HIST1H1E基因突变致Rahman综合征1例并文献复习

目的探讨HIST1H1E基因突变致Rahman综合征的临床及遗传学特点。方法回顾性分析2018年6月收治的1例Rahman综合征患儿的临床资料。以Rahman综合征、HIST1H1E基因、组蛋白H1、突变、Rahman syndrome、HIST1H1E gene、Histone H1为检索词,检索建库至2019年12月中国知网、万方数据库、维普期刊服务平台及PubMed的相关文献进行文献复习。结果患儿,男,2岁8个月,身高98 cm、体质量19 kg、头围54 cm,面容特殊(脸颊丰满,发际线高,眦距增宽,眼睑裂狭窄),严重龋齿,隐睾。血氨基酸及肉碱谱检测示羟异戊酰肉碱增高,乙酰肉碱增高,鸟氨酸降低。骨龄相当于5.5岁。儿童发育筛查(DST)异常。全外显子组基因测序提示患儿HIST1H1E基因存在c.446dupA,p.Ser150Glufs*46杂合突变(新发变异),未在HGMD及gnomAD等数据库中收录,根据美国ACMG变异分类指南评级为致病性变异。检索到英文文献4篇,共31例Rahman综合征患儿,男13例、女18例;包括14种HIST1H1E基因突变型,均位于其C末端结构域94个碱基对的区域中,为移码突变,形成相同的具有38个氨基酸羧基末端的突变蛋白。结论HIST1H1E基因突变导致的Rahman综合征为罕见的常染色体显性遗传病,临床表现为轻度至重度智力障碍,发育落后和不同程度的躯体过度生长,全外显子基因检测可协助诊断。

HIST1H4F基因甲基化在三阴性乳腺癌中的预后价值

目的探讨HIST1H4F基因甲基化在三阴性乳腺癌中的意义。方法收集31例乳腺癌新鲜的癌组织标本及正常乳腺组织标本,提取DNA后使用亚硫酸盐进行甲基化转化处理,荧光定量PCR进行HIST1H4F基因甲基化检测,分析癌组织标本和正常乳腺组织中的HIST1H4F基因甲基化差异情况,并分析三阴性乳腺癌的HIST1H4F基因甲基化情况。同时收集37例三阴性乳腺癌的石蜡标本,提取DNA后同样方法处理再进行HIST1H4F基因甲基化检测,分析HIST1H4F基因甲基化与三阴性乳腺癌预后的关系。结果新鲜组织标本中周围正常乳腺组织和癌组织中HIST1H4F甲基化阳性率均为74.2%(23/31),两者的HIST1H4F甲基化阳性率无明显区别(χ^(2)=0000,P=1.000),分析发现三阴性乳腺癌组织中HIST1H4F甲基化阳性率高于非三阴性乳腺癌(93.8%vs.53.3%,P=0.015),HIST1H4F甲基化阳性乳腺癌的组织学分级Ⅲ级和ER阴性的乳腺癌中比率高于HIST1H4F甲基化阴性乳腺癌(60.9%vs.12.5%,P=0.037;69.6%vs.25.0%,P=0.043)。在三阴性乳腺癌的石蜡组织标本进行HIST1H4F甲基化检测,发现HIST1H4F甲基化阳性率为27.0%,且HIST1H4F甲基化阳性组和阴性组的DFS(50.0%vs.66.7%,χ^(2)=1.141,P=0.285)和OS(90.0%vs.96.3%,χ^(2)=1.635,P=0.201)在统计学上均无明显区别。结论在新鲜组织标本中三阴性乳腺癌中检测HIST1H4F基因甲基化阳性率高,HIST1H4F基因甲基化阳性乳腺癌的组织学Ⅲ级和ER阴性比率高,而在三阴乳腺癌石蜡组织标本中检测的HIST1H4F甲基化阳性率较低,尚不能确定HIST1H4F甲基化与三阴性乳腺癌预后是否相关,仍有待于进一步研究。

