性良好,检出限为0.1~0.5μg/kg,定量限为0.3~1.5μg/kg,加标回收率达82.3%~95.7%,相对标准偏差为3.2%~5.9%(n=5).结论:试验方法可以满足动物源运动营养品中9种抗病毒药物残留的检测需求.

高效液相色谱-质谱技术在蛋白质组学中的应用

蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究从肽段分离,延伸到蛋白质和蛋白质复合物的分离,随着分析物的分子质量不断增大,其结构和组成复杂性也持续增加,分子特性也发生改变。面对不同的蛋白质组学研究对象,选择不同的分离模式、分离条件以及固定相参数是进行深度蛋白质组学研究的关键。本文综述了实验室常用的液相色谱分离模式,包括反相色谱(RPLC)、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水相互作用色谱(HIC)、离子交换色谱(IEC)和体积排阻色谱(SEC),以及其不同的组合模式与质谱联用在自下而上(bottom-up)分析、自上而下(top-down)分析、蛋白-蛋白相互作用分析中应用的研究。具体分析了色谱流动相与被分析对象之间的兼容性问题、色谱流动相与质谱兼容性问题,以及多维色谱中不同色谱模式之间流动相的兼容性问题。重点关注存在不兼容问题时研究者所提出的解决方案。此外,本文还评述了HPLC-MS结合样本前处理的方法在外泌体和单细胞蛋白质组学中的应用研究。总之,文章聚焦于近年来HPLC-MS技术在蛋白质组学中的研究进展,旨在为未来蛋白质组学领域的研究提供参考。

高效液相色谱法检测葡萄糖酸-δ-内酯

葡萄糖酸-δ-内酯常通过葡萄糖酸水溶液蒸发浓缩制备,所得产品常含有少量的葡萄糖酸和葡萄糖酸-γ-内酯。为了检测产品中葡萄糖酸-δ-内酯的质量分数,文中建立了可快速分离分析葡萄糖酸-δ-内酯、葡萄糖酸和葡萄糖酸-γ-内酯的高效液相色谱法,并优化了葡萄糖酸-δ-内酯的分析条件。以SPD-M20A二极管阵列检测器,采用Titank Hilic色谱柱分离葡萄糖酸-δ-内酯、葡萄糖酸和葡萄糖酸-γ-内酯,以0.01 mol/L乙腈-磷酸水溶液(体积比90∶10)为流动相进行等度洗脱,柱温为30℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为205 nm,进样量为20μL。结果表明,葡萄糖酸-δ-内酯在7 min内可实现较好的分离;在0.5—2.5 mg/mL内具有良好的线性关系(r>0.999),检出限为0.002 mg/mL,定量限为0.5 mg/mL,3个水平的平均加标回收率为98.8%—99.9%,相对标准偏差0.1%—0.4%(n=5)。此方法分析时间短、灵敏度高、分离效果好,可用于葡萄糖酸-δ-内酯、葡萄糖酸和葡萄糖酸-γ-内酯的同时检测。

应用HILIC技术检测乳制品中的尿素

基于亲水相互作用色谱(HILIC)技术,建立了可用于乳制品中尿素测定的液相色谱方法,其中固定相为Polar-Silica色谱柱,流动相为4mmol/L磷酸二氢铵溶液(pH=6.8)-乙腈(20:80,体积比),检测波长为200nm,流速为1mL/min。在该体系下,尿素保留时间适中,可与其他几种含氮极性化合物如三聚氰胺、三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺等实现基线分离。应用该方法测定了奶粉和液态奶制品中尿素的质量分数,其中奶粉中尿素的质量分数为1600～2400mg/kg,液态奶制品中尿素的质量分数为300～400mg/kg。

HILIC-MS/MS测定家兔血液中的NNK及其7种代谢物

建立了亲水相互作用色谱-串联质谱(HILIC-MS/MS)分析家兔血液中NNK及其代谢物的方法。以NNK-d4、NNAL-d3和HPB-d4为内标,血浆样品用乙腈沉淀蛋白后,直接进行HILIC分离和多反应监测(MRM)分析。结果表明,NNK及其代谢物的检出限在0.016～0.082 ng/mL之间,r为0.9991～1.0000,加标回收率为76.9%～116.3%,日内精密度为0.53%～6.52%。该方法适合于同时分析血液中的NNK及其7种代谢物。

基于核苷类化合物HILIC-ESI-TOF/MS分析的海洋动物药指纹图谱方法

探讨了核苷类化合物指纹图谱用于不同海洋动物药真伪鉴别的可行性,为贵重动物药的鉴别提供了一种新方法.采用亲水色谱-电喷雾飞行时间质谱(HILIC-ESI-TOF/MS)对不同海洋动物药中的16种核苷类化合物进行分析,构建了基于16种核苷类化合物的特征指纹图谱,结合相似度分析和聚类分析,用于不同海洋动物药的鉴别.结果表明,基于核苷类化合物HILIC-ESI-TOF/MS分析的指纹图谱能反映不同海洋动物药各自的固有特征,结合相似度分析和聚类分析可实现对不同海洋动物药的正确区分.说明核苷类化合物指纹图谱有望成为动物药鉴别的新方法.

