2021—2023年贵港市HIV-1感染者的流行特征和检测结果分析

目的分析2021—2023年贵港市人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)抗体阳性者的免疫蛋白印迹试验(WB)带型特征,探讨免疫状况及相关指标在获得性免疫缺陷综合征(AIDS)发展中的作用。方法对2021—2023年1719份经贵港市AIDS确证实验室确证为HIV-1抗体阳性且在治疗前开展了CD4^(+)T淋巴细胞检测的样本,用SPSS 25.0分析人口学特征和实验室相关检测结果。结果1719例HIV-1抗体阳性以男性、40岁以上、已婚、农民、文化程度较低、医疗机构临床筛查为主;CD4^(+)T淋巴细胞计数与年龄呈负相关,与WB条带数呈正相关(P<0.05)。带型p55、p39、p17检出阳性率在不同免疫程度和病程间差异有统计学意义(P<0.05)。结论农民仍然是贵港市AIDS宣教、检测工作的重点人群,p55、p39和p17可作为疾病发展和免疫情况的一个潜在判别依据。

ELISA法检测尿液中HIV-1抗体的研究分析

目的 探讨艾滋病病毒 (HIV)感染者晨尿、非晨尿和血液中HIV 1抗体检测结果的一致性 ,引进尿液HIV 1抗体检测方法。方法 平行采集吸毒人员血液和尿液标本 ,分别用血液和尿液酶联免疫吸附试验 (ELISA)法检测HIV抗体 ,阳性血清标本送云南省疾病预防控制中心确认。结果 检测 4 83人 ,血检阳性 91人 ,晨尿检测阳性 96人 ,两种方法一致性 98 96 %。对应晨尿阳性者采集非晨尿和阴性对照尿液标本各 91份 (其中血液标本检测HIV抗体阳性者 86份 ) ,检出阳性 86份 ,阴性 5份 ,非晨尿标本与血液标本检测结果一致。以血液标本检测结果为准 ,晨尿标本检测HIV 1抗体的灵敏度 10 0 % ,特异度 98 72 % ;非晨尿标本检测HIV 1抗体的灵敏度和特异度均为 10 0 %。结论 尿液ELISA法检测HIV 1抗体结果可靠 ,非晨尿可代替晨尿作HIV

265例HIV-1抗体阳性者抗体蛋白印迹带型分析

目的通过对本实验室以蛋白印迹(WB)法确认的HIV-1抗体阳性者抗体WB条带的分析,了解不同人群抗体WB带型分布的差异。方法WB法确认HIV-1抗体阳性。结果抗pol基因编码蛋白的抗体WB带型分布以及P31抗体的阳性率在不同传播途径的HIV-1抗体阳性者间差异有统计学意义(P<0.01);年龄(age,A)≤40岁的HIV-1抗体阳性者P66和P24抗体阳性率分别明显高于相应A>40岁以上者,(P<0.05);抗pol基因编码蛋白的抗体WB带型分布以及P66抗体阳性率在不同地域的HIV-1抗体阳性者间差异有统计学意义(P<0.01)。结论HIV-1抗体WB带型分布在不同性别、不同年龄人群间差异无统计学意义,但在不同传播方式、不同地域的人群间差异有统计学意义;HIV-1 pol、gag基因编码的某些蛋白的抗体产生在不同传播方式、不同年龄及不同地域的人群间差异有统计学意义。

HIV-1抗体阳性者WB带型及其在不同临床分期中的特征分析

目的分析HIV-1抗体阳性者血清中病毒蛋白的变化,探讨不同临床分期HIV-1抗体阳性者Western blot(WB)带型特点。方法应用WB检测HIV-1感染者体内特异性抗体,流式细胞仪检测CD4+T淋巴细胞计数。结果 208例HIV-1抗体阳性者中,男性193例(92.79%),同性性接触感染163例(78.37%)。WB特异性条带gp160、gp120、gp41、p66、p51、p31、p24维持较高的抗体阳性率,在不同临床分期间差异无统计学意义;异性性行为感染者gag基因编码蛋白的抗体p55条带的出现率高于同性性行为感染者(P<0.05);全带型(1)、次全带型(2)(缺失p55)、次全带型(3)(缺失p39)、次全带型(4)(缺失p55和p39)、次全带型(5)(缺失p55、p39和p17)5种带型为常见带型,全带型出现率最高(44.2%)。结论 HIV-1抗体阳性者的CD4+T淋巴细胞计数有助于判断机体免疫状态、确定疾病分期及监测疾病进展。闵行区艾滋病的防治重点为外来流动人员及男男性行为人群。