2022-2023年山东省A(H1N1)pdm09流感病毒HA、NA基因变异特征分析

目的 了解山东省2022-2023流感监测年度分离的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的变异特征,为流感的防控提供科学依据。方法 从流感监测网络实验室分离的流感毒株中按地市随机选取14株A(H1N1)pdm09亚型流感毒株,以WHO推荐的当季疫苗株为参考进行全基因组测序,并采用荧光法开展神经氨酸酶抑制(neuraminidase inhibition,NI)实验以评估药物敏感性。结果 山东省2022-2023年度分离的A(H1N1)pdm09流感病毒属于6B.1A分支中的5a.2a进化簇,核苷酸序列比对分析显示,HA和NA基因与2021-2023年度北半球疫苗株A/Victoria/2570/2019的亲缘关系较为接近,同源性分别为98.5%~98.7%和98.8%~99.1%。氨基酸序列分析显示,HA蛋白有20个位点发生了氨基酸序列变异,并发现1株病毒可能发生抗原漂移,有3株病毒发生了HA蛋白糖基化位点的缺失。NA酶相关重要位点未发生变异。NI实验显示,所测流感毒株均对抗流感病毒药物敏感。结论 所监测毒株与疫苗株整体同源性很高,但氨基酸存在一定程度变异,今后有必要持续开展流感病毒基因变异特征监测以了解流感流行的风险,以及评价基因变异对流感疫苗和治疗药物效果的影响。

台儿庄地区心脑血管疾病患者ApoE和SLCO1B1基因多态性分析

目的:分析台儿庄地区心脑血管疾病患者他汀类药物代谢相关基因ApoE和SLCO1B1的基因多态性分布情况,评估患者对服用他汀类药物的疗效和风险,指导临床进行个体化精准用药。方法:以2022年3月-2023年1月与台儿庄人民医院神经内科及心内科就诊的268例心脑血管病患者为研究对象,应用DNA连接酶测序法对患者外周血基因组中ApoE和SLCO1B1基因进行检测,分析基因多态性分布情况,并比较不同性别,不同年龄段,不同地域间的基因型分布差异。结果:观察268例台儿庄地区心脑血管病患者的ApoE及SLCO1B1基因位点多态性突变频率符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。ApoE基因型共检出5种,其中E3/E3型占比最大,为76.9%,其他基因型E2/E2型,E2/E3型,E3/E4型,E4/E4型占比依次为0.37%,10.4%,11.9%,0.37%,未检出E2/E4型。疗效正常基因型E3型(E2/E4+E3/E3)占比最高,为76.87%,疗效较好基因型E2型(E2/E2+E2/E3)与疗效较差基因型E4型(E3/E4+E4/E4)占比分别为10.82%,12.31%。不同性别,不同年龄患者间ApoE不同疗效基因型分布差异无统计学意义(P>0.05),但不同地区间比较,ApoE不同疗效基因型分布差异有统计学意义(P<0.05)。SLCO1B1基因共检出6种基因型,其中*1b/*1b,*1b/*15,*1a/*1b占比较高,分别为28.73%,20.15%,41.79%,其他基因型*1a/*1a,*1a/*15or*1b/*5,*15/*15频率分别为5.6%,3.36%,0.37%,未检测到*1a/*5、*5/*5和*5/*15基因型。基因型组合中,肌病低风险基因型(*1a/*1a+*1a/*1b+*1b/*1b)占比最高为76.12%,肌病中风险基因型(*1a/*5+*1a/*15or*1b/*5+*1b/*15)和肌病高风险基因型(*5/*5+*5/*15+*15/*15)占比分别为23.51%,0.37%。不同性别,不同年龄,不同地区间患者比较,SLCO1B1不同肌病风险基因型频率分布差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:台儿庄地区心脑血管病患者ApoE基因以疗效正常型E3型为主,SLCO1B1基因以肌病低风险基因型为主,且两种基因型各组合与年龄,性别无关,ApoE基因存在地区差异。通过基因检测可筛选出12.31%疗效较差的患者以及23.88%的肌病中高风险患者,可辅助临床制定合理的用药方案。

基于“5W1H 5E”教学法的“电磁场与电磁波”课程教学创新改革

“电磁场与电磁波”是安徽工程大学电子信息科学与技术专业的核心课。针对教学中存在的高阶思维难建立、知识迁移难应用、学习情感难持续等“痛点”问题,课程团队坚持以学生发展为中心,提出“教、学、做(仿真与实验)合一”的教学理念,将立德树人的根本任务融入课程,深挖“科学”思政,运用“5W1H5E”教学法,从源于教材,高于教材立体构建知识体系,利用数字化资源构建“线上线下混合教学”师生学习共同体,虚拟仿真与实验结合、多元化考核评价体系等方面进行教学创新。经过近6年的改革实践,学生的高阶目标、内在驱动力与科技创新力得到了提升,育人效果明显。

LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT在糖尿病肾病患者中的表达及与肾功能的相关性研究

目的探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性。方法选取于2021年11月—2023年12月在武汉大学人民医院肾内科收治的DN患者106例为DN组,并根据24 h尿蛋白定量(24 h Upro)水平分为正常蛋白尿亚组43例(<30 mg)、微量蛋白尿亚组39例(30~<300 mg)、大量蛋白尿亚组24例(≥300 mg),另选取同期医院单纯糖尿病患者106例作对照组,检测患者血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平;Pearson法分析LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT与肾功能指标的相关性;Logistic分析影响DN患者肾功能损伤的因素。结果DN组血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平低于对照组(t=11.471、10.257,P均<0.001)。血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT比较,正常尿蛋白亚组>微量尿蛋白亚组>大量尿蛋白亚组(F=58.720、117.722,P均<0.001),BUN、SCr、UA水平比较,正常尿蛋白亚组<微量尿蛋白亚组<大量尿蛋白亚组,差异均有统计学意义(F=122.493、595.589、53.178,P均<0.001);LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT分别与BUN、SCr、UA呈负相关(r=-0.487、-0.498、-0.521,-0.527、-0.515、-0.534,P均<0.001);Logistic回归分析显示,糖尿病病程长及高BUN、SCr、UA水平是影响DN患者肾功能损伤的危险因素[OR(95%CI)=1.672(1.128~2.479)、2.839(1.534~5.253)、2.754(1.512~5.017)、2.693(1.464~4.954)],高LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT是保护因素[OR(95%CI)=0.875(0.798~0.959)、0.898(0.832~0.969)]。结论血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平与DN患者肾功能有关,可能是评估DN患者肾功能的潜在指标。

茶树冷胁迫诱导H1-histone基因的克隆与序列分析

利用cDNA-AFLP技术对茶树不同低温胁迫处理下的基因表达差异进行了分析,获得一低温诱导后特异表达片段TDF8(transcript derived fragment,TDF)。BLAST比对结果显示,该片段与其它物种的逆境诱导特异表达的H1-histone基因有很高的相似性。通过RACE分别扩增出其3′和5′末端序列,成功获得该基因cDNA全长序列(GenBank登录号EU716314)。所得序列全长916 bp,其开放阅读框共编码207氨基酸,蛋白分子量约为30.77 kD。该基因氨基酸序列分析表明,与烟草的胁迫诱导H1-histone基因的氨基酸序列一致性达79%。可以认为,该基因应该属于逆境诱导条件下表达的H1-histone基因家族成员之一。

LncRNA TUG1介导Nrf2/HO-1信号通路对脂多糖诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸上调基因(TUG)1介导核因子E2相关因子(Nrf)2/血红素氧化酶(HO)-1信号通路对脂多糖诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 检测脂多糖诱导的心肌细胞中LncRNA TUG1表达量,将生长期脂多糖诱导的心肌细胞分为对照组、上调组、下调组。对照组不做处理,上调组做LncRNA TUG1上调质粒转染,下调组做LncRNA TUG1沉默质粒转染。鉴定LncRNA TUG1转染效率,分析调控LncRNA TUG1对脂多糖诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激、炎性反应及Nrf2/HO-1通路蛋白表达量的影响。结果 与对照组相比,上调组LncRNA TUG1、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)表达量、凋亡率、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平显著上升,Bcl-2、Nrf2、HO-1表达量、超氧化物歧化酶(SOD)水平显著下降,下调组LncRNA TUG1、Caspase-3、Bax表达量、凋亡率、LDH、MDA、IL-6、TNF-α水平显著下降,Bcl-2、Nrf2、HO-1表达量、SOD水平显著上升(P<0.05)。结论 脂多糖诱导的心肌细胞经下调LncRNA TUG1干预后凋亡率下降,氧化应激、炎性反应缓解,其机制可能与Nrf2/HO-1信号通路激活有关。

