脑胶质瘤中HINT1基因甲基化状态的研究

目的探讨脑胶质瘤中HINT1基因启动子区的甲基化状态。方法采用双酶切联合定量PCR法和MSP法检测70例脑胶质瘤和30例正常脑组织中HINT1基因启动子区域甲基化状况。结果经双酶切后实时荧光定量PCR和MSP法检测,正常脑组织和胶质瘤HINT1基因启动子区域呈非甲基化状态,与性别、年龄和病理分级无明显的相关性。结论脑胶质瘤中HINT1基因启动子区域呈非甲基化状态。

脑胶质瘤中Hint1基因甲基化状态与表达的研究

目的探讨脑胶质瘤中Hint1基因启动子区的甲基化与表达情况。方法采用MSP和Western-blit法检测Hint1基因在脑胶质瘤和正常脑组织中甲基化状况及对应表达情况。实时荧光定量PCR的方法检测Hint1 mRNA的表达情况。结果经检测正常脑组织和胶质瘤Hint1基因启动子区域呈非甲基化状态,在83例胶质瘤患者脑组织中Hint1 mRNA的平均表达量为0.5190±0.0280,高于在30例正常脑组织中的平均表达量0.2236±0.0300。Hint1 mRNA的表达量与患者年龄、性别等临床特征无明显相关性而与患者的临床分期密切相关(P<0.01)。结论脑胶质瘤中Hint1基因启动子区域呈非甲基化状态,其表达程度与患者的临床分期密切相关。

猪HINT1基因多态性及其在肌肉组织中表达差异的分析

【目的】探究HINT1基因在猪肌肉生长分子调控机制中的作用。【方法】试验选取30、90和180日龄的藏猪和大约克猪(各8头)作为试验对象,利用实时荧光定量PCR技术检测HINT1基因在背最长肌、腿肌组织中mRNA的差异表达,采用Sanger测序法对藏猪(48头)和大约克猪(45头)HINT1基因的起始密码子上游3 000 bp区域左右进行单核苷酸多态性分析。【结果】在背最长肌和腿肌组织中,藏猪(TP)和大约克猪(YY)HINT1基因mRNA的表达量均随着日龄的增长呈逐渐降低的趋势;在背最长肌组织中,30日龄藏猪表达量极显著高于大约克猪(P<0.01),90日龄藏猪和大约克猪表达差异不显著(P=0.284),180日龄藏猪显著高于大约克猪(P<0.05);在腿肌组织中,30日龄和90日龄的藏猪HINT1基因表达量均极显著高于大约克猪(P<0.01),180日龄藏猪的表达量显著高于大约克猪(P<0.05);在起始密码子上游3 000 bp区域左右筛选到5个SNPs位点:A-2230G、C-2209T、A-2174G、T-2083C和A-2082G,且两猪种间等位基因频率存在极显著差异(P<0.01),品种内基因频率均符合哈迪温伯格定律。【结论】推测HINT1基因的表达与骨骼肌组织的生长发育呈负相关。研究结果为进一步改善猪肉质品质及调控猪肌肉组织生长发育的分子机制提供了理论依据。

HINT1基因变异致常染色体隐性遗传轴索型神经病伴神经性肌强直藏族家系及文献复习

目的分析HINT1基因变异致常染色体隐性遗传轴索型神经病伴神经性肌强直(ARAN-NM)的特点。方法回顾性病例总结。分析2023年8月在北京大学第一医院儿科确诊为ARAN-NM的2例藏族兄妹的临床资料。检索各个数据库收录的相关中国病例的文献并进行分析。结果先证者及其兄分别为13岁和19岁,均于11岁出现步态异常,其后出现足内翻及跛行、拇指力弱,先证者合并神经性肌强直。查体先证者及其兄均四肢肌力下降,拇指和下肢远端为著,先证者下肢远端肌肉萎缩,先证者兄双手肌肉萎缩,二人双足均马蹄内翻畸形。先证者肌电图(EMG)检查示周围神经病损(运动和感觉纤维轴索受累,远端受累为重)和肌强直电位。家系全外显子组测序检测到二人HINT1基因纯合致病性变异[c.169A>G(p.K57E)],确诊ARAN-NM。先证者口服卡马西平后神经性肌强直症状缓解,麻木、无力症状明显改善。先证者和其兄行骨科手术治疗和康复治疗后足部畸形及步态明显改善。检索到符合条件的中文文献2篇(2例),英文文献4篇(8例)。加上本例先证者及其兄共12例,10例有临床资料,起病年龄为2~16岁(1例未知),诊断年龄为13~33岁,9例有肌无力,肌无力以远端为著,8例伴神经性肌强直,9例出现肌肉萎缩,7例合并足畸形,2例合并感觉障碍,9例检测肌酸激酶的患者均有升高,EMG均提示神经源性损伤,6例可见神经性肌强直放电,3例接受卡马西平治疗,部分症状缓解。12例均有遗传学资料,均为错义突变/无义突变,高频变异为c.112T>C(p.C38R)。结论ARAN-NM是由HINT1基因变异引起的常染色体隐性遗传性罕见神经肌肉病,临床表现无民族差异,主要为肢体远端无力伴神经性肌强直,卡马西平可缓解部分症状,骨科矫形治疗可改善足部畸形和步态。

