酶联免疫吸附试验和化学发光法检测EB病毒NA1-IgA抗体的性能比较

目的分析酶联免疫吸附试验(ELISA)和化学发光法在EB病毒核抗原1(EB-NA1)-IgA抗体检测中的各项性能。方法20例临床已确诊为鼻咽癌患者作为鼻咽癌组,20例非鼻咽癌患者作为对照组。取血清标本,同时采用ELISA和化学发光法对EB-NA1-IgA抗体进行检测,以组织病理检查诊断为鼻咽癌的结果作为金标准,计算两种方法的灵敏度、特异度和准确度。结果鼻咽癌组两种方法检测血清EB-NA1-IgA抗体的阳性率均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两种方法检测鼻咽癌组的血清EB-NA1-IgA抗体的阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05),两种方法检测对照组的血清EB-NA1-IgA抗体的阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA与化学发光法的灵敏度、特异度、准确度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ELISA和化学发光法检测血清EB-NA1-IgA抗体对鼻咽癌均有较好的辅助诊断价值。

食品中黄曲霉毒素M_(1)的间接竞争酶联免疫法的建立

该文建立一种间接竞争酶联免疫法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)快速测定食品中黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))的分析方法。AFM_(1)标准品用甲醇稀释,AFM_(1)标准品与AFM_(1)全抗原竞争结合AFM_(1)单克隆抗体,利用3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine,TMB)单组分显色液显色后,酶标仪测定吸光度。在优化好的条件下,浓度范围为9.743~2.605×10^(3)pg/mL时具有良好的线性关系,相关系数(determination coefficient,R^(2))为0.9927,检出限IC_(10)为3.84 pg/mL,加标回收率为88.43%~105.75%。该方法适用性好、操作简单、灵敏度高,满足食品中AFM_(1)分析检测的需求。

高通量酶联免疫吸附法测定黑参及其制品中黄曲霉毒素B1的含量

目的探究黑参及其制品中黄曲霉毒素B1的污染情况,填补该领域的研究数据空白,为其食品安全性评估提供数据支撑,探索可被广泛应用于此类产品中黄曲霉毒素B1的筛查方法。方法采用高通量酶联免疫吸附法测定黑参及其制品共120个样本中的黄曲霉毒素B1的含量,使用统计学方法对实验数据进行分析,同时进行方法学考察,验证该方法的灵敏性与精密度。结果该方法的准确度与精密度较好,定量限为0.5μg/kg,阳性检出率为46%,黑参、黑参粉、黑参液、黑参膏的黄曲霉毒素B1含量平均值分别为1.417、2.227、0.691、1.264μg/kg,不同类型样本间存在显著差异。结论整体情况良好,但存在一定的黄曲霉毒素B1污染风险,该方法适用于黑参及其制品中黄曲霉毒素B1的高通量筛查。

建立用于检测HIV-1的基于核酸序列扩增的酶联免疫吸附测定法

目的建立用于检测HIV-1的基于核酸序列扩增的酶联免疫吸附测定(NASBA-ELISA)法。方法根据HIV-1基因组长末端重复序列设计引物对HIV-1RNA进行基于核酸序列扩增(NASBA),结合微孔板中液相杂交和酶标显色反应检测核酸扩增物,并对该检测方法的灵敏度、特异度及其对临床样本的检测结果进行评价。结果该方法可检测到0.1fg/μL的RNA,且对HIV-1具有特异性。在120例临床样本的检测中,其检测准确度高于常规的实时荧光定量反转录聚合酶链反应(fqRTPCR)法。结论 NASBA-ELISA方法能灵敏并特异地检测HIV-1。

酶联免疫吸附法检测花生中黄曲霉毒素B_(1)的影响因素分析

酶联免疫吸附法在众多领域被广范应用,但因其影响因素较多以及重演性问题的残留,导致酶联免疫吸附检测标准化程度较低。为推动酶联免疫吸附检测标准化进程,研究了酶联免疫吸附法检测花生中黄曲霉毒素B_(1)的过程中封闭条件、标准品稀释液中甲醇浓度、pH值等影响因素对实验结果的影响程度。研究结果表明,缓冲溶液pH值以及反应体系盐离子浓度对实验影响程度较大,可作为推进标准化进程的关键突破点,此外其他影响因素的研究为提高实验安全性和降低检测成本提供了一定数据支撑。研究建立了黄曲霉毒素B_(1)空白标准曲线和花生基质标准曲线,标准曲线检测范围为(IC 20~IC 80)0.001~0.027 ng/mL,利用加标回收实验测定的回收率为88.1%~95.1%。

