HIV-1潜伏库研究进展

HIV-1在未经治疗的艾滋病患者体内虽可以持续复制,但也可潜伏在细胞内以逃避宿主的免疫清除,这一现象即病毒潜伏。病毒潜伏对抗病毒治疗带来了挑战,也引起人们的高度关注。本文对HIV-1病毒潜伏库的研究进展进行了综述。

HIV-1病毒储存库在HIV持续感染中的作用

清除HIV-1的一个重要的障碍就是在HIV感染的过程中,病毒能够潜伏在某个亚群的细胞中。这些亚群细胞的易感性、生命周期、繁殖能力及其在细胞生理和免疫条件改变的情况下周期性产生病毒的能力对病毒的持续存在都是很重要的影响因素。记忆性CD4+T淋巴细胞、骨髓来源的单核-巨噬细胞及造血祖细胞都被认为是HIV-1前病毒DNA的储藏库。本文对HIV-1持续存在有意义的细胞及清除这些潜伏感染细胞可能的策略进行综述。

宿主细胞microRNAs对潜伏于静息初始CD4^+T细胞中HIV-1病毒的作用

microRNAs是参与靶基因转录后调控的一类非编码小RNA，它们可分别来源于宿主细胞RNA或病毒RNA。研究证实，病毒编码的microRNAs可靶向宿主细胞或病毒自身基因，调控其表达而实现免疫逃逸和相关致病作用；而宿主细胞编码的microRNAs在抗病毒感染过程存在防御作用，但亦有研究发现宿主细胞microRNAs在病毒感染复制中起促进作用，如miR-122和HCV感染。艾滋病患者的临床治疗是个世界难题。HIV-1病毒潜伏于静息性初始CD4＋T淋巴细胞是艾滋病患者接受临床治疗方案HAART最终失败的主要原因。其中，HIV-1的潜伏存在作用于病毒生命周期多个环节的多种因素的影响。本论文作者向我们展示了在基因转录后水平宿主细胞microRNAs在其中发挥的作用。

人源抗EB病毒潜伏膜蛋白1特异性基因工程抗体Fab的筛选与特性

目的:应用噬菌体展示技术制备抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latert membrare protern 1,LMP1)特异性、高亲和力的全人抗体Fab片段。方法:利用稳定转染表达LMP1的SUNE-1细胞及原核表达的LMP1胞外区蛋白作为抗原对大容量人源Fab抗体库进行差减筛选及固相筛选,经过5轮细胞筛选和3轮固相筛选,随机挑选30个克隆经酶联免疫吸附法鉴定,阳性克隆进行可溶性表达,用LMP1阳性表达的人鼻咽癌细胞株HNE2/LMP1鉴定抗LMP1抗体Fab的结合活性。结果:Western blot、免疫荧光结果显示,从大容量人源Fab抗体库中筛选出1株抗LMP1抗体Fab,细胞ELISA、荧光激活细胞分类术、免疫荧光分析、免疫组化检测结果显示Fab与人鼻咽癌细胞表面LMP1分子有较好的结合活性。结论:从人源Fab抗体库中筛选的Fab抗体能够与鼻咽癌细胞表面LMP1分子特异性结合,为研制用于EBV相关肿瘤如鼻咽癌生物治疗的靶向药物,提供了候选分子。

DC-SIGN诱导的信号通路在HIV-1前病毒活化中的作用

目的研究HIV-1 gp120蛋白与DC-SIGN结合对HIV-1前病毒的活化作用及其信号通路机制。方法将DC-SIGN表达质粒和HIV-1 5’末端重复序列(5’LTR)报告质粒转染293T细胞,以HIV-1 gp120蛋白、野生型HIV-1、VSV-G-p NL4.3假病毒分别刺激,检测HIV-1 5’LTR的活性。慢性感染HIV-1的CEM-Bru细胞转染DC-SIGN表达质粒,以HIV-1 gp120蛋白刺激,检测HIV-1Tat mRNA和HIV-1 p24蛋白表达水平。特异性抑制ERK、P38和NF-κB信号通路,再用gp120刺激DC-SIGN(+)CEM-Bru细胞,检测HIV-1前病毒的活化。结果在DC-SIGN(+)293T细胞中,HIV-1 5'LTR可以被HIV-1 gp120激活。HIV-1 gp120蛋白及DC-SIGN刺激DC-SIGN(+)CEM-Bru后,HIV-1 Tat mRNA和HIV-1 p24蛋白表达水平明显升高,提示其早期和晚期HIV-1前病毒复制,用抗体阻断DC-SIGN可抑制潜伏HIV-1活化。HIV-1 gp120/DC-SIGN通过NF-κB信号通路在激活潜伏HIV-1前病毒。结论 HIV-1gp120可通过结合DC-SIGN激活NF-κB信号通路介导HIV-1前病毒活化。

