二甲双胍对慢性暴露于高糖及高游离脂肪酸的HIT-T15细胞胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性的影响

目的观察二甲双胍(MF)对慢性高糖和高脂处理后的HIT-T15细胞(β细胞系)胰岛素受体(IRc)酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响,探讨MF对β细胞糖脂毒性,即β细胞胰岛素抵抗的改善作用机制。方法实验分为对照组、对照+MF组、高糖组、高糖+MF组、高脂组、高脂+MF组。将HIT-T15细胞分别接种于含有5.5mmol/L、16.7 mmol/L葡萄糖(G)及0.5 mmol/L软脂酸的培养液中,培养48 h后,加入2.5μg/mL MF干预24h。用放射性酶分析法测定β细胞IRc TPK活性。结果高糖〔(52.5±18.6)pmol/(min.μg)〕和高脂组〔(54.6±14.0)pmol/(min.μg)〕HIT-T15细胞IRc TPK活性分别较对照组〔(119.4±29.1)pmol/(min.μg)〕降低(P<0.01);予2.5μg/mL MF干预24 h后,高糖和高脂组IRc TPK活性较干预前增高〔(113.0±29.8)vs(52.5±18.6)pmol/(min.μg),P<0.01;(98.6±26.1)vs(54.6±14.0)pmol/(min.μg),P<0.01〕,且与对照组相比差异无统计学意义。MF对对照组HIT-T15细胞IRc TPK活性无明显影响。结论高糖和高脂可抑制β细胞IRcTPK活性。MF能明显改善受高糖及高脂所抑制的HIT-T15细胞IRc TPK活性,且恢复到接近正常水平。提示MF对糖脂毒性所致β细胞胰岛素抵抗的改善作用可能与增加IRc TPK活性有关。

苦瓜中具有保护和修复四氧嘧啶损伤HIT-T15细胞功能的有效成分的分离与表征

为探讨苦瓜降糖有效成分的分离纯化,观察其在体外对四氧嘧啶破坏的胰腺β细胞(HIT-T15细胞)的保护修复作用,用SP阳离子交换色谱法对苦瓜抽提液(Momordicacharantiaextract,MCE)的活性组分进行了分离纯化,并用MTT法对经四氧嘧啶破坏前后的胰腺β细胞存活率进行检测,从而考察了MCE的各组分对胰岛β细胞的保护和修复功能,此外还测定了各组分的抗氧活性。结果表明:SP阳离子交换树脂的分离各组分对胰腺β细胞的存活都有促进作用,其中P1、P3、P6组分的效果显著,又以P6组分的效果最佳。相对正常对照组,经P1、P3和P6组分保护并修复的细胞残存率分别为78.64%、89.20%和94.22%;经P1、P3和P6组分保护的细胞残存率分别达59.03%、61.07%和66.16%;经P1、P3和P6组分修复的细胞残存率分别达69.52%、76.32%和77.19%。P1、P3和P6组分的SOD活性分别为22.85、29.98和27.53u/mL。结论:苦瓜抽提液中的3个组分具有一定的SOD活性,在适当的浓度范围内,均具有明显减弱四氧嘧啶对胰腺β细胞的损伤和改善受损的胰腺β细胞的功能。

格列喹酮对胰岛β细胞株HIT-T15细胞的促胰岛素分泌作用

目的通过观察不同葡萄糖浓度下格列喹酮(Glq)刺激HIT-T15细胞分泌胰岛素的作用,了解Glq对β细胞的刺激模式。方法 HIT-T15细胞孵育于5、10、15mmol/L葡萄糖浓度的培养基中,8小时后加入Glq、格列本脲(Glb)、格列齐特(Glc),分别在不同时间点收集培养液,测定药物刺激前后的胰岛素分泌水平。结果在三种糖浓度下,Glq刺激的胰岛素分泌高峰均在加药后10分钟,在30分钟时又有一稍低的第二峰,随后逐渐下降,至180分钟后分泌速率为基础值的1.1～1.2倍;Glb呈单相分泌峰,峰值出现在45分钟,随后分泌速率逐渐下降,至180分钟后仍有基础值的1.5倍;在10 mmol/L糖浓度组,Glq刺激的胰岛素浓度时间曲线下面积(AUC)更小。Glc的分泌曲线类似Glq。结论 Glq与Glb对β细胞的刺激作用模式不同,前者较后者胰岛素分泌达峰时间更快、作用时间更短,AUC更小。

FGF-21与罗格列酮钠对棕榈酸诱导的胰岛细胞株凋亡的保护作用及机制研究

目的探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)和罗格列酮钠(RO)对棕榈酸(PA)诱导的HIT-T15胰岛细胞凋亡的保护作用和机制。方法①0.25、0.50和1.00 mmol/L的PA干预HIT-T15细胞24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡。②在0.50 mmol/L的PA中分别加入FGF-21〔12.50 nmol/L(A)、25.00 nmol/L(B)、50.00 nmol/L(C)〕、1μmol/L RO及3个不同浓度的FGF-21与RO联合,检测细胞凋亡,免疫细胞化学法、Western blot检测各组细胞磷酸化c-jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达。结果①PA组细胞凋亡高于对照组(P<0.05)。②FGF-21 A、B、C组能明显降低0.50 mmol/L PA诱导的凋亡(P<0.05),但凋亡率高于对照组(P<0.05)。FGF-21与RO联合干预组的细胞凋亡低于PA组(P<0.05)。联合干预组的细胞凋亡低于单用FGF-21组(P<0.05)。③0.50 mmol/L PA组的p-JNK蛋白表达高于对照组(P<0.05)。不同浓度FGF-21组的p-JNK的表达均低于PA组(P<0.05)。FGF-21与RO联合干预组的p-JNK均低于PA组(P<0.05)。联合干预组p-JNK的表达低于单用FGF-21组(P<0.05)。结论①PA可剂量依赖性的诱导HIT-T15胰岛细胞的凋亡。②FGF-21能抑制PA诱导的HIT-T15胰岛细胞株的凋亡,此机制可能是抑制了p-JNK的表达,并且与RO有协同作用。

