血清p-tau181 Aβ_(1-42)及PENK-A水平与老年缺血性脑卒中并发血管性痴呆的相关性

目的探讨血清磷酸化-tau181(p-tau181)、β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))、脑啡肽原A(PENK-A水平与老年缺血性脑卒中(CIS)后并发血管性痴呆(VD)的相关性。方法将南京市中心医院2021-05—2023-02收治的144例CIS患者设为CIS组,另选取同期健康体检者140例为健康组。根据出院3个月后VD发生情况将CIS组分为未并发VD组(n=103)及并发VD组(n=41)。ELISA法检测血清p-tau181、Aβ_(1-42)、PENK-A水平。多因素Logistic回归模型分析CIS后并发VD的影响因素;ROC曲线分析血清p-tau181、Aβ_(1-42)、PENK-A对CIS后并发VD的预测价值。结果与健康组比较,CIS组血清p-tau181、Aβ_(1-42)、PENK-A水平均显著上升(t=39.551、28.510、21.015,P<0.05);并发VD组血清p-tau181、Aβ_(1-42)、PENK-A水平均显著高于未并发VD组(t=10.236、7.721、9.603,P<0.05)。与未并发VD组相比,并发VD组年龄和NIHSS评分、大面积梗死及高血压占比均显著升高(t/χ^(2)=4.400、5.519、9.579、4.195,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清p-tau181(OR=1.527)、Aβ_(1-42)(OR=1.336)、PENK-A(OR=1.419)、年龄(OR=1.225)、NIHSS评分(OR=1.274)、大面积梗死(OR=2.652)均为CIS后并发VD的影响因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清p-tau181、Aβ_(1-42)、PENK-A预测CIS后并发VD的AUC分别为0.781、0.775、0.821,敏感度分别为70.73%、68.29%、65.85%;血清p-tau181、Aβ_(1-42)、PENK-A联合预测CIS后并发VD的AUC(0.925)显著高于血清p-tau181(Z=3.108,P=0.002)、Aβ_(1-42)(Z=3.096,P=0.002)、PENK-A(Z=3.193,P=0.001)分别单独预测的AUC。结论CIS后并发VD患者血清p-tau181、Aβ_(1-42)、PENK-A水平升高,三者联合对CIS后并发VD具有较高的预测价值。

血清β-淀粉样蛋白1-42、脂蛋白相关磷酸酶A2、α_(2)巨球蛋白水平与脑梗死并发血管性痴呆的关系及联合检测的预测价值

目的 探讨脑梗死并发血管性痴呆与血清β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、脂蛋白相关磷酸酶A2(LP-PLA2)、α_(2)巨球蛋白(α_(2)M)的相关性及联合检测的预测价值。方法 选取2019年1月至2023年3月宝鸡高新医院收治的201例脑梗死患者作为研究对象,根据所选患者6个月内是否并发血管性痴呆将其分为并发组(39例)和未并发组(162例)。通过单因素及多因素logistic回归分析脑梗死并发血管性痴呆与血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M水平的关系,并采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M单一及联合检测对脑梗死并发血管性痴呆的预测价值。结果 并发组与未并发组患者的年龄、糖尿病史、脑梗死面积、血管狭窄程度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,年龄较大、合并糖尿病、脑梗死面积较大、血管狭窄程度为重度、血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M水平较高是脑梗死并发血管性痴呆的独立危险因素(OR分别为4.614、4.362、2.497、4.246、2.425、2.568、3.080,P<0.05)。并发组血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M水平高于未并发组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M联合检测预测脑梗死并发血管性痴呆的曲线下面积为0.910,高于血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M单一检测(0.736、0.772、0.737,P<0.05)。结论 脑梗死患者并发血管性痴呆可能与年龄较大、合并糖尿病、脑梗死面积较大、血管狭窄程度为重度及血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M水平较高有关,且血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M联合检测预测脑梗死并发血管性痴呆的价值更高。

