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自噬对HIV-1gp120V3环介导的海马神经元L型钙离子通道电流的影响
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作者 汪军兵 林丽清 +4 位作者 江明亮 陆大祥 陈桂玲 行妍妍 董军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1929-1933,共5页
目的:观察哺乳动物雷帕雷素靶蛋白(m TOR)依赖性自噬信号转导通路对HIV-1 gp120V3环介导的海马神经元L-型钙离子通道电流的影响。方法:取出生1 d内的乳鼠海马神经元原代培养7 d后用于实验。实验分为2个平行实验组,即空白对照组、gp120V... 目的:观察哺乳动物雷帕雷素靶蛋白(m TOR)依赖性自噬信号转导通路对HIV-1 gp120V3环介导的海马神经元L-型钙离子通道电流的影响。方法:取出生1 d内的乳鼠海马神经元原代培养7 d后用于实验。实验分为2个平行实验组,即空白对照组、gp120V3组、自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组和gp120V3+3-MA组;空白对照组、gp120V3组、自噬激动剂雷帕雷素(rapamycin)组和gp120V3+rapamycin组。以膜片钳技术记录海马神经元的L型钙离子通道电流。结果:gp120V3组及3-MA组与空白对照组比较,L型钙离子通道电流密度增大(P<0.05);gp120V3+3-MA组与gp120V3组比较,L-型钙离子通道电流密度增大(P<0.05);rapamycin组与空白对照组比较,L型钙离子通道电流密度减小(P<0.05);gp120V3+rapamycin组与gp120V3组比较,L型钙离子通道电流密度减小(P<0.05)。结论:从电生理角度证明,自噬可能参与了HIV-1gp120V3环介导的海马神经元L型钙离子通道电流的改变。 展开更多
关键词 自噬 hiv-1 gp120V3 海马神经元 L型钙离子通道
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抗HIV-1gp120单克隆抗体的制备及其初步应用 被引量:3
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作者 安庆军 王润田 +3 位作者 张坤娟 郝林娟 张红中 王蕙芬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期743-744,共2页
目的: 制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体(mAb),并建立一种可用于检测gp120的ELISA法.方法: 采用基因工程抗原HIV-1 gp120免疫BALB/c小鼠, 通过B细胞杂交瘤技术制备抗HIV-1 gp120的mAb.用ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、效价及特异性.用饱和硫酸铵(... 目的: 制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体(mAb),并建立一种可用于检测gp120的ELISA法.方法: 采用基因工程抗原HIV-1 gp120免疫BALB/c小鼠, 通过B细胞杂交瘤技术制备抗HIV-1 gp120的mAb.用ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、效价及特异性.用饱和硫酸铵(SAS)纯化mAb,并用HRP标记后建立双mAb夹心ELISA法.结果: 筛选出10株稳定分泌抗HIV-1 gp120 mAb的杂交瘤细胞株,9株为IgG,其中4株的腹水效价为32×10-4~256×10-4.所得mAb与HIV-1 gp41、HIV-1 p24及HIV-2 gp36 Ag均无交叉反应,仅与HIV-1 gp120产生特异性反应.用 mAb 6H9和9H12建立了双夹心ELISA法, 检测gp120抗原的灵敏度是10 μg/L.结论: 获得10株特异性强、效价高的抗HIV-1 gp120的mAb, 并建立了灵敏度良好的双mAb夹心ELISA法. 展开更多
关键词 hiv-1 gp120 单克隆抗体 杂交瘤
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作用于HIV-1gp120小分子HIV进入抑制剂NC-2的虚拟筛选及其作用机制 被引量:1
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作者 段恒 王玉芹 +6 位作者 宋德寿 陈之朋 裘佳寅 陆路 姜世勃 刘叔文 谭穗懿 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期826-831,共6页
目的基于中和抗体VRC01与HIV-1 gp120的结合模式,利用计算机虚拟筛选,从IBS天然产物数据库中筛选靶向HIV-1gp120的小分子HIV-1进入抑制剂,并对其抗病毒活性和机制进行研究。方法运用MM-PBSA方法计算候选化合物与HIV-1gp120结合后自由能... 目的基于中和抗体VRC01与HIV-1 gp120的结合模式,利用计算机虚拟筛选,从IBS天然产物数据库中筛选靶向HIV-1gp120的小分子HIV-1进入抑制剂,并对其抗病毒活性和机制进行研究。方法运用MM-PBSA方法计算候选化合物与HIV-1gp120结合后自由能的变化;利用HIV-1假病毒、活病毒技术及细胞融合实验,检测化合物抑制HIV-1感染的活性;XTT比色法检测化合物对细胞的毒性;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)研究化合物体外抗病毒活性的机理。结果利用计算机从40 000个化合物中虚拟筛选出19个与gp120结合后自由能降低较大的小分子化合物,其中NC-2具有抑制HIV-1感染和细胞融合的活性,其抑制HIV-1实验株IIIB的IC50是1.95±0.44μmol/L,抑制HIV-1JRFL假病毒的IC50是10.58±0.13μmol/L。酶联免疫吸附法结果表明NC-2体外能抑制HIV-1 gp120与CD4的结合,但不抑制HIV-1 gp41六螺旋的形成。结论该计算机虚拟筛选的方法可为开发作用于HIV-1 gp120的小分子进入抑制剂提供参考。同时,通过计算机辅助设计加病毒活性筛选的方法,得到一个新颖结构的HIV进入抑制剂NC-2。 展开更多