Ⅰ型人类免疫缺陷病毒潜伏激活剂的研究进展

艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的获得性机体免疫缺陷综合征。高效抗反转录病毒治疗是目前治疗AIDS患者最有效的方法,其虽可降低病人体内病毒载量,但却不能彻底清除病毒。2012年“shock and kill”治疗策略被提出,该策略利用HIV潜伏激活剂(LRA)激活潜伏在CD4+T细胞内的HIV-1使其暴露,随后通过增强免疫系统或采用抗病毒药物消灭携带有病毒的宿主细胞,从而逐渐清除病毒潜伏库,最终实现艾滋病的功能性治愈。HIV-1潜伏机制主要有5种:表观遗传学调控、转录因子对基因的调控、免疫信号通路的调节、前病毒基因整合位点的影响和微RNA的影响。基于HIV-1的潜伏机制,目前有潜力作为LRA的药物主要包括表观遗传修饰剂、转录因子调节剂和免疫激活剂等。本文对以上几类药物的作用机制、代表性药物以及研究进展进行综述,以期为LRA研发提供思路。

nPKC-PKD3信号传导途径介导Prostratin活化HIV-1转录

采用HIV-LTR-Luc稳定细胞株分析其荧光素酶活性,研究Prostratin活化潜伏的艾滋病毒的分子机制.实验结果表明:随药物浓度升高和处理时间延长,Prostratin能明显激活HIV-1转录.采用PKC抑制剂拮抗nPKC活性,能有效阻断Prostratin对HIV-1的激活;反之,过表达nPKC能激活HIV-1转录.最后,敲低PKD3高效拮抗Prostratin激活的HIV-1转录.因此,nPKC-PKD3信号途径参与Prostratin活化HIV-1转录,从而激活潜伏的艾滋病毒.本研究为开发新的抗艾滋病药物筛选模型提供了可靠的理论依据.

HIV-1潜伏库调控剂的研究进展

HIV-1潜伏库的存在导致艾滋病无法彻底治愈。因此,迫切需要开发高效低毒、成药性良好的HIV-1潜伏库调控剂以实现艾滋病的功能性治愈。本文综述了2019年以来潜伏库调控剂的研究进展,涵盖药物发现策略、生物活性和作用机制。本文对于发现具有临床应用价值的HIV-1潜伏库调控剂具有重要的指导意义。

HIV-1潜伏储存库及其控制策略

高效抗逆转录病毒治疗（HAART）是人类在治疗人类免疫缺陷病毒（HIV）感染/艾滋病（AIDS）方面取得的一个重要成就。HAART不仅可以有效控制HIV复制,将血浆病毒载量降至现有常规检测方法测不出的水平,而且能重建艾滋病患者的免疫功能[1],延长患者生命,降低死亡率。HAART体系建立时人们希望能够完全清除患者体内的HIV,达到治愈AIDS的目的 ,

在抗病毒治疗中使用伏立诺他会破坏HIV-1的潜伏

目前使用的抗逆转录病毒药物可以控制病毒的复制，但是对感染HIV-1的患者来说，实现治愈的一个主要障碍在于HIV基因组能够融进休眠的CD4＋T细胞的DNA中，并处于潜伏状态，从而躲过免疫检测及药物进攻而在免疫系统中持久存在。这也是艾滋病患者停止药物治疗后再度出现感染的主要原因，为此患者需要终身使用抗逆转录病毒药物，但其耐药性、药物副作用以及成本等影响加大。而破坏和清除这些潜伏的病毒，正是找到艾滋病治愈方法的关键所在。