HIV-1 RNA有效抑制下T淋巴细胞与HAART持续治疗时间的相关性

目的观察HIV-1RNA有效抑制下HAART持续治疗时间与T淋巴细胞的相关性。方法对102例HAART持续治疗时间超过6个月,血浆HIV-1RNA<50个拷贝/mL的AIDS患者进行回顾性研究,采用Spearman秩和相关检验考察HAART持续治疗时间与CD4+,CD3+,CD8+,CD4+CD28+,CD4+CD45RA+,CD4+CD45RO+和CD8+CD38+,CD38+T细胞的相关性。同时根据HAART持续治疗时间将102例AIDS患者分为A(6～12个月)、B(13～24个月)、C(25～36个月)、D(37～52个月)4组,考察4组间T细胞亚群的差别。结果 HIV-1RNA有效抑制下HAART持续治疗时间与CD4+CD28+,CD4+CD45RA+,CD4+CD45RO+T细胞绝对计数呈正相关,相关系数r分别为0.214,0.249,0.259,P值分别为0.007,0.016,0.012。HAART持续治疗时间分别与CD8+CD38+,CD3+,CD8+T细胞表达比例呈负相关,r分别为-0.352,-0.204,-0.236,P值分别为0.000,0.041,0.018;与CD28+细胞绝对计数呈正相关(r=0.204,P=0.042)。CD4+T细胞绝对计数与CD4+CD28+,CD4+CD45RO+T细胞相对计数呈正相关,r分别为0.421,0.241,P值分别为0.000,0.015;与CD8+CD38+T细胞相对计数呈负相关(r=-0.268,P=0.007)。D组的CD4+CD28+T细胞绝对计数显著高于A组(P<0.05);C,D组的CD4+CD45RA+T细胞绝对计数显著高于A组(P<0.05)。D组的CD8+CD38+T细胞相对计数(17±9)显著低于A组(25±8)(P<0.05)。结论 AIDS患者经过HAART治疗病毒复制被抑制后,HAART持续治疗时间与某些T细胞亚群数量有关,HAART持续治疗时间是AIDS患者免疫重建的因素之一。

血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3的表达

目的观察血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1light chain 3,MAP1LC3,LC3)的表达,探讨自噬在血管性痴呆发病中的可能作用。方法大鼠随机分为假手术组(sham组)、血管性痴呆模型组(VD组)和Wortmannin自噬抑制剂组(WM组),每组又随机分为模型制备后1、2、4、8、12周5个亚组。采用四血管阻断法制作血管性痴呆模型,Morris水迷宫法检测学习记忆能力,透射电镜观察自噬体的形成,蛋白质印迹法检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值作为自噬活性的指标。结果与假手术组相比,VD组大鼠平均逃避潜伏期延长(P<0.05或0.01),穿越平台次数减少(P<0.05或0.01);与VD组比较,WM组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05或0.01),穿越平台次数增加(P<0.05或0.01)。VD组大鼠海马CA1区1周时神经细胞核膜凹陷,胞核浓缩,线粒体肿胀,可见自噬体、溶酶体;4周时自噬体、溶酶体数量显著增多;12周时仍可见自噬体。WM组神经元损伤较VD组减轻,自噬体数量减少。VD组大鼠海马CA1区LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值在1周时升高,4周时达到高峰,8周时开始下降,12周时仍较高。WM组各时间点LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值较VD组低,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬活性被激活,可能参与了血管性痴呆的发生发展。

HIV-1相关蛋白与细胞自噬在HIV相关神经认知障碍中的研究进展

细胞自噬作为真核细胞的一种自我保护机制,能降解细胞内的大分子蛋白质和病原微生物以及一些受损或老化的细胞器,使细胞维持平衡状态,在预防神经退行性疾病及免疫系统疾病等过程中有重要作用.研究发现,HIV-1(Human immunodeficiency virus type-1)能通过各种机制改变细胞自噬的正常功能,以利于自身的复制、感染等,本文就HIV-1的相关蛋白与细胞自噬的相互作用,及其在HIV相关神经认知障碍(HIV-1 associated neurocognitive disorder,HAND)的发生和发展中的重要作用进行综述.

