喘可治抑制灭活HIV-1颗粒诱导人CD4+T细胞凋亡机制研究

目的通过深入研究HIVp对CD4+T细胞凋亡的影响,以探讨HIV病中CD4+T细胞丢失的可能机制以及喘可治(CKZ)对CD4+T细胞凋亡的调控作用。方法 AT-2灭活HIV-1ⅢB型病毒颗粒,ELISA法检测p24抗原的含量;然后将HIVp加入到PBMCs中,使p24抗原终浓度为1 ng.mL-1;在相应的组中加入喘可治,使其终浓度为40μL.mL-1(v/v)。48 h后,运用荧光标记的An-nexin V染色技术结合流式细胞术评价CD4+T细胞的凋亡率;运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测CD4+T细胞CD95和DR5的表达;运用胞内免疫荧光抗体染色技术和分子探针染色技术结合流式细胞术检测CD4+T细胞Apo2.7和线粒体内膜膜电势(△ψm)的水平。结果与对照组相比,HIVp可以引起明显的CD4+T细胞凋亡(P<0.01),而喘可治能够有效抑制HIVp引发的CD4+T细胞凋亡(P<0.01)。结论 HIVp通过外源性凋亡途径和内源性凋亡途径删除CD4+T细胞,从而导致免疫缺陷;喘可治能够保护CD4+T细胞而有望开发成为艾滋病治疗的辅助药物。

灭活HIV-1颗粒对人CD4^+T细胞活化标记分子CD25、CD71和HLA-DR表达的作用

目的通过深入研究AT-2灭活HIV-1颗粒对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PB-MCs)来源的CD4+T细胞中期活化标记分子(CD25)和晚期活化标记分子(CD71和HLA-DR)的作用,进一步探讨HIV病中普遍性的免疫过度活化的病理机制。方法AT-2灭活HIV-1IIIB型病毒颗粒,ELISA法检测p24抗原的含量,调整p24抗原含量为50 ng/mL;然后按照p24抗原量为0.1 ng/mL(记作HIV-1 1/500组)、1 ng/mL(记作HIV-1 1/50组)和10 ng/mL(记作HIV-11/5组)的浓度加入到PBMCs中,以植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)组为阳性对照,24 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中CD4+T细胞CD25的表达百分率;48 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中CD4+T细胞CD71和HLA-DR的表达百分率。结果24 h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD25的表达百分率为(9.46±2.12)%,PHA组为(79.45±3.72)%,HIV-1 1/500组为(14.89±2.53)%,HIV-1 1/50组为(19.04±2.41)%,HIV-11/5组为(23.50±2.21)%;48 h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD71的表达百分率为(3.39±1.40)%,PHA组为(75.52±5.14)%,HIV-1 1/500组为(11.70±2.34)%,HIV-1 1/50组为(18.45±3.19)%,HIV-1 1/5组为(22.59±2.96)%;CD4+T细胞HLA-DR的表达百分率为(8.11±2.13)%,PHA组为(66.48±6.81)%,HIV-1 1/500组为(14.52±1.68)%,HIV-1 1/50组为(19.94±2.38)%,HIV-1 1/5组为(23.74±2.30)%。结论AT-2灭活的HIV-1IIIB颗粒能够明显的诱导PBMCs中CD4+T细胞活化,并可能引起CD4+T细胞增殖,从而为HIV-1感染提供更多的"燃料细胞"。

玉溪市2006-2011年新报告HIV-1感染者中新近感染比例及其影响因素

目的探究云南省玉溪市2006-2011年新报告HIV-1感染者中新近感染比例及其影响因素。方法对玉溪市2006-2011年新报告HIV-1阳性的血清采用微量Hl V-1抗体明胶颗粒凝聚法（ML-PA）方法检测以确定新近感染者,并分析相关的影响因素。结果 2006-2011年玉溪市累计新报告HIV感染者2 018例,其中64例（3.17%）为新近感染者,各年新近感染比例依次为6.91%,1.90%,2.83%,2.66%,2.40%和3.48%。Logistic多因素回归分析显示,在控制了各变量间的混杂作用影响后,女性新近感染者高于男性,16~35岁青壮年高于其他年龄组,未婚及同居者高于已婚者,大专及以上文化程度高于其他文化程度,娱乐场所服务人员及驾驶员高于其他职业,男男同性性传播新近感染比例较高。结论 2006-2011年云南省玉溪市新报告HIV-1感染者中新近感染比例保持较低水平,新近感染被多种因素影响。