中国HIV-1B亚型P55和嵌合的P55-V3病毒样颗粒候选疫苗免疫效果的研究

研究我国艾滋病病毒Ⅰ型 (HIV 1)病毒样颗粒 (VLP)候选疫苗的免疫原性 ,为疫苗进行灵长类实验提供实验依据。将 gag和gag -V3VLP不同剂量 (5 0 μg、10 μg、1μg)在有佐剂 (氢氧化铝 )和无佐剂条件下皮下免疫小鼠 ,然后眼眶采血 ,用ELISA法观察免疫鼠血清中抗体与剂量关系 ,以及中和抗体滴度和抗体IgG亚型IgG1和IgG2a的水平。同时取鼠脾淋巴细胞 ,体外抗原刺激后收取淋巴细胞分泌上清 ,检测细胞因子IFN γ和IL 5水平。结果是gagVLP免疫剂量与是否加佐剂对免疫效果没有显著性差异 (各组P >0 1) ,而 gag -V3VLP免疫鼠剂量与加入佐剂有显著性差异 (各组P <0 0 1)。gag和 gag -V3VLP(5 0 μg ,佐剂 )中和抗体滴度为 1∶2 0和 1∶40 ,同时gag和gag-V3VLP免疫鼠血清 (5 0 μg ,佐剂 )IgG2a和IgG1均有升高 ,IgG2a稍高于IgG1;细胞因子 (5 0 μg ,佐剂 )IFN γ(gag2 40 0 pg/ml,gag -V3 10 0 0 pg/ml)和IL 5 (gag 40 0 pg/ml,gag -V3 2 0 0pg/ml)均有升高 ,IFN γ升高高于IL 5。由此得出 :HIV 1gag和gag -V3VLP候选疫苗能刺激机体产生抗体 ,其抗体有中和活性 ;抗体亚型IgG2a稍高于IgG1,Th1和Th2细胞分泌的细胞因子 (5 0 μg ,佐剂 )IFN γ比对照组升高 16 0倍 ,IL 5比对照组升高 80倍。表明VLP疫苗能诱导机体?

1-(3-酞酰亚胺基-2-氧丁基 )-4-取代苯基哌嗪的合成及抗HIV-1逆转录酶活性(英文)

目的 合成新型的非核苷类 (双杂环苯基 )化合物 ,并观察其抗HIV1 逆转录酶 (HIV1 RT)活性。方法 以氮芥盐酸盐为起始原料 ,与不同取代苯胺反应 ,得到相应的不同取代的哌嗪盐酸盐 ,并与 1 溴 3 酞酰亚胺基 2 丁酮 (4)缩合 ,得到目标化合物。结果 合成 11个目标化合物 (5～ 15 )。经1HNMR ,红外和元素分析确定结构。结论 经HIV逆转录酶P 6 6蛋白测定 ,化合物 11,14 ,10和 13有一定抑制HIV1 RT活性 ,其IC50 分别为 2 9 80 ,35 2 0 ,4 3 77和 6 3 76 μmol·L-1。