噬菌体随机肽库分析HIV-1 p24抗原表位

目的 利用噬菌体随机肽库分析抗HIV 1核心区抗原p2 4单抗在抗原上的识别位点。方法 用抗HIV 1p2 4单抗 2C7和 3H10作为筛选分子 ,对噬菌体肽库进行生物淘洗 (biopanning) ,并通过DNA测序、ELISA效价测定等对所获得的噬菌体克隆进行鉴定 ,最后对合成的 7肽位点通过间接ELISA及竞争抑制试验进行血清学分析。结果 序列分析结果表明 ,单抗 2C7和 3H10在HIV 1p2 4上的抗原识别表位的保守序列分别为DHPXPXX和XXXXKAF。分别合成这 2个 7肽氨基酸序列P C1(DHPSPWG)和P H3(SPWLKAFGGGS) ,并分析其免疫学结合特性 ,结果表明与P H3相比 ,单抗 2C7的抗原识别表位P C1的固相结合特性较好 ,固相P C1检测血样 ,13份抗HIV阳性样本中 ,12份为阳性(检出率为 92 .3% ) ,19份抗HIV阴性样本中 ,仅 1份为假阳性结果 (特异性为 94.7% )。与P C1相比 ,单抗 3H10的抗原表位P H3的固相结合能力极差 ,但液相结合活性较好 ,血样与P H3的抑制试验表明 ,13份抗HIV阳性样本中 12份样本对P H3的抑制率大于 6 0 % (12 13) ,而 9份抗HIV阴性样本中仅 1份对P H3的抑制率大于 5 0 %。结论 用抗HIV 1p2 4单抗筛选噬菌体随机肽库 ,获得单抗在p2 4抗原上的识别表位的氨基酸序列 ,血清学结果表明这 2个抗原表位存在于p2 4自然抗原上 。

人类免疫缺陷病毒-1潜伏感染实验技术研究进展

病毒潜伏状态是一种可逆的没有复制的感染状态，病毒凭借潜伏状态可躲避机体的免疫应答。目前认为HIV-1潜伏感染的靶细胞主要是由激活状态回归至静息状态的记忆CD4＋T淋巴细胞。虽然潜伏感染的细胞数量极少，大约每1×10^6个静息CD4一T淋巴细胞中只有一个潜伏感染细胞，但即使联合采用高效抗反转录病毒治疗（HAART），这些细胞仍可存活㈠。凭借一种整合稳定但转录停止的前病毒状态，潜伏的HIV1得以避免机体免疫反应和抗病毒药物的影响。这种在记忆CD4＋T淋巴细胞内潜伏的HIV-1衰老非常缓慢，即使长期采用HAART将患者血中的病毒载量抑制在检测水平之下，也不能将其消灭，反而会给耐药毒株提供理想的温床，同时也给相关抗病毒治疗策略带来极大制约。

EB病毒潜伏膜蛋白1羧基端活化区域2蛋白特异性结合短肽的筛选

目的 利用噬菌体12肽库筛选能与EB病毒潜伏膜蛋白1（LMPl）羧基端活化区域（CTAR）2蛋白特异性结合的短肽.方法 用纯化的CTAR2蛋白筛选噬菌体12肽库.通过夹心ELISA方法分析噬菌体克隆与CTAR2蛋白的亲和力.利用硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定,并对阳性克隆进行测序及序列分析.结果 CTAR2蛋白对噬菌体12肽库进行3轮筛选,第3轮的产率是第1轮的143倍[（3.0×10^-6）/（2.1×10^-8）],噬菌体克隆得到较好的富集.ELISA方法提示筛选出来的噬菌体克隆能与CTAR2蛋白高效结合.硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100％.测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列：GLKHHSPGLLLY.结论 筛选出与CTAR2蛋白特异性结合的短肽序列GLKHHSPGLLLY,为研究LMP1致瘤机制和开发拮抗LMP1蛋白的小分子短肽类药物提供实验依据.