番石榴叶总黄酮对胰岛β细胞胰岛素抵抗影响的实验研究

目的:观察番石榴叶总黄酮对HIT-T15胰岛β细胞胰岛素抵抗影响。方法:制备番石榴叶总黄酮(FSL)有效部位,通过HIT-T15胰岛β细胞生长曲线以及不同浓度葡萄糖(GLU)、FSL对HIT-T15胰岛β细胞增殖的影响确定FSL的加药时间、浓度和高糖浓度。然后测定在高糖环境下,FSL对HIT-T15胰岛β细胞胰岛素分泌、胰岛素受体m RNA和胰岛素受体底物1蛋白表达的影响。结果:50 mmol·L-1葡萄糖能够显著抑制HIT-T15胰岛β细胞增殖(P<0.01),50μg·m L-1 FSL能够促进高糖环境下HIT-T15胰岛β细增殖(P<0.01)、促进胰岛素分泌(P<0.05)、胰岛素受体m RNA表达(P<0.05)和胰岛素受体底物1蛋白表达(P<0.01)。结论:番石榴叶总黄酮能够促进高糖环境下HIT-T15胰岛β细胞胰岛素分泌,可能与其增加胰岛素受体m RNA的表达、胰岛素受体底物(IRS-1)蛋白表达有关。

多巴胺受体在胰岛β细胞系和原位组织中的差异性表达

目的通过研究大鼠胰腺组织和胰岛β细胞系INS-1(大鼠源)和HIT-T15(仓鼠源)细胞中多巴胺(dopamine,DA)受体的分布以及INS-1细胞系的内分泌功能,为DA调节胰岛β细胞功能研究结果不一致的可能原因提供一定的实验依据。方法应用双标记免疫荧光染色方法观察在大鼠胰腺组织和胰岛β细胞系中DA受体分布的异同,以及胰岛素和胰高血糖素免疫荧光双标记结果的差异。应用放射免疫法检测INS-1细胞孵育液中胰岛素及胰高血糖素的浓度,观察细胞系的内分泌功能的改变。结果在大鼠胰腺组织中,DA受体D1、D2和D5分别表达在β细胞、δ细胞、α细胞和PP细胞上,β细胞只表达D1受体。然而在两种胰岛β细胞系INS-1和HIT-T15细胞上不仅有D1受体,还有D2和D5受体的分布。两种胰岛β细胞系均同时表现胰岛素和胰高血糖素免疫阳性,而在原位胰岛中分布于不同的细胞,进一步检测显示INS-1细胞系的孵育液中不仅含有胰岛素,也含有胰高血糖素。结论胰岛β细胞系DA受体分布及内分泌功能不同于原位β细胞。

百合多糖降糖作用机理的体外研究

目的通过研究百合多糖(LP-1,LP-2)对α-葡萄糖苷酶的抑制活性和胰岛β细胞(HIT-T15 cell)的影响,初步探讨百合多糖的降血糖机理。方法用pNPG作为底物,以阿卡波糖为参照,用比色法测定LP-1和LP-2对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用;用MTT法检测不同浓度的LP-1(0.1,1.0,10.0 mg/ml)和LP-2(0.1,1.0,10.0 mg/ml)对HIT-T15增殖的影响,用放免法检测不同浓度LP-1和LP-2对HIT-T15细胞葡萄糖刺激性的胰岛素分泌量的变化。结果百合多糖可促进HIT-T15细胞增殖,在5.6 mmol/L或16.7 mmol/L葡萄糖刺激下,LP-l和LP-2可剂量依存性地促进HIT-T15细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌。但对-葡萄糖苷酶活性没有明显的抑制作用。结论百合多糖降糖机理与促进胰岛β-细胞的增殖和分泌功能有关。

桑根活性成分反式二苯乙烯抗糖尿病作用研究

为探讨桑根中提取分离的2,5′-羟基反式二苯乙烯-4,3′-二-β-D-吡喃葡萄糖苷(DGTS)的抗糖尿病作用,测定DGTS对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制活性,观察DGTS对HIT-T15细胞的影响。结果表明:DGTS显示很强的α-葡萄糖苷酶的抑制作用,当DGTS浓度为250μg·mL^(-1)时,α-葡萄糖苷酶抑制率为60%;DGTS对α-淀粉酶也显示很强的抑制作用,当DGTS浓度为5μg·mL^(-1)时,α-淀粉酶抑制率为39%,高于50μg·mL^(-1)的阿卡波糖。DGTS对链脲佐菌素引起HIT-T15细胞的损伤具有保护作用。证明DGTS具有抗糖尿病作用。

过表达胰岛素增强子结合蛋白1对HIT—T15细胞增殖的影响

建立稳定表达pcDNA3．1-ISLl（胰岛素增强子结合蛋白1）质粒的HIT—T15细胞系并探讨对其增殖的影响。MTT及平板克隆实验检测结果表明转染pcDNA3．1-ISLl的细胞增殖明显加快，细胞数明显增多；流式细胞仪检测结果表明，转染pcDNA3．1-ISLl的细胞，在细胞周期中G0／G1期细胞明显减少，S、G2／M期细胞明显增多。ISLl能明显促进HIT—T15细胞增殖，其机制可能与参与调控细胞周期各期DNA复制、转录有关。