HIV-1抗体不确定和阴性者WB条带及病毒载量分析

目的 目前针对病毒载量检测在I型艾滋病病毒(HIV-1)抗体不确定及阴性个体中诊断意义的报道较少。文中旨在通过分析HIV-1抗体不确定和HIV抗体阴性病例的蛋白印迹试验(WB)带型及随访情况,探索病毒载量检测在鉴别HIV-1抗体不确定不同带型和HIV抗体阴性个案中的作用,评价核酸检测对于WB中HIV-1抗体不确定或HIV抗体阴性个体早诊断的意义。方法 选取2015年至2020年江苏省艾滋病确证中心实验室WB判定为HIV-1抗体不确定和HIV-1抗体阴性的151份样品。分析HIV-1抗体不确定样本WB带型经随访后的阳转情况;分析不同WB带型病毒载量的检测水平;分析不同水平的病毒载量样本经随访后WB条带阳转的情况;分析失访样本中WB带型及检测出病毒载量的分布,评估失访样本的传播风险;探索WB条带为阴性的样本中病毒载量检测率及阳转率。结果 WB带型分析显示,共127份HIV-1抗体不确定和24份HIV抗体阴性,HIV-1抗体不确定共出现9种带型。84份(80.0%)阳转,16份(15.2%)仍为HIV-1抗体不确定,5份(4.8%)为阴性。其中,env+gag区同时出现条带的阳转率最高[71例(95.9%)],gp160+p24+p17带型的阳转率为100%。HIV-1抗体不确定带型与病毒载量的关系结果显示,env+gag区条带的病例病毒载量检出率最高[78例(95.1%)],其中>5000拷贝/mL73份(89.0%),>10 000拷贝/mL72份(87.8%)。不同病毒载量的HIV-1抗体不确定病例的转归情况显示,126份HIV-1抗体不确定样本中进行了核酸检测,94(74.6%)份样本检测出病毒载量,其中86(91.5%)份样本病毒载量>10 000拷贝/mL,32(25.4%)份样本未检出病毒载量。失访样本病毒载量结果分析显示,22份失访样本中,env区条带共17份(77.3%);env+gag区同时出现条带共9份,6(66.7%)例检出病毒载量。结论 核酸检测病毒载量水平作为补充试验能够有效鉴别WB方法判定的不确定结果及阴性结果个体的感染状况,缩短了HIV感染诊断时间,尤其对急性感染期和晚期的HIV感染者的早发现有重要作用,为早发现早治疗提供技术支撑。

抗HIV-1核心抗原p24单克隆抗体的制备及特性的初步鉴定

目的 :建立分泌抗HIV 1p2 4单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞株 ,并对其特性进行初步鉴定。方法 :以纯化的基因工程制备的p2 4抗原免疫BALB/c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 /0骨髓瘤细胞融合 ,经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后 ,用间接ELISA法及Dotblot对其进行筛选和特性鉴定。结果 :筛选到 2株可分泌抗HIV 1p2 4mAb的杂交瘤细胞 ,其腹水效价为 1×10 -5,亲和力为 1.7× 10 4～ 1.8×10 4mol/L ,mAb的Ig亚类均为IgG1。两株mAb与HBcAg、HCVRNA阳性血清及HIVgp4 1等均无交叉反应 ,只与HIV 1p2 4抗原阳性血清产生特异反应。结论 :成功地建立了 2株可分泌抗HIV 1p2 4mAb的杂交瘤细胞 ,为进一步研制HIV 1p2

无偿献血者HIV-1抗体蛋白印迹确认与核酸检测结果分析

目的对酶联免疫检测HIV抗体呈反应性标本进行蛋白印迹(WB法)确认和TMA-化学发光法对照检测,以探讨其应用特点。方法将本中心检验科ELISA法检测结果呈HIV抗体反应性的117份标本,重新进行ELISA法检测,结果为S/CO>0.8的标本做蛋白印迹(WB法)确认试验。同时,对117份标本采用TMA-化学发光法检测核酸作为对照试验。血清学检测参加国家CDC及澳大利亚(CITIC)室间质评;核酸检测参加卫生部临检中心和澳大利亚(CITIC)室间质评。结果 ELISA初筛试验:117份标本中,S/CO>1的为37份;0.8<S/CO<1的为11份,S/CO<0.8的为69份;抗体确认试验:HIV抗体确认阳性7份,不确定4份,HIV抗体确认阴性106份;核酸检测试验:117份标本中11份检出HIV RNA阳性,106份标本为HIV RNA阴性。结论 ELISA方法检测HIV抗体存在一定的假阳性;HIV蛋白印迹确认试验存在一些不确定结果,对于只有gp160/120、P17、P24的抗体不确定标本,可以采用核酸检测方法辅助确认。

吸毒人群尿液 血液标本HIV-1抗体ELISA检测对比分析

目的 用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测吸毒人群尿液标本中艾滋病病毒 1型 (HIV 1 )抗体 ,与血清学检测结果进行比较。方法 采集某市劳教所吸毒者尿液、血液标本 354例 ,HIV 1抗体阳性吸毒者复检尿液标本1 9例 ,共计 373例。应用ELISA初筛试剂检测尿液及血液标本中HIV 1抗体 ,阳性者取其血液标本进一步用Genelabs试剂做蛋白印迹 (WB)试验确认。结果 尿液、血液标本中检测HIV 1抗体的特异性为 99 72 % ,尿试剂的假阳性率为 0 2 8% ;血液标本HIV 1抗体阳性者 ,尿液标本检测也呈阳性 ,灵敏度为 1 0 0 %。结论 尿液标本用ELISA方法检测HIV 1抗体与血液标本ELISA方法的检出率有高度的一致性。尿试剂适用于对高危人群进行尿液HIV