酶联免疫吸附法与高效液相色谱法检测玉米中黄曲霉毒素B_(1)的比较

采用酶联免疫吸附法(ELISA)与高效液相色谱法(HPLC)分别测定玉米中黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))含量,对两者的检测结果进行对比分析。结果表明,两种方法对AFB_(1)的判定结果一致,证明本实验室采用的酶联免疫试剂盒是准确的,ELISA操作简单快速,适用于AFB_(1)的快速筛选,高效液相色谱法耗时长、成本高,更适用于疑似样品的确证及精确定量。

酶联免疫捕获法检测耳鼻喉科患儿血清过敏原特异性IgE的价值

目的探讨酶联免疫捕获法检测对耳鼻喉科患儿血清过敏原特异性IgE(specific immunoglobulin E,sIgE)水平分析的价值。方法选取广州市中西医结合医院2019年3月—2022年2月收治的耳鼻喉科患儿血清样本300份,使用酶联免疫捕获法检测其粉尘螨、户尘螨、狗毛屑、猫毛屑、艾蒿花粉、链格孢共计6种常见的吸入物过敏原sIgE,记录精密度、灵敏度、线性范围等数据,并与Immuno CAP系统的评价效能进行对比分析。结果酶联免疫捕获法检测6种过敏原sIgE的批内变异系数(coefficient of variation,CV)值均<7%,而总CV%<8%。6种过敏原的定量限(limit of quantitation,LOQ)值均低于0.35 kU/L,均为阴性。相关系数均大于产品说明书的阈值0.975,线性范围良好。不同过敏原的回归方程斜率差异均有统计学意义(P<0.05)。两系统定量检测结果相关性较强。两种检测方法的阳性符合率为77.33%,阴性符合率为98.67%,Kappa值为0.833,P<0.05。结论酶联免疫捕获法检测对耳鼻喉科患儿血清过敏原特异性IgE水平的评价效能,具有较好的精密度与灵敏度,且与Immuno CAP系统的相关性较好,作为一种自动化全定量检测手段,能够满足临床耳鼻喉科常见过敏原检验的要求,具有使用价值。此文的研究结果为儿童耳鼻喉科常见过敏性疾病的诊断和鉴别诊断后期标准制定提供了借鉴内容。

间接竞争酶联免疫分析法快速检测决明子中黄曲霉毒素B_(1)的研究

目的:建立适用于中药决明子中黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))快速检测的间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。方法:首先采用棋盘滴定法优化抗原抗体最佳浓度,建立抑制曲线,然后以显色值和灵敏度为评价指标筛选样品的提取和稀释方法。对所建立的方法进行方法学考察,最后用于实际样品检测。结果:经过优化,确定样品的最佳提取溶剂为乙腈-甲醇溶液(90∶10,v/v),稀释溶液为甲醇-PBS溶液(10∶90,v/v),稀释倍数为20倍。方法的半数抑制浓度为0.078 ng/mL,线性范围为0.016~0.25 ng/mL,回收率为85.00%~109.2%,RSD为0.45%~9.08%。采用所建立的方法对25批决明子进行了检测,经液相色谱-串联质谱法确证,超过限量标准的样品的假阳性率小于5%。结论:本文所建立的ic-ELISA灵敏、简便,适用于决明子中AFB_(1)的快速筛查,但仍存在一定的假阳性率,后续还需要对产生干扰的基质因素进行研究并消除,进一步提高检测的准确度。

酶联免疫法测定干辣椒中的黄曲霉毒素B_1

本实验采用酶联免疫法对干辣椒中的黄曲霉毒素B1进行检测,并对黄曲霉毒素的防控措施进行讨论。结果显示,检测灵敏度为0.1μg/kg,相对标准偏差小于3%,平均回收率达97%,说明本法稳定性好,测定准确,重现性好,能有效的应用于干辣椒中黄曲霉毒素B1的检测。

免疫磁珠富集结合酶联免疫吸附法检测酱油中黄曲霉毒素B_1

将活泼酯法活化后的羧基化超顺磁珠与辛酸一硫酸铵法纯化的抗黄曲霉毒素B，单克隆抗体偶联，获得黄曲霉毒素B，（AFB。）免疫磁珠。比较不同粒径大小的免疫磁珠的富集效率，优化磁珠偶联抗体的条件以及富集AFB。的反应条件，初步建立了以免疫磁珠富集结合酶联免疫吸附法检测酱油基质中的AFB，的方法。结果表明：酶联免疫吸附法在0．05～0．3gg／kg范围内具有良好的线性关系，相关系数为0．9842。在酱油中添加加1-7μg／kgAFB，的平均加标回收率为83．6％～104％，相对标准偏差为7．2％～13．7％。该方法具有快速简便、设备简单、灵敏度高、准确性好等优点，可很好地应用于酱油中的AFB，的快速检测。