关键词 hiv-1进入抑制剂 gp120 VRC01 计算机辅助设计 药物筛选
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α7nAChR基因敲除HIV-1gp120转基因小鼠模型的构建
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作者 胡彤彤 龚泽龙 +5 位作者 万宇 李煜彬 高雪锋 伦静娴 黄胜和 曹虹 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1184-1191,共8页
目的通过构建双基因编辑小鼠模型(α7R-/-/gp120+),为探索α7乙酰胆碱受体(α7 nAChR)介导gp120中枢神经毒性的作用和机制提供研究基础。方法α7 nAChR基因敲除小鼠(α7R-/-)与HIV-1 gp120转基因小鼠(gp120+)杂交(F0),从产生的F1小鼠中... 目的通过构建双基因编辑小鼠模型(α7R-/-/gp120+),为探索α7乙酰胆碱受体(α7 nAChR)介导gp120中枢神经毒性的作用和机制提供研究基础。方法α7 nAChR基因敲除小鼠(α7R-/-)与HIV-1 gp120转基因小鼠(gp120+)杂交(F0),从产生的F1小鼠中,选取基因型为α7R+/-/gp120+的小鼠进一步交配,得到F2小鼠。PCR法鉴定和筛选F3小鼠基因型,免疫组化分析双转基因动物模型蛋白表达;体外实验使用gp120蛋白和α7 nAChR抑制剂处理小胶质细胞,ELISA检测各组IL-1β与TNF-α表达情况。结果F3小鼠的PCR结果符合预期,其中有2只双基因编辑成功的小鼠。免疫组化结果显示双基因编辑小鼠(α7R-/-/gp120+)的脑组织缺乏α7 nAChR的同时高表达gp120蛋白。体外实验结果表明Gp120可促进小胶质细胞分泌IL-1β与TNF-α,而抑制α7nAChR后IL-1β与TNF-α表达明显降低(P<0.001)。结论α7R-/-/gp120+双基因修饰小鼠成功构建,且具有稳定遗传的特点,可为后续探索α7 nAChR介导gp120中枢神经毒性的作用和机制提供重要的动物模型。 展开更多
关键词 Α7烟碱型乙酰胆碱受体 hiv-1 gp120 基因敲除 转基因 小鼠
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含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒的构建及鉴定
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作者 丁莉 谢知兵 潘一峰 《国际医药卫生导报》 2006年第21期13-16,共4页
目的构建含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒疫苗,并初步评价其免疫效果。方法将HIV-1gp120基因抗原决定簇插入到脊髓灰质炎病毒表达载体PSVA14中,构建含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒,通过脂质体介导法... 目的构建含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒疫苗,并初步评价其免疫效果。方法将HIV-1gp120基因抗原决定簇插入到脊髓灰质炎病毒表达载体PSVA14中,构建含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒,通过脂质体介导法将重组脊髓灰质炎病毒转染入Hela细胞,通过PCR,酶切鉴定等方法对重组脊髓灰质炎病毒载体进行了表达鉴定,并通过氯仿-PEG/NaCl-氯仿三步法纯化重组脊髓灰质炎病毒,利用免疫酶法,Westernblot方法对重组脊髓灰质炎病毒作了初步的免疫效果的研究。结果构建的重组脊髓灰质炎病毒在Hela细胞内可以正确的表达gp120基因,并能感染293细胞而不产生细胞病变,并能随293细胞的传代被复制克隆。结论重组脊髓灰质炎病毒能正确的表达gp120基因,并能感染人正常细胞,初步证实了其生物安全性。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120 重组病毒疫苗
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Curcumin improves synaptic plasticity impairment induced by HIV-1gp120 V3 loop 被引量:1
6
作者 Ling-ling Shen Ming-liang Jiang +9 位作者 Si-si Liu Min-chun Cai Zhong-qiu Hong Li-qing Lin Yan-yan Xing Gui-lin Chen Rui Pan Li-juan Yang Ying Xu Jun Dong 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2015年第6期925-931,共7页
Curcumin has been shown to significantly improve spatial memory impairment induced by HIV-1 gp 120 V3 in rats, but the electrophysiological mechanism remains unknown. Using extracellular microelectrode recording techn... Curcumin has been shown to significantly improve spatial memory impairment induced by HIV-1 gp 120 V3 in rats, but the electrophysiological mechanism remains unknown. Using extracellular microelectrode recording techniques, this study