UAE-HILIC-DAD-ESI-Q-TOF/MS法测定大枣中的环磷酸腺苷

环磷酸腺苷(cAMP)是大枣中特色最为突出的重要生物活性物质,本研究建立了超声辅助提取-亲水色谱-二极管阵列检测器-电喷雾四极杆飞行时间质谱法(UAE-HILIC-DAD-ESI-Q-TOF/MS)定性定量测定大枣中cAMP的方法。采用超声辅助提取法用于cAMP的提取,采用Waters Xbridge Amide(250 mm×4.6 mm,3.5μm)亲水色谱柱进行分离,以乙腈和20 mmol/L CH3COONH4+0.2%CH3COOH为流动相,流速0.8 mL/min,柱温为室温。采用电喷雾四极杆飞行时间质谱,在正离子模式下,进行分析。采用超声提取法,cAMP的提取率较高;在优化的亲水色谱条件下,大枣水提物中cAMP与其他化合物分离良好;根据电喷雾四极杆飞行时间质谱获得的母离子和子离子的精确分子量信息,结合标准对照品的保留时间和UV信息可以对其进行准确鉴别。cAMP在0.01μg/mL～50.00μg/mL范围内具有良好的线性关系(r2=0.999 1),采用发展的方法用于金丝小枣与大红枣中的cAMP的含量测定。本文发展的UVE-HILIC-DAD-ESI-Q-TOF/MS测定大枣中cAMP的方法,分离度好、灵敏度高,为快速鉴别和测定大枣中的cAMP及资源开发研究提供了分析测定方法支持。

HILIC-HPLC法测定吉非替尼原料药的酸降解杂质X的含量

目的建立亲水柱-高效液相色谱法(HILIC-HPLC)测定吉非替尼原料药中的酸降解杂质X的检测方法。方法采用Waters Xbridge HILIC柱(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.05mol·L^(-1)的甲酸铵缓冲液(用甲酸调节p H至4.0)(85∶15,v/v)为流动相,流速1.0 m L·min^(-1),柱温25℃,检测波长240 nm。结果杂质X在9.8 min左右出峰。吉非替尼与杂质X之间的分离度大于2.0。杂质X在0.10~1.0μg·m L^(-1)与峰面积呈良好的线性关系(r=1.000,n=6),相对校正因子为0.4,定量限和检测限分别为0.08 ng和0.02 ng,回收率在99.7%~100.5%内,RSD均<1.5%(n=3)。结论经方法学验证表明,该方法的专属性、线性关系等良好,可采用加校正因子的主成分自身对照法对本品的杂质X进行控制。

毛茛黄酮类成分的UPLC HILIC/Q-TOF-MS分析

目的:建立超高效亲水性液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC HILIC/Q-TOF-MS)对毛茛黄酮类成分进行分析的方法。方法:用ACQUITY UPLC BEH HILIC色谱柱,以甲醇∶水=1∶1含10mM乙酸铵(A)/乙腈∶甲醇=95∶5含10mM乙酸铵(B)梯度洗脱,使用ESI离子源,正、负离子模式下采集数据。结果:根据元素组成分析、二级质谱和相关文献,鉴定、推断出毛茛中11个主要成分,分别是小麦黄素,牡荆素,荭草素,异荭草素,芹菜素-6-C-β-D-葡萄糖苷-8-C-α-L-阿拉伯糖苷,小麦黄素-7-O-β-D-葡萄糖苷,芦丁等。结论:经过超高效亲水性液相色谱的分离,借助Q-TOF-MS测定的准确分子量及二级质谱信息可以判定毛茛中的主要黄酮类成分,为毛茛黄酮类成分分析提供了一种快速有效的方法。

HILIC-MS/MS法检测鸡肉中的金刚烷胺残留

建立亲水作用色谱-串联质谱法检测鸡肉中的金刚烷胺残留,样品经二氯甲烷提取,旋转蒸发至干,用1.0 mL甲醇溶解,正己烷净化后,上机检测。采用PC HILIC-3μm,100 mm×2.0 mm(i.d)色谱柱分离,在选择反应监测模式下检测,外标法定量。结果表明:金刚烷胺在浓度1μg/L^100μg/L范围内线性关系良好,相关系数r2=0.990 2,方法检测限为1μg/kg,定量限为5μg/kg。在不同添加水平下,其平均回收率为78.7%~93.5%,变异系数为4.2%~6.5%。

HILIC法测定牙膏中盐酸水苏碱的含量

目的：建立HILIC法（亲水色谱法）测定牙膏中盐酸水苏碱含量的方法。方法：色谱柱：Agela Venusil HILIC（4．6×250mm 5μm 100A）；流动相：乙腈-0．2％冰醋酸溶液（80：20，V／V）；流速为1．0mL／min；检测器：ELSD；雾化器温度：80℃；蒸发器温度：60℃；蒸发器气流：1．8SLM；柱温：35℃；进样量：20灿。结果：盐酸水苏碱进样量自然对数值在1．0～5．01μg之间与峰面积自然对数值呈良好的线性关系（r=0．999），平均回收率为98．01％。结论：该方法的稳定性、重现性和准确性良好，可作为牙膏中盐酸水苏碱的质量控制方法。