酶联免疫法检测酱油中的黄曲霉毒素B1

目的建立酶联免疫法检测酱油中黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)的分析方法。方法酱油样本经纯乙腈(料液比=1:2,V:V)提取,再做1:9稀释,通过酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定样本中AFB_1。结果当加标浓度为2μg/kg和5μg/kg时,纯乙腈对酱油中AFB_1的提取回收率结果分别为121.3%和106.5%;方法检出限为1μg/kg。与国标方法检测结果的相对标准偏差小于10%。结论本方法准确、灵敏度高,可适用于酱油中AFB_1的检测。

采用酶联免疫捕获法和荧光酶联免疫吸附法检测过敏原IgE抗体的比较分析

目的:对酶联免疫捕获法的ALLERG-O-LIQ系统和荧光酶联免疫吸附法的ImmunoCAP系统检测过敏原特异性IgE抗体的一致性进行对比观察。方法:研究对象为我院2008～2010年就诊于变态反应科、儿科的病例,采用2种不同的酶联免疫吸附法检测屋尘螨(D1)、粉尘螨(D2)、狗毛屑(E5)、德国小蠊(I6)、鸡蛋(F1)、牛奶(F2)、花生(F13)、蟹(F23)、虾(F24),共9种过敏原特异性IgE抗体检测,将2种检测结果进行一致性检验和线性回归分析。结果:共进行了520项次过敏原特异性IgE检测,两种系统对吸入性过敏原特异性IgE抗体定量检测结果一致性良好(P<0.05),特异性IgE结果:屋尘螨>粉尘螨>德国小蠊>狗毛屑;而对食物过敏SIgE抗体检测结果的相关度较吸入过敏原低,特异性IgE结果:蟹>虾>花生>鸡蛋>牛奶。结论:ALLERG-O-LIQ系统和ImmunoCAP系统都属于新一代易操作的过敏原检测系统。2种检测方法一致性良好,结果偏离度较小,呈线性回归分布。因此,对于评估血清中的特异性IgE来说,ALLERG-O-LIQ系统是一个可靠的、经济的临床诊断系统。其检测的结果与ImmunoCAP系统的检测结果比较相符合。

酶联免疫吸附法测定云南铁皮石斛中黄曲霉毒素B1

目的建立酶联免疫吸附法测定铁皮石斛中黄曲霉毒素B1(afatoxin B1, AFB1)的分析方法,并研究酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)和高效液相色谱法(highperformanceliquid chromatography, HPLC)测定云南铁皮石斛中AFB1的结果差异性。方法用甲醇+水溶液(50+50, V/V)提取石斛中AFB1,采用酶联免疫吸附法和高效液相色谱法同时检测云南铁皮石斛(铁皮枫斗)中AFB1,进行准确性、精密度和回收率等方法学实验,比较2种方法的差异性。结果 ELISA法在测定范围内AFB1与其对应的吸光度值之间呈良好的线性关系,回归方程Y=-34.798X+18.134,相关系数r2为0.9967;添加1.0、4.0、10.0μg/kg3个浓度的平均加标回收率为85.3%~94.7%,相对标准偏差为2.57%~4.88%。2种方法的结果符合率为93.2%~117%,相对标准偏差均小于10%。结论 ELISA法具有操作简单、检测速度快、灵敏、特异性好等优点,可同时检测大批量样品中AFB1的含量。

酶联免疫法(ELISA)测定婴幼儿配方奶粉中的黄曲霉毒素M_1方法改进

本文对ELISA检测婴幼儿配方奶粉中的黄曲霉毒素M1含量方法进行改进,处理方法为(1+1)甲醇水提取再经三氯甲烷净化,提取效果比直接提取更佳。此方法的灵敏度为0.1μg/kg,加标回收率为90.0%～105.6%,相对标准偏差为6.57%,方法重复性良好,能有效消除假阳性。

酶联免疫法测定不同食用植物油中黄曲霉毒素B_1

用酶联免疫法(ELISA)测定食用植物油中黄曲霉毒素B1,并对如何防控食用油中黄曲霉毒素B1进行探讨。在所分析菜籽油、大豆油、花生油、核桃油4种油中,以菜籽油黄曲霉毒素B1含量最低,其次是大豆油和核桃油,花生油含量最高。方法检测灵敏度为0.1μg/kg,平均回收率为91.4%～93.5%,相对标准偏差小于5%;结果表明,酶联免疫法测定准确,稳定性和重现性好,可广泛用于食用植物油黄曲霉毒素B1检测。