confirmed that the gp120 V3 loop could suppress long-term potentiation in the rat hippocampal CA1 region and synaptic plasticity, and that curcumin could antagonize these inhibitory effects. Using a Fura-2/AM calcium ion probe, we found that curcumin resisted the effects of the gp120 V3 loop on hippocampal synaptosomes and decreased Ca2+ concentration in synaptosomes. This effect of curcumin was identical to nimodipine, suggesting that curcumin improved the inhibitory effects of gpl20 on synaptic plasticity, ameliorated damage caused to the central nervous system, and might be a potential neuroprotective drug. 展开更多
关键词 nerve regeneration CURCUMIN neurons hiv-1 gp l20 V3 loop plasticity hiv-associatedneurocognitive disorders output^input curve long-term potentiation excitatory postsynaptic potential paired-pulse facilitation Cd+ SYNAPTOSOME NSFC grants neural regeneration
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抗HIV-1 gp120单链抗体基因的克隆及序列测定 被引量:1
7
作者 王宏伟 金宁一 +2 位作者 许崇波 赵宝华 殷震 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期468-468,470,共2页
关键词 艾滋病 hiv-1gp120 单链抗体 克隆
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HIV-1B亚型gp120基因密码子优化前后免疫原性的比较 被引量:8
8
作者 余双庆 冯霞 +3 位作者 陈国敏 龚非 周玲 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期214-217,共4页
对HIV 1B亚型gp120基因按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Westernblot方法比较其体外表达量。将优化前的野生型gp120基因和改造后的modgp120基因插入重组腺伴随病毒载体,构建了重组病毒rAAV wtgp120和rAAV modgp120,比较两... 对HIV 1B亚型gp120基因按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Westernblot方法比较其体外表达量。将优化前的野生型gp120基因和改造后的modgp120基因插入重组腺伴随病毒载体,构建了重组病毒rAAV wtgp120和rAAV modgp120,比较两者免疫Balb/C小鼠后的抗体和CTL应答。Westernblot检测结果显示:优化后基因的体外表达量明显高于野生型基因,rAAV modgp120与rAAV wtgp120相比可更好地诱导Balb/C小鼠的CTL应答,但检测不到明显的抗体反应。由此得出结论,优化后gp120基因的体外表达量明显高于野生型基因,并且可以诱导更强的特异性CTL应答,但检测不到gp120抗体。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒I型 hiv-1 gp120 基因 密码子 免疫原性 重组腺伴随病毒
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HIV-1 GP120主要抗原性片段的制备及其在HIV诊断中的应用 被引量:6
9
作者 郝彦玲 张梦华 +6 位作者 黄云坚 袁国亮 陈佩 朱旭辉 傅晶晶 刘勇 邵一鸣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期64-67,共4页
目的研制HIV中国流行株RL42GP120主要抗原性片段,以便进一步开发HIV抗体检测试剂。方法克隆RL42毒株GP120蛋白C-端250个氨基酸的编码序列,克隆入大肠杆菌表达载体pBV220进行表达。通过包涵体处理和离子交换层析纯化目的蛋白。将纯化后... 目的研制HIV中国流行株RL42GP120主要抗原性片段,以便进一步开发HIV抗体检测试剂。方法克隆RL42毒株GP120蛋白C-端250个氨基酸的编码序列,克隆入大肠杆菌表达载体pBV220进行表达。通过包涵体处理和离子交换层析纯化目的蛋白。将纯化后的蛋白用狭缝电转技术转印硝酸纤维素膜,利用HIV参考品血清检测其灵敏度和特异性。结果目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的10%左右。纯化后其纯度高于95%,HIV参考品血清检测显示出良好的灵敏度和特异性,检测8份阳性临床标本无一漏检,而7份阴性临床标本无交叉反应。结论已研制出具有良好灵敏度和特异性的HIV-1GP120主要抗原性片段。为开发HIV抗体检测试剂创造了条件。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120 主要抗原性片段 诊断
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中国流行株HIV-1gag-gp120与IL-2/IL-6共表达核酸疫苗质粒的构建和实验免疫研究 被引量:8
10