抗HIV-1gp120单链抗体的原核表达与初步纯化

目的 在原核细胞表达抗HIV-1gp120单链抗体基因,纯化后检测其活性。方法 将单链抗体基因插入pET28原核表达载体进行诱导表达,对包涵体进行变性复性处理后,利用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达的蛋白进行初步纯化,纯化后的单链抗体与gp120标准抗原膜条反应。结果 表达产物主要以包涵体形式存在,最高表达量占菌体总蛋白量的51％,金属螯合层析一步纯化后纯度超过85％。纯化后的单链抗体可以特异地识别gp120标准抗原。结论 在原核细胞表达的单链抗体,复性纯化后具有生物学活性。

VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc假病毒筛选抗HIV-1药物的条件优化及应用

目的建立并优化VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc假病毒筛选抗HIV药物药效模型。方法参照Promega公司的荧光素酶活性分析系统,比较VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc对4种不同细胞的感染力。通过采用3种不同实验条件对不同类型HIV-1上市药物进行活性评价,进一步验证了该模型的可行性与有效性。最后,应用该系统对特定靶点化合物进行筛选,并与HIV-1_(ⅢB)病毒筛选体系所得结果进行比较。结果 VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc对CRFK细胞的感染力最强,报告基因的表达水平与加入的病毒量呈剂量依赖关系。比较3种实验条件下不同阳性药物抑制VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc的半数有效剂量浓度EC50,发现第3种条件最优。而用该假病毒对合成化合物进行筛选,发现其EC50与病毒HIV-1_(ⅢB)所得EC_(50)基本一致。结论成功建立并优化了基于VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc假病毒的抗HIV药物筛选系统。

抗HIV-1 gp120单链抗体和白喉毒素融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建人源抗HIV-1单链抗体和白喉毒素融合基因的原核表达质粒,并诱导其在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法通过PCR扩增,获得目前应用较多的DAB389基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot方法分析鉴定。结果酶切及DNA序列测定鉴定正确。SDS-PAGE和West-ern Blot分析证实,重组质粒可表达出相对分子质量为75200的蛋白,与DT-hs120融合基因分子量一致,其表达量约占菌体总蛋白的21%,表达形式主要为包涵体。结论成功构建了DT-hS120表达载体,并获得了高效表达。

HIV-1抗体蛋白印迹确认与核酸检测复核对比研究

应用病毒核酸载量法NASBA和HIV-1 RNA的巢式逆转录PCR(nested RT-PCR)法与HIV抗体蛋白印迹(WB)方法,对经过初筛的44例HIV-1抗体阳性标本进行了对照检测研究。发现了2例(gp160、p24)和1例(gp160g、p120p、66、p24)的特殊阳性样本,经NASBA法和该RT-PCR法核酸检测为阴性;WB确认的4例gp160阳性带、1例p24、p17阳性带和13例p24阳性带,经NASBA法和该RT-PCR法核酸检测也为阴性;而WB确认的其余全部带型的抗体阳性标本经过NASBA法和该RT-PCR法检测均为阳性。该研究表明对只有gp160p、24和gp160、gp120p、66、p24的特殊阳性标本和以p24为主的抗体不确定标本需要用RT-PCR或NASBA方法进行核酸检测,以进一步确认。

HIV-1蛋白酶基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

目的为了研究HIV-1蛋白酶的生物学活性,制备HIV-1 PR蛋白及其特异性抗体。方法用PCR方法扩增编码PR的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并表达HIV-1 PR蛋白,用His抗体为一抗做Western blot鉴定目的蛋白。以纯化的目的蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性。结果原核表达载体pET28 a(+)-PR成功构建,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到的PR蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定正确。用纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论得到纯化的HIV-1PR蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白PR,为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。

HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定

目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定。结果制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1∶81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型。Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白。结论成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体。