老年性痴呆患者血清miR-375、SP1水平与认知功能的相关性

目的:检测老年性痴呆患者血清微小RNA-375(miR-375)、特异性蛋白1(SP1)表达水平,探讨其与认知功能的相关性。方法:选取2021年4月至2022年4月在本院就诊的老年性痴呆患者120例纳入疾病组,根据临床痴呆评定量表(CDR)评定患者病情严重程度,选取同期在本院进行健康体检的志愿者120例纳入对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测所有受试者血清miR-375、SP1 mRNA表达水平。采用简易精神状态量表(MMSE)评估所有受试者的认知功能。比较不同病情严重程度患者血清miR-375、SP1 mRNA表达水平及MMSE评分。采用Pearson相关分析疾病组血清miR-375与SP1 mRNA表达水平的相关性,Spearman相关分析两者与MMSE评分的相关性。采用多因素Logistic回归分析影响老年性痴呆发生的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-375、SP1 mRNA表达水平和MMSE评分对老年性痴呆患者病情进展为重度的预测价值。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-375与SP1的关系。体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,通过β-淀粉样蛋白肽25-35(Aβ25-35)诱导构建老年性痴呆体外细胞模型,观察过表达miR-375对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞中SP1 mRNA和蛋白表达以及细胞活力、凋亡率的影响。结果:疾病组血清miR-375表达水平、MMSE评分显著低于对照组,SP1 mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05)。重度组、中度组血清miR-375表达水平、MMSE评分显著低于轻度组,SP1 mRNA表达水平显著高于轻度组(P<0.05);重度组血清miR-375表达水平、MMSE评分显著低于中度组,SP1 mRNA表达水平显著高于中度组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,疾病组血清miR-375与SP1 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.627,P<0.05);Spearman相关分析显示,血清miR-375表达水平与MMSE评分呈正相关(r=0.664,P<0.05),血清SP1 mRNA表达水平与MMSE评分呈负相关(r=-0.472,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,低MMSE评分、miR-375低表达、SP1 mRNA高表达是影响老年性痴呆发生的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-375、SP1 mRNA表达水平和MMSE评分以及三者联合预测老年性痴呆患者病情进展为重度的曲线下面积(AUC)分别为0.823、0.780、0.851、0.938,且三者联合预测的AUC显著高于单个指标预测的AUC(Z=2.734、3.150、2.113,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-375能够靶向SP1。Aβ25-35诱导后,SH-SY5Y细胞中miR-375表达水平、细胞活力显著降低,SP1 mRNA和蛋白表达以及凋亡率显著升高(P<0.05);过表达miR-375可显著升高Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞活力,降低SP1 mRNA和蛋白表达以及凋亡率(P<0.05)。结论:老年性痴呆患者血清miR-375表达水平下调,SP1 mRNA表达水平上调,且均与认知功能密切相关,可能两者通过相互作用参与调控患者病情进展。

微管相关蛋白1轻链3Ⅱ与微管相关蛋白2在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达

目的观察微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)与微管相关蛋白2(MAP-2)在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达及变化情况。方法 48只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组和模型组(血管性痴呆模型),每组大鼠又随机分为模型制备成功后1、2、4和8周4个亚组,每个亚组6只。采用四血管阻断法制备大鼠血管性痴呆模型。免疫组化法检测LC3Ⅱ与MAP-2的表达。结果与假手术组比较,模型组各时间点LC3Ⅱ表达均显著增高(P<0.001),MAP-2表达均显著减少(P<0.001)。模型组各时间点大鼠海马CA1区LC3Ⅱ与MAP-2的蛋白表达呈负相关(r=-0.723,P<0.001)。结论 LC3Ⅱ蛋白在海马CA1区过度表达,MAP-2蛋白表达减少,这可能是血管性痴呆发生、发展的重要机制之一。