干扰素α对人免疫缺陷病毒潜伏库的影响

艾滋病已成为全球性的公共卫生问题。因为HIV-1潜伏库的存在，HAART虽然延缓了疾病的进程，减少了相关机会性感染的发生，但是却无法将病毒从人体内完全清除。近年来IFN-α对HIV-1潜伏库的清除受到广泛关注，此文对IFN—α对HIV-1病毒潜伏库的作用进行综述。

HIV-1储存库激活剂体外激活效应研究

目的探讨人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)储存库激活剂的体外激活效应,为临床应用提供参考。方法分离得到健康供血者外周血中的CD4^+T细胞,构建HIV-1潜伏感染的原代细胞模型。用不同浓度(0.5、1、2μmol/L)的帕比司他(Panobinostat)、伏立诺他(SAHA)(Vorinostat)、BIX-01294、JQ-1、Bryostatin-1、GS-9620、地西他滨(Decitabine)、戒酒硫(Disulfiram)、Sirolimus分别处理细胞,在不同作用时间(1、3、5 d)后利用流式细胞分析仪检测每种药物对HIV-1储存库细胞的绿色荧光蛋白(GFP)表达效率及细胞存活率,并确定每种激活剂的最佳激活浓度和作用时间。结果通过对由HIV-1启动子驱动的GFP表达效率及细胞存活率的统计分析,明确了在该细胞模型中这9种HIV-1储存库激活剂的最佳作用浓度和作用时间:Panobinostat的最佳激活浓度为1μmol/L,最佳作用时间为3 d;SAHA的最佳激活浓度为2μmol/L,最佳作用时间为1 d;JQ-1、Bryostatin-1和GS-9620在该模型中的最佳激活浓度均为1μmol/L且最佳作用时间均为1 d;BIX-01294、Decitabine、Disulfiram、Sirolimus在该模型中的最佳激活浓度均为0.5μmol/L且最佳作用时间均为1 d。横向对比发现,浓度为1μmol/L,作用时间为3 d的Panobinostat与浓度为0.5μmol/L,作用时间为1 d的Sirolimus在这9种药物中的激活效率最高,且对细胞存活无明显影响。结论系统比较确认了9种病毒储存库激活药物在体外细胞模型中的激活效率,及最佳作用浓度和时间,为后续这些药物的临床实验研究提供重要参考。

HIV-1潜伏感染的细胞模型

人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染导致艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),严重危害人类健康.抗逆转录病毒疗法(antiretroviral therapy,ART)可高效抑制HIV-1复制,但无法治愈艾滋病,主要原因是HIV-1可在机体建立潜伏感染,形成稳定的病毒储存库.这些含有沉默的整合病毒的储存库细胞在ART治疗的个体中频率极低,人们难以对其直接分离而进行研究.因此,为研究HIV-1潜伏感染的机制及靶向治疗病毒储存库的方法,建立HIV-1潜伏感染的细胞模型非常重要.本文总结概述了多种常用的HIV-1潜伏感染的细胞模型及其应用,并分析了这些模型各自的优点和局限性,可为进一步深入研究HIV-1潜伏感染和艾滋病功能性治愈提供有效的工具参考和理论依据.

EB病毒LMP1 CTAR23蛋白特异性结合短肽的筛选

目的利用噬菌体12肽库筛选能与EB病毒(EBV)LMP1 CTAR23蛋白高效结合的短肽。方法利用亲和层析柱加酶切的方法纯化CTAR23蛋白,并用其筛选噬菌体12肽库。通过夹心ELISA法分析噬菌体克隆与CTAR23蛋白的亲和力。通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定,并对阳性克隆进行测序及序列分析。结果对12肽库进行3轮筛选后,噬菌体克隆具有良好的富集效果。ELISA提示筛选出来的噬菌体克隆能与CTAR23蛋白高效结合。硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100%,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列HVSLHKHYPTAS。结论噬菌体短肽HVSLHKHYPTAS为研究LMP1致瘤机理、开发拮抗LMP1蛋白的小分子短肽类药物奠定坚实的基础。

microRNA在HIV-1型感染及其相关疾病中的研究进展

微小RNA(microRNA, miRNA)是一种重要的转录后基因表达调节因子,其表达谱的变化与许多人类病理学有关。miRNA与人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)之间的相互关系已成为全球研究的热点之一。本文主要从miRNA对HIV-1病毒的转录复制、潜伏感染的影响,miRNA在HIV-1相关疾病中的研究,及其对人类获得性免疫缺陷综合征(acquiredimmunodeficiency syndrome,AIDS)的治疗前景进行综述。