两种检测技术对比1990-2011年玉溪市暗娼HIV-1感染态势

目的分析1990-2011年玉溪市暗娼（FSWs）人群HIV-1感染态势，旨在合理估算HIV-1在玉溪市暗娼中的流行态势。方法时1990-2011年玉溪市相关场所的暗娼用HIV-1BED捕获酶免疫测定法（BED-CEIA）和微量HIV-1抗体明胶颗粒凝聚法（ML-PA）进行HIV-1新发感染率检测，并采用ML-PA和BED-CEIA对HIV-1新近感染态势进行估算。结果共计纳入样本20288份，检出HIV-1阳性214份，1990-1996年感染率均为0，1997-2011年为0．61％-1．40％，流行趋势差异有统计学意义（P〈0．05）。HIV-1新发感染率：ML-PA法2006-2011年为0．00～2．31／1000人年，BED-CEIA法2005-2011年为0．00～5．89／1000人年，流行趋势差异无统计学意义（P〉0．05）。结论玉溪市暗娼人群艾滋病流行处于较低水平，且呈下降趋势，两种检测方法的结论-致，但缺乏-致性。

作用于mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G的HIV-1逆转录抑制剂研究进展

mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(A3G)属于固有免疫家族成员,具有胞嘧啶脱氨酶活性,能通过与核衣壳蛋白基因(Gag)或病毒RNA的核衣壳(NC)域的相互作用包装入子代病毒。在人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)逆转录过程中,A3G使胞嘧啶脱氨基,在DNA负链中引入尿嘧啶,导致病毒的过度突变,发挥抗病毒作用。除此之外,A3G通过包装成病毒粒子发挥抗HIV-1的作用。HIV-1的辅助调节蛋白病毒感染因子(Vif)可以通过泛素-蛋白酶体系统来拮抗A3G的抑制HIV-1的作用。因此,上调A3G的表达或是抑制Vif对A3G的拮抗作用可能成为HIV-1感染治疗的新有效方法。

CNP2线粒体定位信号以及磷酸酯酶活性对抑制HIV-1 Gag蛋白组装作用的影响

目的研究CNP2在线粒体上的定位以及磷酸酯酶活性是否参与抑制HIV-1病毒颗粒组装。方法采用RT-PCR扩增野生型CNP2编码区,插入到真核表达载体pc DNA5,构建融合蛋白FlagCNP2的表达质粒pc DNA5-Flag-CNP2。应用融合PCR诱导突变法构建CNP1及CNP2突变表达载体。CNP表达载体分别与HIV-1假病毒包装质粒p LP1、p LP2、p LP/VSVG、p Lenti6-EGFP共同瞬时转染293T细胞。集落形成实验检测上清病毒滴度,Western blot检测细胞中Gag蛋白p55、p24以及细胞培养上清中p24的表达情况。结果与对照组比较,CNP2、CNP1、CNP2-S9/22A可以显著抑制细胞中病毒的释放,培养上清中病毒滴度显著降低(滴度分别为5.66、4.20、5.75、6.63 Log10IU/ml,NC组为7.65 Log10 IU/ml;t=58.23、17.24、12.77、6.131,P=0.0035、0.0066、0.0004、0.0039)。CNP1抑制HIV-1病毒颗粒组装作用更强,Western blot检测培养上清中病毒蛋白完全p24消失。磷酸酯酶结构域(2HM)突变后CNP2抑制HIV-1病毒颗粒组装的作用显著降低。结论 CNP2抑制HIV-1病毒颗粒组装需要磷酸酯酶结构域(2HM)的参与,CNP2的线粒体定位信号可能会影响其抑制HIV病毒颗粒组装的作用。