基于Nrf2/NQO1/GCL信号通路探讨益肾健脑方对血管性痴呆大鼠神经元凋亡的影响

目的研究益肾健脑方对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠神经元凋亡的影响及作用机制。方法将60只SPF级大鼠随机分为模型制备组50只和空白组10只,模型制备组分时段结扎双侧颈总动脉,空白组仅分离双侧颈总动脉但不结扎。术后4周通过Morris水迷宫筛选出模型制备成功大鼠28只,随机分为模型组、多奈哌齐组(0.45 mg·kg^(-1)·d^(-1))、益肾健脑方高剂量组(24.3 g·kg^(-1)·d^(-1))、益肾健脑方低剂量组(12.15 g·kg^(-1)·d^(-1))各7只,加上空白组10只,共5组。给药4周后,行Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察大脑皮质和海马CA1区组织病理变化,TUNEL染色观察大脑皮质和海马CA1区神经细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测大脑皮质和海马CA1区天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Caspase-3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-7(cysteinyl aspartate-specific proteinase-7,Caspase-7)蛋白表达水平,Western blot检测海马组织核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,NQO1)、谷氨酰半胱氨酸连接酶(glutamate-cysteine ligase,GCL)蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组定位航行实验第5天逃避潜伏期明显增加,空间探索实验穿越平台次数明显减少,目标象限停留时间明显缩短(P<0.01);模型组脑组织病理损伤明显,神经细胞凋亡率显著升高(P<0.01);模型组大脑皮质区和海马CA1区Caspase-3、Caspase-7阳性表达显著升高(P<0.01);模型组海马组织Nrf2、NQO1、GCL蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和益肾健脑方高、低剂量组定位航行实验中第5天逃避潜伏期明显缩短,空间探索实验中穿越平台次数增加,目标象限停留时间明显延长(P<0.05,P<0.01);多奈哌齐组和益肾健脑方高、低剂量组脑组织病理损伤减少,神经细胞凋亡率均显著降低(P<0.01);多奈哌齐组和益肾健脑方高、低剂量组Caspase-3、Caspase-7阳性表达均显著降低(P<0.01);多奈哌齐组和益肾健脑方高、低剂量组海马组织Nrf2、NQO1、GCL蛋白表达均显著升高(P<0.01)。结论益肾健脑方可以改善VD大鼠学习记忆能力、抑制Caspase-3和Caspase-7蛋白表达及减少神经元凋亡,其机制可能与激活Nrf2/NQO1/GCL信号通路有关。

血清脂蛋白相关磷脂酶A2、血管紧张素1-7水平与老年急性脑梗死患者并发血管性痴呆的关系

目的探讨血清脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、血管紧张素1-7(Ang1-7)水平与老年急性脑梗死(ACI)患者并发血管性痴呆(VaD)的关系。方法选取2018年5月—2020年5月重庆大学附属中心医院收治的122例老年ACI患者为研究对象,根据是否合并VaD分为ACI-VaD组(54例)和ACI-NVaD组(68例);根据临床痴呆评定量表将ACI-VaD组分为轻度痴呆组(13例)、中度痴呆组(16例)、重度痴呆组(25例)。比较各组血清Lp-PLA2、Ang1-7水平,多因素logistic回归分析老年ACI患者并发VaD的影响因素,ROC曲线分析血清Lp-PLA2、Ang1-7水平对ACI并发VaD的预测价值。结果两组血清总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、Lp-PLA2、Ang1-7比较,差异有统计学意义(P<0.05)。重度痴呆组血清Lp-PLA2水平高于中度痴呆组、轻度痴呆组,Ang1-7水平低于中度痴呆组、轻度痴呆组;中度痴呆组血清Lp-PLA2水平高于轻度痴呆组,Ang1-7水平低于轻度痴呆组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。hs-CRP、Lp-PLA2为老年ACI患者并发VaD的独立危险因素(OR>1,P<0.05),Ang1-7为独立保护因素(OR<1,P<0.05)。Lp-PLA2+Ang1-7预测老年ACI患者并发VaD的曲线下面积、敏感度、特异性、准确度大于Lp-PLA2、Ang1-7单独预测。结论老年ACI患者并发VaD后血清Lp-PLA2水平明显升高,Ang1-7水平明显降低,为并发VaD的独立影响因素,联合检测能提升VaD预测价值。