酶联免疫分析法探测Cry1Ab蛋白在不同介质中的构象变化

采用酶联免疫分析(ELISA)方法,根据构象变化后的蛋白与抗体结合能力下降从而导致ELISA测定值降低的原理,探测了转cry1Ab基因水稻表达的Cry1Ab蛋白在不同溶液介质中的热致构象变化行为,以及不同有机溶剂及溶液pH值对该蛋白构象变化的影响程度.实验表明,CrylAb蛋白在不同条件下的构象变化程度可以灵敏地通过ELISA方法检测.在不同的介质中,Cry1Ab蛋白的热致构象变化程度不同.在Na2SO4介质中,该蛋白具有较高的热稳定性;SDS的存在,可以促进该蛋白的构象变化.常温下,25%(V/V)的有机溶剂乙腈、异丙醇、甲醇、乙醇均能使该蛋白的构象发生转变,其中以乙腈最为显著.醇类溶剂对Cry1Ab蛋白的构象影响程度随疏水性增大而增大;溶液pH值也对该蛋白的构象变化产生影响.pH在 8～10之间,该蛋白构象能保持稳定;酸或过碱性的溶液均能使蛋白构象偏离原始状态,从而引起ELISA测定值的降低.另外,腐殖酸能在一定时间内保持Cry1Ab蛋白构象的稳定性.

固相酶联免疫测定法检测NS1抗原在登革病毒感染早期诊断中的应用

目的探讨固相酶联免疫测定(ELISA)法检测NS1抗原在登革病毒感染早期诊断中的应用价值。方法选取登革病毒感染早期患者血清171份,非登革病毒感染发热患者血清11份,正常人血清10份,采用ELISA法检测全部192份血清的登革病毒NS1抗原和IgM抗体;采用逆转录-聚合酶链反应-限制性内切酶酶切片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP)技术对发病5 d内的125份血清进行扩增和鉴定分型;并采用C6/36细胞微量培养法对发病第1、2天的41份血清进行登革病毒分离培养。结果登革病毒感染患者发病2 d内、3～5 d以及6～10 d血清NS1抗原的检出率分别是92.7%(38/41)、83.3%(70/84)、10.9%(5/46);IgM抗体的检出率分别是2.4%(1/41)、51.2%(43/84)、97.8%(45/46);非登革病毒感染的发热患者及正常人血清中,有1例疟疾患者血清登革病毒IgM抗体呈阳性,NS1抗原无一例阳性。RT-PCR在登革病毒感染患者发病第1、2天和3～5天的检出率分别是85.4%(35/41)、83.3%(70/84);登革病毒感染患者发病第1、2天血清的病毒分离培养阳性率分别是80.0%(16/20)、38.1%(8/21),总分离率58.5%(24/41);RT-PCR-RFLP分型鉴定技术及间接免疫荧光法(IFA)均证实2006年广州流行株为登革Ⅰ型病毒。结论ELISA法检测登革病毒NS1抗原操作技术成熟,且具有敏感性高、特异性好的特点,对登革病毒感染的早期诊断和疫情的早期控制具有重要意义,适合于基层医疗机构常规应用。

酶联免疫法验证黄曲霉毒素B_1在浓香型白酒生产中的安全性

以具有代表性的泸州老窖大曲及其入窖酒醅、丢糟、黄水、基酒、成品酒为样品,采用酶联免疫法对浓香型白酒生产各个环节的样品中的黄曲霉毒素B1含量进行检测。结果表明,浓香型白酒生产各个环节的样品中黄曲霉毒素B1含量远低于国家食品行业的限量标准,并由此初步验证得知黄曲霉毒素B1在浓香型白酒生产中是安全的。

等位基因特异性扩增酶联免疫法检测CYP1A1基因多态性

目的 建立一种高效的基因多态性检测方法。方法 用等位基因特异性扩增 (ASA)和等位基因特异性扩增酶联免疫法(ASA ELISA)对CYP1A1基因m2多态性进行检测。结果 两种方法的检测结果基本一致 ,仅有 1例不相同。ASA ELISA将地高辛标记在扩增产物上 ,然后通过酶联免疫法检测扩增产物 ,检测灵敏度与等位基因特异性扩增 (ASA)后琼脂糖凝胶电泳相比高 10 0倍。结论 该方法具有操作简单、快速、灵敏度高等特点 ,可用于大标本量的基因多态性检测。