长春市2016—2020监测年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征分析

目的分析长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征,了解其变异情况及遗传进化特征。方法选取2016—2020年度甲型H1N1流感病毒分离株109株,PCR扩增HA基因并进行序列测定;利用生物信息学软件对分离株的HA基因进行进化和变异分析。结果长春市109株分离株与疫苗株A/California/07/2009的HA蛋白相比均有S84N、S162N和I216T共同的氨基酸位点变异,且有1株发生了HA蛋白D222N位点突变,提示此毒株可引起患者下呼吸道症状。109株病毒株的HA基因之间核苷酸同源性为96.9%~100%,氨基酸同源性为97.2%~100%。在进化树分析上,都属于6B.1大分支,并且随着时间的推移,HA在基因进化树上离早期疫苗株A/California/7/2009越来越远,同一年份里也有毒株位于不同的小分支内。结论长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因在不断的变异中,应持续进行监测,为预防甲型H1N1流感大流行提供参考。

黄鳝AK1基因序列特征及在性腺中的表达模式分析

【目的】探究腺苷酸激酶1(adenylate kinase 1, AK1)序列特征及其在黄鳝性腺发育过程中的功能。【方法】克隆黄鳝AK1基因序列,对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测AK1在黄鳝各组织、不同发育时期性腺以及H2O2孵育后卵巢中的表达情况,并利用免疫组化技术定位AK1在黄鳝性腺中的表达位置。【结果】黄鳝AK1编码区序列为630 bp,编码209个氨基酸残基,具有AK家族保守的NMP和LID结构域,与其他鲤科鱼类的同源基因具有较高的序列相似性;黄鳝AK1在垂体、眼睛、心、肝、肾、肠、脾、肌肉、血液、卵巢和精巢中均有表达,在肌肉组织中的表达量最高,在血液中表达量最低。AK1在卵巢发育周期的卵黄生成早期性腺和性逆转周期的间性晚期性腺表达量最高,而在卵黄生成中晚期性腺和间性早期性腺表达最低。H2O2孵育后各浓度组AK活性的表达均呈现先下降后上升的趋势(P<0.05),浓度越高变化的趋势越明显(P<0.05);而AK1的表达均受到抑制。AK1主要定位于卵黄生成早期性腺的颗粒细胞中。【结论】AK1参与了黄鳝性腺的发育,这为揭示黄鳝性腺发育过程中的能量代谢等生物学过程奠定了一定的基础。

2019—2021年华东地区6株禽源H3亚型流感病毒的遗传进化分析

H3亚型流感病毒在自然界广泛存在,可感染人、猪、马、犬、禽等众多宿主并能发生跨种间传播,危害不容忽视。本研究于2019—2021年在华东地区活禽市场采集表观健康的家禽喉头与泄殖腔棉拭,通过血清学试验鉴定、筛选出6株代表性水禽源H3亚型流感病毒,并经RT-PCR试验确定5株为H3N2亚型、1株为H3N1亚型。进一步对6株分离株进行全基因组测序、同源性比对和遗传进化分析,结果显示:HA蛋白裂解位点处均为PEKQTR/GLF,不存在连续碱性氨基酸,符合低致病性禽流感病毒的分子特征;受体结合位点处均为禽源特征性的226Q和228S,提示其跨种传播至哺乳动物的潜能较低;内部基因片段来源多样化,与H3N8、H4N6、H5N8、H6N1、H7N7、H0N3等众多亚型禽流感病毒的亲缘关系密切;除JS1018/19和JS1094/19的NS基因属于北美谱系以外,其余均属于欧亚谱系的禽源分支,与犬、马、猪、人等哺乳动物源毒株的亲缘关系较远,提示虽然可能存在不同进化谱系间的基因重组但并未发生从禽到哺乳动物宿主的基因交换。该研究结果丰富了H3亚型禽流感病毒的流行病学数据,为进一步了解我国低致病性禽流感病毒的分布特征提供了参考依据。