通脉开窍丸治疗血管性痴呆模型大鼠海马区神经元的铁死亡变化

背景:研究表明铁死亡与血管性痴呆存在密切联系,通脉开窍丸对于改善血管性痴呆患者的认知功能有一定疗效,但其作用机制不明确。目的:基于核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)信号通路调控铁死亡探讨通脉开窍丸对血管性痴呆干预作用以及分子机制。方法:84只雄性SD大鼠,其中12只大鼠用作假手术组,其余大鼠用改良2-VO法制备成血管性痴呆的模型,成模后随机分为模型组、通脉开窍丸高、中、低剂量(27.6,13.8,6.9 g/kg)组、联合组[通脉开窍丸高剂量+ML385(20 mg/kg)]、盐酸多奈哌齐组(0.45 mg/kg),灌胃给药1次/d,联合组同时腹腔注射Nrf2抑制剂ML385,1次/d,连续4周。采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;苏木精-伊红染色观察各组大鼠海马组织中神经元病理学变化;比色法试剂盒检测大鼠血清中还原型谷胱甘肽、Fe^(2+)、丙二醛的浓度;普鲁士蓝染色法检测大鼠海马组织中铁沉积情况;透射电镜观察大鼠海马组织中神经元线粒体超微结构变化;蛋白免疫印迹法检测大鼠海马神经元Nrf2、HO-1、GPX4、XCT、铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)蛋白的表达。结果与结论:(1)与假手术相比,模型组大鼠逃避潜伏期时间明显延长(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.05);海马组织松散,神经元细胞核深染,染色质固缩甚至裂解;CA1区铁离子聚集;线粒体萎缩变小,线粒体嵴溶解消失,线粒体膜密度增厚;血清中Fe^(2+)、丙二醛水平上升,还原型谷胱甘肽水平下降(P<0.05);海马组织GPX4、HO-1、XCT、Nrf2、FTH1蛋白表达显著降低(P<0.05)。(2)与模型组相比,通脉开窍丸各剂量组和盐酸多奈哌齐组大鼠平均逃避潜伏期均明显缩短(P<0.05),穿越平台次数增加(P<0.05);海马神经元恢复明显,CA1区神经元铁离子聚集明显减少,线粒体结构和功能好转;血清Fe^(2+)、丙二醛水平显著降低(P<0.05),血清还原型谷胱甘肽浓度及海马组织中GPX4,HO-1,XCT,Nrf2,FTH1蛋白表达显著升高(P<0.05)。(3)与通脉开窍丸高剂量组相比,盐酸多奈哌齐组治疗效果差异无显著性意义(P>0.05),联合组大鼠水迷宫逃避潜伏期时间延长(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.05),大鼠CA1区神经元病理改变情况不明显,铁沉淀增加,血清中丙二醛、Fe^(2+)浓度增加(P<0.05),还原型谷胱甘肽浓度减少(P<0.05),海马组织神经元线粒体萎缩变小,且Nrf2、XCT、HO-1、GPX4、FTH1蛋白的表达减少(P<0.05)。在一定范围内,通脉开窍丸剂量越高效果越好,且高剂量治疗效果不亚于盐酸多奈哌齐。(4)结果说明,通脉开窍丸可以减轻大鼠海马组织神经元病理改变,改善血管性痴呆大鼠的认知功能,其作用机制可能与Nrf2/HO-1/GPX4信号通路的激活抑制铁死亡有关。

