HCV非结构蛋白5A对HIV长末端重复序列影响的初步探讨

目的本研究拟探讨HCV非结构蛋白5A(NS5A)对HIV长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)影响,从而为HCV对HIV的影响提供实验依据。方法将构建的LTR启动子驱动的荧光素酶(Luc)报告基因表达质粒(pGL3-LTR-Luc)和含HCV NS5A基因的表达质粒pCNS5A共转染肝癌细胞株(Huh7细胞),采用免疫细胞化学技术、Western Blot及逆转录聚合酶链反应检测HCV NS5A蛋白及mRNA的表达;本实验分三组,将质粒pGL3-LTR-Luc(空白组)、质粒pRc/CMV+pGL3-LTR-Luc(对照组)、质粒pCNS5A+pGL3-LTR-Luc(实验组)分别转染Huh7细胞,48 h后收集细胞,采用Luc活性检测LTR的活性,以观察HCV NS5A对LTR的调控影响。所得荧光活性值以均数±标准差表示,采用Levene's方差齐性检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较行LSD-t检验。结果转染pcNS5A质粒的Huh7细胞质经RT-PCR及Western Blot检测,HCV NS5A mRNA及蛋白在细胞中获得表达。方差分析结果提示LTR荧光活性在三组间有明显的差异(F=7.876,P=0.002),进一步比较各组间的差异,结果提示共转染质粒pcNS5A+pGL3-LTR-Luc组的Huh7细胞中Luc相对活性(22 476±4471)明显高于单转染pGL3-LTR-Luc组(15 887±3039,P=0.002)及共转染质粒pRc/CMV+pGL3-LTR-Luc组(16 321±4162,P=0.008),差异有统计学意义。结论表达HCV NS5A的质粒pCNS5A成功转染至Huh7细胞;HCV NS5A蛋白能激活HIV LTR,提示HCV NS5A可能为HCV促进HIV复制的分子机制之一。

人类逆转录病毒的长末段重复序列(HRTVLTR)的表达与肺癌转移的关系

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一 .肺腺癌很容易发生转移 .实验以 17例肺癌 (5例肺腺癌、1例腺鳞癌、7例肺鳞癌及 4例小细胞末分化癌 )的原发灶、癌旁正常组织及转移淋巴结为材料 ,采用PCR及非放射性标记的 RNA斑点杂交分析 L TR在基因组的存在及其表达情况 .研究结果发现 :LTR序列在 17例肺癌病人的正常组织及肿瘤组织的基因组中普遍存在 ,L TR致肺癌转移与其插入基因组中无关 ;L TR致肺癌转移与其表达增高有关 ,而且其高表达与小细胞肺癌的转移无关 ,而与非小细胞肺癌的转移密切相关 .提示 L TR参与了非小细胞肺癌的转移过程 .

石家庄市人类免疫缺陷病毒Ⅰ型流行株基因序列测定和亚型分析

目的了解石家庄市人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)流行株的亚型及分布情况。方法184例HIV-1抗体阳性者抗凝全血中提取前病毒DNA,用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)扩增病毒膜蛋白env基因的C2-V3区并进行序列测定,与国际标准参考序列比较确定亚型。结果148例样品扩增阳性并得到相应序列,经进化树分析,45例为欧美B,37例为CRF07-BC,35例为泰国B(B’),25例为CRF01-AE,C和CRF02-AG各2例,CRF03-AB和CRF11-CPX各1例。结论石家庄市目前主要流行B、CRF07-BC、B’和CRF01-AE亚型。性传播以B、CRF01-AE亚型为主;注射吸毒以CRF07-BC亚型为主;既往采输血感染及其造成的家庭内传播全部是B’亚型。

病毒感染与扩张型心肌病关系的临床研究

目的探讨甲、乙、丙型肝炎病毒感染以及人类免疫缺陷病毒与扩张型心肌病发病之间的关系。方法纳入经病史、临床症状、体征、超声心动图和冠状动脉造影确诊的扩张型心肌病患者(DCM组)130例,并同时调查同期冠状动脉造影阴性的心律失常或心血管神经症患者(对照组)351例,收集一般临床特征资料以及甲、乙、丙型肝炎病毒抗原、抗体检测结果和人类免疫缺陷病毒初筛抗体结果,并进行统计分析。结果对照组甲型肝炎病毒抗体(HAVAb)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)、丙型肝炎抗体(HCVAb)、人类免疫缺陷病毒抗体(HIVAb)阳性患者分别为0、10、150、1、26、47、3、0;DCM组HAVAb、HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、HCVAb、HIVAb阳性患者分别为0、5、54、0、11、16、2、0;两组差异无统计学意义(均P>0.05)。结论在中国人中甲、乙、丙型肝炎病毒感染以及人类免疫缺陷病毒与DCM发病之间不存在明确的关系,上述病毒感染可能不是DCM的发病原因。