作者 金宁一 罗坤 +5 位作者 郭焱 秦云龙 王宏伟 方厚华 安汝国 殷震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期1-3,共3页
以pcDNA3.1(+ )为载体 ,构建了含中国流行株HIV_1gag_gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ;并以pIRES 1neo为载体 ,构建了gag_gp12 0与IL_2 /IL_6共表达的 2种核酸疫苗质粒。将核酸疫苗质粒在体外转染BHK_2 1细胞 ,ELISA方法检测到 3种核酸... 以pcDNA3.1(+ )为载体 ,构建了含中国流行株HIV_1gag_gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ;并以pIRES 1neo为载体 ,构建了gag_gp12 0与IL_2 /IL_6共表达的 2种核酸疫苗质粒。将核酸疫苗质粒在体外转染BHK_2 1细胞 ,ELISA方法检测到 3种核酸疫苗质粒均表达了目的HIV_1结构蛋白。将核酸疫苗质粒免疫小鼠 ,免疫学指标检测结果表明 ,在本实验条件下 ,未能检测到含有gag_gp12 0的核酸疫苗质粒免疫鼠的细胞免疫和体液免疫功能的明显改变 ;而与IL_2 /IL_6共表达的 2种核酸疫苗质粒使免疫鼠CD4 +、CD8+T细胞数量明显升高 ,ConA和LPS诱导的细胞增殖能力显著增强 ,CTL活性明显提高 。 展开更多
关键词 hiv-1gAg-gp120 IL-2 IL-6 共表达 核酸疫苗
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IL-18和HIV-1gag-gp120嵌合基因DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答 被引量:7
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作者 江文正 金宁一 +3 位作者 李子健 张立树 王宏 金洪涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期433-435,共3页
目的 :探讨IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法 :构建含IL 18的真核表达质粒pVAXIL18,将他与表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌注免疫BALB/c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀... 目的 :探讨IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法 :构建含IL 18的真核表达质粒pVAXIL18,将他与表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌注免疫BALB/c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果 :联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平均显著高于单独免疫组 (P <0 .0 5 ) ,空白质粒对照组 (P <0 .0 1)和PBS对照组 (P <0 .0 1)。结论 :IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫 ,且IL 18发挥了免疫佐剂的作用。 展开更多
关键词 hiv-1 gag-gp120 IL-18 DNA疫苗
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HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:4
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作者 楚鹰 宫祥丹 +5 位作者 高建伟 苏艾荣 陈德燕 宋红勇 吴喜林 吴稚伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期540-545,共6页
目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠... 目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定。结果制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1∶81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型。Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白。结论成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒1型(hiv-1) gp120可变区1/2 单克隆抗体 真核蛋白表达 疫苗
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中国株HIV-1 gp120核酸疫苗的实验免疫研究 被引量:3
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作者 江文正 金宁一 +2 位作者 李子健 张立树 张洪勇 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期24-26,共3页
目的 探讨表达中国株HIV 1gp12 0基因的核酸疫苗在小鼠体内的免疫反应。方法 将表达HIV 1gp12 0的核酸疫苗质粒pVAXP经肌肉注射免疫Balb c小鼠 ,检测免疫小鼠脾CD4 +、CD8+T细胞亚群的数量 ,脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果... 目的 探讨表达中国株HIV 1gp12 0基因的核酸疫苗在小鼠体内的免疫反应。方法 将表达HIV 1gp12 0的核酸疫苗质粒pVAXP经肌肉注射免疫Balb c小鼠 ,检测免疫小鼠脾CD4 +、CD8+T细胞亚群的数量 ,脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果 重组质粒pVAXP免疫组小鼠脾CD4 +、CD8+T细胞亚群的数值均比对照组高 (P <0 .0 5 ) ;免疫组脾特异性CTL杀伤活性与对照组相比差异极显著 (P <0 .0 1) ;血清抗体滴度显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 表达HIV 1gp12 0基因的核酸疫苗质粒pVAXP能诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫。 展开更多