盐酸多奈哌齐与尼莫地平对老年脑梗死后血管性痴呆患者血清脂蛋白相关磷脂酶A2、脑源性神经营养因子和血管紧张素1-7水平的影响

目的比较盐酸多奈哌齐与尼莫地平对老年脑梗死后血管性痴呆(VD)患者的疗效,探讨其对血清脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、脑源性神经营养因子(BDNF)及血管紧张素1-7(Ang1-7)水平的影响。方法选取我院收治的老年脑梗死后血管性痴呆患者225例,根据治疗方法不同分为盐酸多奈哌齐组(n=115)和尼莫地平组(n=110),其中盐酸多奈哌齐组采取服用盐酸多奈哌齐治疗,尼莫地平组采取服用尼莫地平治疗,比较两组患者治疗前后认知功能、痴呆程度和日常生活能力以及临床疗效,同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组治疗前后血清Lp-PLA2、BDNF和Ang1-7水平并比较其差异。结果治疗后,两组简易精神状态量表(MMSE)评分高于治疗前,临床痴呆量表(CDR)和日常生活活动能力量表(ADL)评分低于治疗前(P<0.05),且盐酸多奈哌齐组改善情况优于尼莫地平组(P<0.05);盐酸多奈哌齐组临床总有效率高于尼莫地平组(P<0.05);治疗后,两组Lp-PLA2水平低于治疗前,BDNF和Ang1-7水平高于治疗前(P<0.05),且盐酸多奈哌齐组指标优于尼莫地平组(P<0.05)。结论对VD患者采取盐酸多奈哌齐和尼莫地平治疗,均能改善其认知功能、痴呆程度以及日常生活能力,同时还能调节血清Lp-PLA2、BDNF及Ang1-7在患者体内水平,盐酸多奈哌齐效果更优,在临床上可推广应用。

早老素-1基因多态性与迟发性老年痴呆的相关性

老年性痴呆（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病，ＡＤ）是以记忆减退，认知障碍，人格改变为特征的脑退行性疾病。根据发病年龄的不同，将本病分为早发性和迟发性两种类型。对于早发性家族性ＡＤ的遗传学研究已较清楚，但是迟发性ＡＤ的发病机理尚不明了。１９９６年Ｗｒａｇｇ等［１...

长期ART中HIV-1抗体的水平变化特点及其与HIV-1储存库相关关系的研究

目的分析HIV-1感染者在长期抗反转录病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)前后血浆中p24抗体和总HIV-1特异性抗体水平变化特点及其与HIV-1储存库关系。方法选取2009年11月—2013年7月于我中心接受ART满5年的27例HIV-1感染者作为研究对象,采用荧光素酶免疫吸附试验和酶联免疫吸附试验,分别检测患者接受ART 0、1、3、5年时间点的p24抗体和总HIV-1特异性抗体的水平,同时对其与总HIV-1 DNA和细胞相关RNA(cell-associated RNA,CA-RNA)的水平进行相关性分析。结果在ART 0、1、3、5年时,p24抗体水平分别为2.450(1.910~5.460)、1.460(1.080~2.160)、1.280(1.120~1.800)、1.570(1.090~2.180)LU;总HIV-1特异性抗体水平分别为3.378(3.157~3.710)、3.489(3.237~3.622)、3.446(2.742~3.573)、3.336(2.860~3.566)。p24抗体与总HIV-1 DNA和CA-RNA的水平均呈正相关(r分别为0.407、0.305,P均<0.05);总HIV特异性抗体水平与总HIV-1 DNA和CA-RNA水平没有相关性(r分别为0.155、0.165,P均>0.05)。结论总HIV-1特异性抗体水平在ART期间没有明显变化,且与HIV-1储存库大小没有相关性,p24抗体水平随着ART时间增加呈逐渐降低的趋势,与HIV-1储存库的大小呈正相关,可为HIV-1特异性抗体和HIV-1储存库大小关系的研究提供依据。