HILIC测定金丝小枣中核苷酸含量

本文以金丝小枣为试材,采用超声波辅助提取法对样品进行优化提取,然后进行亲水色谱分析,测定样品中9种核苷酸的含量。实验中采用HILIC XBridgeTMAmide色谱柱,以乙腈-0.3%乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.8m L/min,柱温为室温,检测波长260nm,进样量30μL;对金丝小枣中9种核苷酸含量进行分析。结果表明,该分析方法具有良好的精密度、重现性和稳定性,适合于金丝小枣中核苷酸含量的测定,为枣的质量控制研究提供了方法和技术参考。

HILIC-ELSD法测定盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠和依地酸二钠的含量

目的：建立亲水作用色谱-蒸发光散射检测器联用测定盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠和依地酸二钠含量的方法。方法：采用ZIC—HILIC柱（4．6mm×150mm，5μm）；100mmol·L^-1乙酸胺溶液（pH6．0）为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱；蒸发光散射检测器：漂移管温度45℃，气体压力40psi；流量0．5mL·min^-1。结果：亚硫酸氢钠在0．8—6．2mg·mL^-1范围内呈良好的线性关系，平均回收率99．1％，RSD为0．6％；依地酸二钠在0．08～0．50mg·mL^-1浓度范围内线性良好，平均回收率99．5％，RSD为0．4％。结论：所建方法简便、灵敏度高，重现性好，可用于盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠和依地酸二钠的含量测定。

应用HILIC技术测定茎直黄芪中苦马豆素

基于亲水相互作用色谱(HILIC)技术,建立了可用于茎直黄芪中苦马豆素测定方法。样品用甲醇提取,挥干后用0.05 M盐酸溶解,氯仿和水饱和正丁醇依次萃取。Waters Oasis MCX柱净化,Waters XBridge HILIC色谱柱分离,流动相为20 mmol/L磷酸二氢铵溶液(pH=7.8)-乙腈(20∶80,V/V),检测波长为205 nm,流速为0.5 mL/min。结果表明,应用该方法测定了茎直黄芪中苦马豆素含量,为46.44 mg/kg。建立的高效液相色谱检测方法简单、快捷、准确度高。

HILIC-MS/MS技术同时检测蛹虫草中虫草素、虫草酸、腺苷和肌苷含量的方法学

蛹虫草是我国具有极高药用价值的滋补中药材。对蛹虫草成分的含量进行准确的定性定量分析,可为相关产品质量控制、筛选高活性蛹虫草及进一步研究蛹虫草的功效提供技术手段。建立一种灵敏稳定的亲水作用色谱法串联质谱(HILICMS/MS)方法,同时对蛹虫草中虫草素、虫草酸(D甘露糖醇)、腺苷和肌苷的含量进行测定。研究发现其线性范围分别为0.02~5μg/mL(R^2=0.9953)、0.2~50μg/mL(R^2=0.9994)、0.002~0.5μg/mL(R^2=0.9970)和0.002~0.5μg/mL(R^2=0.9950)。采用HILICMS/MS技术,测定结果精密度小于10.0%,准确度在8.0%左右,具有较好的特异性、灵敏度和重现性。

HILIC色谱柱拆分抗坏血酸对映体及其在药物分析中的应用

采用HILIC色谱柱,利用高效液相色谱分离L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸,考察了流动相的组成、柱温和流速对分离L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸的影响.结果表明:流动相为乙腈-0.1%磷酸(93∶7),流速为0.8 m L·min^(-1),柱温为20℃,检测波长为243 nm的条件下,分离效果最优,分离度为7.79.该方法进一步应用于3种维生素C实际样品中抗坏血酸含量的测定,3种样品中均仅有L-抗坏血酸检出,其含量在96.62~985.8 mg·g^(-1)之间,相对标准偏差在0.65%~0.94%之间.

反相液相色谱和HILIC对奶制品中三聚氰胺的检测

应用Sepax GP-C8和Sepax Bio-C18柱按照国标(GB/T 22388-2008)对市场上购买得到的奶粉,以及应用Polar-Silica柱对鲜牛奶中的三聚氰胺进行了检测。结果表明,C18体现出比C8更高的分离选择性,避免了应用C8可能出现的假阳性检测结果。应用Polar-Silica检测鲜牛奶中的三聚氰胺,流动相为含挥发性醋酸铵盐的乙腈-水体系,可满足LC/MS的要求。Polar-Silica对三聚氰胺保留强度适中,且待测物在出峰处不会受到鲜牛奶中其它组分的干扰,因此可用于液态奶中三聚氰胺的快速检测与分析。