SLCO2A1基因突变致厚皮性骨膜病一例

厚皮性骨膜病是一种罕见的遗传性疾病。本例男性患者,17岁,关节肿胀2年,体格检查发现前额横行皱纹、杵状指、鹦鹉嘴样甲、多发痤疮、毛囊炎,影像学检查提示骨皮质增厚、骨膜增厚、关节炎,高通量测序联合Sanger测序验证发现SLCO2A1基因突变,1个致病[c.941-1G>A(p.?)]的杂合变异和1个疑似致病[c.1286A>G(p.Tyr429Cys)]的杂合变异。对患者父母上述基因位点行遗传追踪,患者母亲携带c.941-1G>A(p.?),患者父亲携带c.1286A>G(p.Tyr429Cys)。给予非甾体抗炎药治疗后症状明显减轻。

基于生物信息学探究NR1H4在慢性萎缩性胃炎及药物预测中的作用

目的通过生物信息学方法获得慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)的差异基因,预测治疗CAG的小分子药物。方法通过基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库获取2份CAG芯片(GSE27411、GSE116312)基因表达样本,利用R语言筛选出CAG差异表达基因,获得CAG免疫相关基因进行基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析。利用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,筛选出核心基因,进一步研究核心基因的免疫浸润,预测其小分子化合物,通过MOE2022进行分子对接,通过GEPIA2网站进行生存分析。结果基于GEO数据库筛选出差异基因517个。GO富集分析发现主要涉及粒细胞趋化性、白细胞趋化性、中性粒细胞趋化性等生物过程。KEGG富集分析显示主要富集于细胞因子-细胞因子受体相互作用通路、核因子κB信号通路、白细胞介素-17信号通路。PPI网络筛选前6个核心基因即NR1H4、CCK、CCL20、CXCL1、LCN2、SAA1,通过相关验证,NR1H4作为核心基因。免疫细胞浸润分析结果显示中央记忆CD8 T细胞、效应记忆CD4 T细胞、γδT细胞、自然杀伤细胞、中性粒细胞等免疫细胞可能参与CAG的发生发展,而中性粒细胞与NR1H4呈正相关。分子对接显示柯里拉京、豆甾醇、栀子苷、桔皮素、鹅去氧胆酸、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯6种小分子药物与NR1H4有较好的结合力。结论本研究初步探讨CAG的潜在机制,NR1H4作为关键基因与中性粒细胞可能在CAG“炎-癌转化”进程中具有重要意义,可为CAG的“炎–癌转化”机制研究提供一定的参考依据。

SLCO1B1、ApoE基因多态性对瑞舒伐他汀治疗血脂异常超高危动脉粥样硬化性心血管疾病患者的影响

目的 探究SLCO1B1、载脂蛋白(Apo)E基因多态性对瑞舒伐他汀治疗血脂异常所致超高危动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)患者的影响。方法 268例血脂异常的超高危ASCVD患者,按照基因型检测结果分组。观察治疗前后各组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血清肌酐(Cr)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)水平,研究期间患者肌痛发生情况。结果 所有入组患者中ApoE等位基因分布为e2 25例,e3 201例,e4 42例;基因型分布:E2/E2 6例,E2/E3 29例,E3/E3 150例,E2/E4 9例,E3/E4 73例,E4/E4 1例。SLCO1B1中521 T/C位点基因型分布分别为:TT 190例,TC 66例,CC 12例;SLCO1B1中388 A/G位点基因型分布分别为:AA 8例,AG 100例,GG 160例。符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。治疗前,TC+CC组与TT组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,TC+CC组LDL-C水平显著低于TT组(P<0.05),TC+CC组CK水平显著高于TT组(P<0.05)。治疗前后,AA、AG与GG组血脂及肝肾功能指标差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前,e2、e3与e4组血脂及肝肾功能指标差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,e2、e3与e4组LDL-C水平差异有统计学意义(P<0.05)。SLCO1B1 521 T>C中TT、TC+CC的肌痛发生率分别为4.21%(8/190)、11.54%(9/78),不同基因型患者肌痛发生率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ApoE基因中e2等位基因与E3/E3基因型有效降低脂异常所致的超高危ASCVD患者的LDL-C水平,e4等位基因的ASCVD者服用瑞舒伐他汀的疗效欠佳,SLCO1B1 521T>C基因多态性会导致瑞舒伐他汀引起肌痛,SLCO1B1 521T>C中CC基因型会更加容易出现肌痛现象。瑞舒伐他汀治疗期间应当注重SLCO1B1、ApoE基因多态性的检测。