中国汉族人HIV-1辅助受体等相关基因CCR5、CCR2b、CXCR4和SDF1编码区SNP位点调查

目的调查中国汉族人群中HIV-1感染相关基因CCR5、CCR2b、CXCR4及SDF1编码区的基因多态性特点,为我国的艾滋病防治提供基础数据。方法 CCR5用2对引物进行PCR扩增,用PCR产物做模板直接测序。CCR2b编码区经PCR扩增后,用测序引物逐段分别测序。CXCR4(cDNA编号AF147204)编码区用2对引物进行PCR扩增,然后测序。SDF1编码区用4对引物进行PCR扩增,然后分别测序。样本总数为45例,测序结果用DNAstar综合分析,寻找和鉴定SNP位点。结果 CCR5基因编码区共发现6个SNP位点,4个引起氨基酸改变,1个单碱基缺失,引起移码突变和翻译提前终止。184A→G、503G→T、668G→A、999G→T等位基因频率分别为1.1％、21.1％、8.9％和10.0％。CCR2b编码区共发现8个SNP位点,6个错义突变,即43位G→C、190位G→A、260位C→A、302位C→A、315位G→C、433位G→A,突变频率分别为:30.0％、27.8％、32.2％、5.6％、10.0％和3.3％。CXCR4编码区共发现7个SNP位点,3个错义突变即38位C→T、90位A→T、712位A→C,1个终止突变:106位G→T,基因突变频率分别为:4.4％、4.4％、10.0％和3.3％。在SDF1编码区发现1个错义SNP位点:192位G→T,突变频率为8.9％;1例单碱基缺失:100位T缺失(100△T),引起34位氨基酸移码突变。结论中国汉族人HIV-1相关基因编码区有自己的多态性特点。4个HIV-1相关基因编码区共找到22个SNP位点,17个为首次报道;2个单碱基缺失均导致移码突变和翻译提前终止,1个已经报道。它们对HIV-1感染和艾滋病病程的影响值得进一步研究。

HIV-1 RNA被有效抑制下T细胞与外周血中HIV-1前病毒DNA

目的:考察HIV-1 RNA被有效抑制下T细胞与外周血中HIV-1前病毒DNA的相关性。方法:对云南地区90例确诊为AIDS,HAART持续治疗时间超过6个月,血浆HIV RNA<50 Copies/ml的患者进行研究,采用Spearmans秩和相关回顾性分析CD4+、CD3+、CD8+、CD4+CD28+、CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD38+、CD8+CD38+T细胞的绝对计数和相对计数与外周血中HIV-1前病毒DNA的相关性,同时考察HIV-1前病毒DNA拷贝数与HAART持续治疗时间的相关性。将90例患者根据HAART后CD4+T细胞绝对计数分为A(CD4+<200 cells/μl)、B(200≤CD4+≤349 cells/μl)、C(CD4+≥350 cells/μl)3组,考察3组间T细胞亚群的差别。结果:HIV-1前病毒DNA的log拷贝数与CD4+CD45RA+T细胞绝对计数呈负相关(r=-0.231,P<0.05),与CD4+CD45RA+T细胞相对计数呈明显负相关(r=-0.270,P<0.01);与CD38+T细胞绝对计数呈正相关(r=0.250,P<0.05);与HAART持续治疗时间无相关性。B、C组的CD3+T细胞绝对计数明显高于A组(P<0.01);C组的CD8+T细胞绝对计数高于B组的(P<0.05);B、C组的CD4+CD28+T细胞绝对计数和相对计数明显高于A组(P<0.01),C组的CD4+CD28+T细胞绝对计数高于B组(P<0.05);B、C组的CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞绝对计数明显高于A组(P<0.01),C组的CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞绝对计数高于B组(P<0.05),B、C组的CD4+CD45RO+T细胞相对计数高于A组(P<0.05);B、C组的CD8+CD38+T细胞绝对计数低于A组(P<0.05),B组的CD8+CD38+T细胞相对计数低于A组(P<0.05);C组的CD38+T细胞绝对计数高于A组(P<0.05)。A、B、C组的HIV-1前病毒DNA的log拷贝数分别为3.561±0.297 9,3.605±0.277 6,3.434±0.289 1(copies/ml),3组间无显著性差异(P>0.05)。结论:经过HAART治疗后HIV-1前病毒DNA可能处于稳定状态,HIV-1前病毒DNA拷贝数只是某些T细胞亚群数量改变的原因之一。