食管胃交界癌前病变及早期癌组织HINT1基因甲基化状态分析

目的组氨酸三聚体核苷结合蛋白1基因具有明显的肿瘤抑制作用,本研究旨在探讨食管胃交界癌前病变及早期癌中HINT1启动子区CpG岛甲基化状态及临床意义。方法提取2012-2-1-2013-12-30河北医科大学第四医院诊治的食管胃交界癌前病变、早期癌及进展期癌共184例病变组织及45例正常对照组织基因组DNA。根据Siewert分型分为TypeⅠ型、TypeⅡ型和TypeⅢ型。TypeⅠ型包括Barrett食管31例(BE组)、食管远端高级别上皮内瘤变及早期癌16例(EHIN及EEC组)、食管腺癌18例(EA组);TypeⅡ型包括贲门低级别上皮内瘤变23例(CLIN组)、贲门高级别上皮内瘤变及早期癌30例(CHIN及CEC组),贲门腺癌36例(CA组);TypeⅢ型包括近端胃低级别上皮内瘤变14例(SGLIN组)、近端胃高级别上皮内瘤变及早期癌12例(SGHIN及SGEC组),近端胃癌4例(SGA组)。采用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测上述组织中HINT1基因启动子区CpG岛甲基化状态,对比分析HINT1基因甲基化与食管胃交界不同癌变阶段的相关性。结果 (1)TypeⅠ型:BE组、EHIN及EEC组、EA组和对照组甲基化发生率分别为12.9%(4/31)、43.8%(7/16)、50.0%(9/18)和0,EHIN及EEC组HINT1基因甲基化率显著高于对照组(χ~2=6.64,P=0.007)和BE组(χ~2=5.601,P=0.029),与EA组比较差异无统计学意义(χ~2=0.133,P=0.716)。(2)TypeⅡ型:CLIN组、CHIN及CEC组、CA组和对照组甲基化率分别为34.8%(8/23)、53.3%(16/30)、55.6%(20/36)和6.7%(1/15),CHIN及CEC组和CA组HINT1基因甲基化率显著高于对照组(χ~2=9.265,P=0.002),CHIN及CEC组、CA组和CLIN组比较差异无统计学意义(χ~2=2.697,P=0.260)。(3)TypeⅢ型:SGLIN组、SGHIN及SGEC组、SGA组和对照组甲基化率分别为21.4%(3/14)、66.7%(8/12)、75.0%(3/4)和6.7%(1/15),SGHIN及SGEC组与对照组(χ~2=10.80,P=0.003)和SGLIN组(χ~2=5.418,P=0.045)比较差异均有统计学意义。结论 HINT1基因启动子区异常甲基化可能与食管胃交界腺癌发生发展相关,提示三者可能存在相似的分子机制。

HINT1对人黑素瘤A375细胞裸鼠皮下异种移植瘤模型肿瘤生长及凋亡的影响

目的 探讨组氨酸三聚体核苷结合蛋白1（HINT1）对人黑素瘤A375细胞裸鼠皮下异种移植瘤模型肿瘤生长及凋亡的影响.方法 三组裸鼠随机皮下接种HINT1-A375、neo-A375及未转染的A375细胞,观察各组移植瘤的生长情况,计算成瘤率.组织病理切片观察移植瘤组织形态学改变,并应用TUNEL法检测移植瘤组织中细胞凋亡情况.结果 三组裸鼠皮下异种移植瘤成瘤率均为100%.HINT1组移植瘤生长速度慢,接种后18 d移植瘤生长速度显著低于neo组及A375细胞组（P＜0.01）.HINT1组、neo组及A375细胞组肿瘤重量分别为（0.04±0.00）g、（0.23±0.00）g、（0.29±0.03）g;肿瘤体积分别为（0.06±0.04）cm^3、（0.34±0.15）cm^3、（0.43±0.19）cm^3.HINT1组肿瘤重量及体积均显著低于neo组及A375细胞组（P值均＜0.01）.组织病理结果显示,与neo组及A375细胞组相比,HINT1组肿瘤团块较小,细胞异形小,病理性核分裂象少见,瘤团内未见大片坏死灶.HINT1组中平均凋亡细胞百分比为12.87%±1.18%,显著高于neo组（3.22%±0.49%）及A375细胞组（3.00%±0.53%）（P值均＜0.01）.结论 高表达HINT1可显著抑制A375细胞裸鼠皮下异种移植瘤模型肿瘤的生长,促进其凋亡,提示HINT1基因可能是人黑素瘤的抑癌基因之一.