2017-2019年呼和浩特市甲型A(H1N1)pdm09流感病毒基因特征分析

目的了解呼和浩特市甲型A(H1N1)pdm09流感病毒遗传进化特征及抗原位点、糖基化位点和耐药位点的变异情况,为流感防控提供科学依据。方法采集2017-2019年呼和浩特市3家哨点医院的流感样病例(ILI)咽拭子标本进行核酸检测,阳性样本通过MDCK细胞和鸡胚进行病毒分离。随机抽取15株甲型A(H1N1)pdm09流感毒株进行基因测序分析。采用MEGA7.0.14软件、DNASTAR7.0.1软件和NetNGlyc1.0软件进行基因进化树分析、核苷酸同源性分析和糖基化位点分析。结果呼和浩特市2017-2019年15株甲型A(H1N1)pdm09分离株与疫苗株A/Brisbane/02/2018和A/Michigan/45/2015共同属于6B.1分支。各年度分离株与疫苗株A/Brisbane/02/2018的组间遗传距离分别为0.004、0.011和0.013。相较于疫苗株A/California/07/2009和A/Michigan/45/2015,2017年起甲型A(H1N1)pdm09病毒抗原位点变异较大,但与疫苗株A/Brisbane/02/2018相比并未发生抗原漂移现象,与疫苗株匹配效果较好。分离株与疫苗株A/California/07/2009相比多了糖基化位点162NQS/T。分离株与神经氨酸酶抑制剂耐药相关的9个关键氨基酸位点没有发生变异。结论随着时间推移,呼和浩特市甲型A(H1N1)pdm09流感病毒与疫苗株的基因相似性逐渐降低,提示呼和浩特市病毒在不断进化中,应持续监测。本次研究中的分离株与WHO推荐的2019-2020年北半球疫苗株A/Brisbane/02/2018相比未发生抗原漂移现象,WHO推荐的疫苗株对目前流行的甲型A(H1N1)pdm09流感仍有较好的保护效果。所有分离株NA基因均未发生H275Y耐药突变,提示呼和浩特市流行的甲型A(H1N1)pdm09流感仍然对奥司他韦等NA抑制剂药物敏感。

葡萄籽原花青素调控Nrf2/HO-1通路减弱多柔比星诱导的心脏毒性

目的:观察葡萄籽原花青素对多柔比星(DOX)诱导的心脏毒性以及核因子E2相关基因(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的作用。方法:通过DOX构建小鼠急性心脏毒性模型,本实验分为对照组(正常小鼠)、葡萄籽原花青素组、DOX组、DOX+葡萄籽原花青素组、DOX+葡萄籽原花青素+ML385组。超声心动图检查小鼠心功能;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠心肌病理改变;原位末端标记测定法(TUNEL)检测小鼠心肌细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;试剂盒检测心肌组织中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)测定Nrf2/HO-1通路蛋白表达水平。结果:与对照组比较,DOX组小鼠心肌损伤加重,左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD),血清CK-MB、IL-6、IL-1β水平及心肌组织ROS、MDA及心肌细胞凋亡率升高(P<0.05),射血分数(EF)、短轴缩短分数(FS)、心肌组织SOD、Nrf2、HO-1蛋白水平降低(P<0.05);葡萄籽原花青素组小鼠心肌损伤,LVESD、LVEDD、EF、FS水平,血清CK-MB、IL-6、IL-1β水平,心肌组织ROS、MDA、SOD、Nrf2、HO-1蛋白,心肌细胞凋亡率差异均无统计学意义(P>0.05)。与DOX组比较,DOX+葡萄籽原花青组小鼠心肌损伤减轻,LVESD、LVEDD降低,血清CK-MB、IL-6、IL-1β水平降低,心肌组织ROS、MDA、心肌细胞凋亡率降低(P<0.05),EF、FS及心肌组织SOD、Nrf2、HO-1蛋白水平升高(P<0.05);与DOX+葡萄籽原花青素组比较,DOX+葡萄籽原花青素+ML385组小鼠心肌损伤加重,LVESD、LVEDD及血清CK-MB、IL-6、IL-1β水平、心肌组织ROS、MDA、心肌细胞凋亡率升高(P<0.05),EF、FS、心肌组织SOD、Nrf2、HO-1蛋白水平降低(P<0.05)。结论:葡萄籽原花青素可能通过激活Nrf2/HO-1通路,对DOX诱导的心脏毒性小鼠发挥保护作用。