灯盏花素对血管性痴呆大鼠海马CA1区病理改变及Nrf2/HO-1通路的影响

目的探讨灯盏花素(Bre)对血管性痴呆(VD)大鼠海马CA1区病理学改变及核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(Nrf2/HO-1)通路的影响。方法将180只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、Bre低剂量组(1 mg/kg)、Bre中剂量组(2 mg/kg)、Bre高剂量组(4 mg/kg)和尼莫地平组(2 mg/kg),每组30只。采用双侧颈总动脉永久结扎法制备VD大鼠模型,造模后各组每日1次腹腔注射给药,疗程为14 d。通过Morris水迷宫实验测评各组大鼠学习记忆能力;苏木精-伊红(HE)染色法行海马CA1区病理学检查,透射电子显微镜观察海马CA1区神经元超微结构,脱氧核糖核苷酸末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法观察海马CA1区神经元凋亡状况;生化分析法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western Blotting)检测Nrf2、HO-1蛋白和mRNA表达。结果与模型组比较,Bre中剂量组、Bre高剂量组和NMP组大鼠逃逸潜伏期缩短、穿越平台次数增加(P<0.01);海马CA1区组织病理性形态结构病变、神经元超微结构病变及神经元凋亡状况均明显改善,凋亡指数(AI)降低(P<0.01);海马组织MDA含量降低且SOD、CAT活性升高(P<0.01),Nrf2、HO-1蛋白和mRNA表达均升高(P<0.01)。与NMP组比较,Bre高剂量组大鼠逃逸潜伏期缩短、穿越平台次数增加(P<0.05);AI显著降低(P<0.05);MDA含量降低且SOD活性升高(P<0.05);Nrf2、HO-1蛋白和mRNA表达均升高(P<0.01)。结论Bre对VD大鼠海马CA1区病理改变和学习记忆能力具有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路进而抑制氧化应激反应有关。

102例HIV-1感染者病毒株反转录酶基因多态性及耐药性变异研究

目的:目前中国未接受或已接受反转录酶抑制剂(RTI)治疗的HIV感染者的HIV反转录酶基因类型的数据较少。本研究探讨了HIV-1反转录酶的基因多态性,及在RTI选择性压力下出现的已知和未知变异位点。方法:分析研究21例未接受治疗及81例接受RTI治疗的HIV感染者的RT基因。大部分感染者(>80%)应用司他夫定(d4T)+地达诺新(ddI)+奈韦拉平(NVP)或d4T+拉米夫定(3TC)+依菲韦仑(EFV)三联HAART治疗方案。结果:在未接受治疗的患者中,发现了4个高度多态性位点(122、200、207和211)。在接受RTI治疗的患者中,发现了2种耐药相关变异(RAMs):①接受ddI+d4T+NVP治疗方案的患者中发现,K65R(9.8%)、L74V(7.4%)、M184V(7.4%)、Q151M(5%)和胸腺嘧啶类似物变异(TAMs)(9.3%),包括T215Y(5.5%);②接受d4T+3TC+EFV治疗方案的患者中发现,T215Y(23%)、M184V(20%)和TAMs(15.4%)。在所有病例中,非核苷反转录酶抑制剂(NNRTI)RAM的出现率很高(41.9%),而在142、221、224和228位点发现了4种可疑的新RAMs。结论:目前中国非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)耐药相关变异十分普遍,本研究描述了RTI选择性变异的基因模式,提出了新的一些变异与RTI治疗的相关性。

软脉胶囊对血管性痴呆大鼠脑组织ET-1、CGRP及海马CA1区n-NOS表达的影响

目的探讨软脉胶囊治疗血管性痴呆的机制。方法采用双侧颈总动脉结扎,制作慢性脑灌注不足动物模型,观察软脉胶囊对大鼠脑组织ET-1、CGRP及海马CA1区n-NOS表达的影响。结果软脉胶囊可降低大鼠脑组织中ET-1,升高大鼠脑组织中CGRP,同时可明显提高大鼠海马CA1区n-NOS的表达。结论软脉胶囊对慢性脑灌注不足大鼠脑组织具有保护作用。