一例神经性肌强直与轴索型神经病患者的HINT1基因变异研究

目的探讨1个神经性肌强直与轴索型神经病(neuromyotonia and axonal neuropathy,NMAN)家系的临床及遗传学特点。方法收集先证者及其双亲的临床资料与外周血样,应用三联重复引物PCR联合毛细管电泳检测先证者强直性肌营养不良致病基因DMPK与ZNF9的动态突变;应用高通量测序筛查神经系统遗传病致病基因的变异,用Sanger测序验证检出的基因变异;应用Sanger测序分析双亲及100名非病个体的变异位点基因型;分析基因变异的致病性。结果未发现DMPK与ZNF9基因动态突变位点的异常扩展;测序结果显示先证者HINT1基因第3外显子存在c.335C>T(p.R119W)纯合错义变异,其表型正常的双亲均为上述变异的携带者,对照群体未检出该变异。基于ACMG指南的评价提示为致病性变异。结论在NMAN患者中发现的这个新的致病变异(c.335C>T,p.R119W)为HINT1基因与NMAN的关系提供了更多的证据,填补了中国人群HINT1基因突变谱的空白。

组氨酸三聚体核苷结合蛋白1在黑素瘤组织中的表达及其基因启动子甲基化水平研究

目的：检测组氨酸三聚体核苷结合蛋白1（HINT1）在黑素瘤中的表达和HINT1基因启动子甲基化状态，探讨HINT1启动子甲基化与临床病理参数的关系。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测56例黑素瘤及瘤旁组织和51例色素痣组织中HINT1基因启动子区甲基化水平，免疫组化法检测56例黑素瘤和51例色素痣组织中HINT1蛋白的表达。结果 MSP显示，黑素瘤组织、瘤旁组织及色素痣组织中HINT1基因启动子区甲基化率分别为76.8%（43/56）、33.9%（19/56）和35.3%（18/51），黑素瘤组HINT1基因启动子区甲基化率明显高于瘤旁组织组和色素痣组，且差异有统计学意义（χ2=20.810、18.749，均P〈0.05），瘤旁组织组与色素痣组间差异无统计学意义（χ2=0.022，P〉0.05）。免疫组化显示，56例黑素瘤和51例色素痣组织中分别有12例（21.4%）和42例（82.4%）HINT1蛋白阳性表达，两组阳性率差异有统计学意义（χ2=39.633，P〈0.01）。12例HINT1蛋白阳性的黑素瘤组织中，有6例HINT1基因启动子甲基化，而在44例HINT1蛋白阴性的癌组织中HINT1启动子甲基化率高达84.1%（37/44），两组差异有统计学意义（χ2=6.147，P=0.013）。56例黑素瘤中，HINT1基因启动子区甲基化率在Clark分级Ⅰ~Ⅱ级组（59.1%，13/22）与Ⅲ~Ⅴ级组（88.2%，30/34）间差异有统计学意义（χ2=6.365，P=0.012）。结论 HINT1在黑素瘤组织中低表达，其机制可能与启动子区发生高甲基化有关；HINT1启动子区高甲基化可能参与黑素瘤的发生及发展。

组氨酸三聚体核苷结合蛋白1的结构及其肿瘤抑制功能

组氨酸三聚体核苷结合蛋白1是一种嘌呤核苷酸结合蛋白,以二聚体形式存在,是组氨酸三聚体超家族最古老的分支之一.研究发现,组氨酸三聚体核苷结合蛋白1是一种肿瘤抑制基因,具有肿瘤抑制的功能.组氨酸三聚体核苷结合蛋白1在体内、外可抑制多种肿瘤细胞的增殖,并可通过线粒体依赖凋亡途径诱导肿瘤细胞凋亡 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1可与激活蛋白-1、小眼畸形转录因子等多种转录因子相互作用,调节细胞的增殖及凋亡 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1还可作用于Wnt信号通路,抑制肿瘤细胞的生长与增殖.组氨酸三聚体核苷结合蛋白1在部分肿瘤细胞中的低表达可能与启动子区超甲基化有关.