H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因的原核表达及间接ELISA方法的初步建立

根据GenBank公布的H5N1亚型禽流感病毒 (AIV)血凝素 (HA)基因序列设计引物 ,用PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒HA1基因 ,将该片段定向插入到原核表达载体pET_32a(+)中 ,构建原核表达载体pET_HA1。阳性质粒转化宿主菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导 ,HA1基因获得表达 ,重组蛋白以包涵体的形式存在。通过改变IPTG的浓度和诱导时间 ,确定了表达HA1基因的最佳诱导条件 :IPTG终浓度为 0 8mmol L ,诱导时间为 3h。Westernblot分析表明表达产物具有良好的免疫学活性。以纯化的表达产物作为诊断抗原建立了检测H5亚型AIV抗体的iHA_ELISA方法。结果表明 ,抗原的最佳包被浓度为 4 μg mL ,血清的最佳稀释度为 1∶2 0 0 ,阳性标准初步定为 :OD待检血清>0 5 ,且OD待检血清 OD阴性血清 >2。

H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96株反向基因操作系统的建立

A/goose/Guangdong/1/96(GSGD/1/96)是中国分离的第1株H5N1亚型禽流感病毒,它不仅是97香港感染并致人死亡的H5N1亚型流感病毒HA基因供体株,而且是中国目前已报到的H5亚型流感病毒分离株的共同祖先。本研究建立了该病毒的8质粒反向基因操作系统,并通过细胞转染成功拯救了该病毒(R-GSGD/1/96)。R-GSGD/1/96在对SPF鸡和Balb/c小鼠的致病性方面保持了与亲本野毒(W-GSGD/1/96)一致的生物学特性,即对鸡都是高致病性毒株,R-GSGD/1/96与W-GSGD/1/96的静脉致病指数分别为2.01和2.10;救获病毒与野生病毒一样,尽管106EID50经鼻腔感染小鼠后1～2d内能从肺脏检测到低滴度的病毒,但不能在小鼠体内成功复制。GSGD/1/96反向基因操作系统的成功建立为进一步开展中国高致病性禽流感病毒分离株的生物学特性、遗传衍化及结构与其功能关系研究奠定了基础。

H1亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA方法的初步建立

根据GenBank发表的H1亚型猪流感HA基因序列设计引物,扩增出HA基因片段,将其克隆到pFastBacGP67B杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67B-H1,转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体获得重组转座子(rBacmid-H1),在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒(rBV-H1),再感染细胞,收获目的蛋白。通过血凝试验、免疫印迹法、免疫组化分析表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物学活性。利用表达的蛋白作为猪流感间接ELISA的抗原,初步建立H1亚型猪流感的间接ELISA检测方法,并对内蒙古、辽宁和黑龙江等地送检的93份猪血清进行了检测,阳性率为31.18%,为研制开发快速、准确、简便的H1亚型猪流感鉴别诊断试剂盒奠定基础。

印迹基因H19对人绒毛膜上皮癌细胞JEG-3基因表达谱的影响

目的获得印迹基因H19对滋养细胞株人绒毛膜上皮癌细胞系(JEG-3)细胞基因表达谱的影响,以期探讨H19对滋养细胞生物学行为的调控机制。方法含人全长H19cDNA重组真核表达质粒pRc/CMV经测序鉴定正确后,转染JEG-3细胞,采用Affymetrix的U133plus 2.0Array基因表达谱芯片检测基因表达谱的变化。结果转染后H19mRNA表达显著升高,JEG-3细胞基因表达谱明显改变,共筛选出96条差异基因,其中上调基因19条,下调基因77条。选择其中一种差异表达基因HES1,采用荧光定量PCR检测发现重度子痫前期胎盘组织HES1mRNA的表达水平较正常晚孕胎盘组织中HES1mRNA的表达水平明显降低。结论高通量基因芯片筛选出了H19调控滋养细胞的相关基因,为进一步探讨H19对滋养细胞生物学行为的调控机制提供了实验基础。