男性HIV感染者HIV-1抗体蛋白印迹带型分析

目的分析HIV-1型抗体阳性者蛋白印迹带型,了解男性艾滋病病毒感染者(HIV)带型分布特征。方法检测2000～2007年艾滋病感染者HIV-1抗体蛋白印迹带型特征并进行统计分析。结果男性艾滋病感染者HIV-1抗体蛋白印迹带型gp160、gp120、p24阳性率分别为97.0%～100%,gp41、p66、p51、p31为92.3%～94.5%,p55、p17分别为63.2%和77.1%。男性感染者在21～岁组和41～83岁组带型阳性率差异无统计学意义(P>0.05);男性感染者P31、P55、P17带阳性率注射吸毒组高于性途径感染组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.005,P<0.005),其余带型阳性率差异均无统计学意义(P>0.05);性途径感染者男性和女性带型阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论男性HIV感染者HIV-1抗体P31、P55、P17带阳性率,注射吸毒感染者高于性途径感染者,与别的学者报道有差别,有待对人群中病毒亚型分布的研究。

一种唾液快速检测HIV-1/2型抗体试剂的现场评价

目的对一种唾液快速检测艾滋病病毒Ⅰ/Ⅱ型(HIV-1/2)抗体试剂进行现场评价,考核其现场使用的敏感性和特异性,以及与血液HIV-1/2抗体检测试剂的一致性。方法采集247例已知HIV感染者、1 090例正常献血人员、60例患有其它疾病的患者(包括孕妇、肿瘤患者、一般疾病患者),以及109例HCV感染者和119例未知HIV感染状况的吸毒人员的唾液标本,现场使用Vanguard OMTTM唾液HIV-1/2抗体快速检测试剂盒(CalypteBiomedical生产)进行检测,同时平行采集上述人群的血液标本,使用Vironostika HIV Uni-FormⅡplus O(BioMerieux生产)进行对比测试。结果247例已知HIV感染者中,247例唾液标本HIV-1/2型抗体检测均为阳性。1 259例血液酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HIV抗体阴性人群中,1 257例唾液检测为阴性,2例为阳性。119例吸毒人员中,28例血液标本HIV阳性中,唾液标本检出27例。91例HIV阴性中检出阴性90例。该唾液HIV抗体快速检测试剂,敏感性为99.64%,特异性为99.78%。与ELISA检测的一致性为99.75%。结论唾液HIV-1/2型抗体检测试剂与现行的血液ELISA检测结果相近。唾液标本的采集方便而且危险性小,推荐在采血较困难的人群、基层医疗机构、VCT门诊等,可考虑使用唾液HIV-1/2型抗体快速检测试剂进行HIV抗体初筛检测。

共表达HIV-1中国流行株gp120与IL-18重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性观察

为筛选我国的HIV_1疫苗候选株 ,以鸡痘病毒 2 82E4中国疫苗株为载体 ,构建了共表达中国流行株HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18的重组鸡痘病毒 ,并将该重组鸡痘病毒免疫BALB c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果显示 ,HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18不但可在重组鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞中表达 ,而且可在重组鸡痘病毒感染的哺乳动物细胞中表达。重组病毒具有良好的免疫原性 ,可诱导小鼠产生特异性抗体和脾特异性CTL反应 ,且IL_18发挥了免疫佐剂的作用。本研究结果为制备安全、有效的HIV_1基因工程活载体疫苗奠定了基础。

HIV-1 tat基因改造及其蛋白表达、纯化与抗体制备

目的:为了方便实验室工作中HIV-1B'/C亚型及C亚型Tat蛋白的检测,制备了相应的Tat蛋白及其抗体。方法:将我国HIV-1B'/C亚型流行株tat基因的第1个外显子和HIV-1C亚型tat基因的第2个外显子融合在一起,将密码子替换为大肠杆菌的优势密码子,通过合成引物、PCR拼接的方法,获得目的基因序列;在原核系统中与pET32a+载体中的His·Tag、Trx·Tag及S·Tag进行融合表达;目的蛋白经Ni+金属螯合层析柱纯化后,用于免疫家兔,制备多克隆抗体。结果:PCR拼接获得306bp的目的基因序列;在原核系统中融合表达得到相对分子质量约31000的融合蛋白,占菌体总蛋白的21%。纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备了多克隆抗体,Western印迹结果显示,获得的多克隆抗体与HIV-1B'/C亚型的Tat蛋白反应良好;间接免疫荧光结果表明,获得的多克隆抗体与HIV-1B'/C亚型和C亚型的Tat蛋白都能产生特异性反应。结论:制备的多克隆抗体能够使用间接免疫荧光方法检测HIV-1C亚型的Tat蛋白,使用Western印迹方法和间接免疫荧光方法都能检测HIV-1B'/C亚型的Tat蛋白。