关键词 hiv-1 g-p120 核酸疫苗 免疫
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HIV-1膜蛋白基因gp120和gp41的合成及在毕赤酵母中的表达 被引量:3
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作者 洪国强 胡波 李朝霞 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期198-200,共3页
目的合成适合酵母表达的HIV-1膜蛋白gp120和gp41基因,在毕赤酵母中高效表达分泌型重组HIV-1 gp120和gp41抗原。方法选用酵母偏爱的同义密码子替换野生型gp120和gp41基因的酵母稀有密码子,采取基因搭桥法及聚合酶链反应(PCR),合成HIV-1 g... 目的合成适合酵母表达的HIV-1膜蛋白gp120和gp41基因,在毕赤酵母中高效表达分泌型重组HIV-1 gp120和gp41抗原。方法选用酵母偏爱的同义密码子替换野生型gp120和gp41基因的酵母稀有密码子,采取基因搭桥法及聚合酶链反应(PCR),合成HIV-1 gp120和gp41基因,构建分泌型重组质粒并转化毕赤酵母菌株GS115,经甲醇诱导表达HIV-1外膜糖蛋白gp120和gp41。结果DNA测序证实合成的HIV-1 gp120和gp41基因正确克隆到表达载体中;聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹显示gp120和gp41在毕赤酵母中高效分泌表达。结论gp120和gp41合成基因在毕赤酵母表达系统高效分泌表达。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120 gp41 合成基因 毕赤酵母
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共表达HIV-1中国流行株gp120与IL-18重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性观察 被引量:2
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作者 江文正 金宁一 +2 位作者 李子健 张立树 韩文瑜 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期337-341,共5页
为筛选我国的HIV_1疫苗候选株 ,以鸡痘病毒 2 82E4中国疫苗株为载体 ,构建了共表达中国流行株HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18的重组鸡痘病毒 ,并将该重组鸡痘病毒免疫BALB c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果显示... 为筛选我国的HIV_1疫苗候选株 ,以鸡痘病毒 2 82E4中国疫苗株为载体 ,构建了共表达中国流行株HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18的重组鸡痘病毒 ,并将该重组鸡痘病毒免疫BALB c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果显示 ,HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18不但可在重组鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞中表达 ,而且可在重组鸡痘病毒感染的哺乳动物细胞中表达。重组病毒具有良好的免疫原性 ,可诱导小鼠产生特异性抗体和脾特异性CTL反应 ,且IL_18发挥了免疫佐剂的作用。本研究结果为制备安全、有效的HIV_1基因工程活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120 白细胞介素18 鸡痘病毒 抗体 细胞毒T淋巴细胞
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抗HIV-1 gp120单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控型表达载体构建及表达 被引量:2
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作者 王宏 金宁一 +4 位作者 金洪涛 张立树 江文正 徐一鸣 连海 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第11期38-41,共4页
人工合成了能广泛识别HIV—1 gp120的单链抗体(SeFv120)基因和金黄色葡萄菌外毒素A(SEA)基因,将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT,并对两基因进行密码子优化。构建原核温控型表达质粒pBV—120和pBV—S... 人工合成了能广泛识别HIV—1 gp120的单链抗体(SeFv120)基因和金黄色葡萄菌外毒素A(SEA)基因,将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT,并对两基因进行密码子优化。构建原核温控型表达质粒pBV—120和pBV—SL120,经条件优化,pBV—120和pBV—SL120分别在E.coli BL21(DE3)plys中44℃诱导6h、42℃诱导7h获得最佳表达,表达量分别占菌体总蛋白的27.673%和32.519%。目的蛋白经包涵体洗脱、分子筛层析折叠复性后可与HIV—1抗原条发生良好的结合反应。 展开更多
关键词 gp120 原核 单链抗体 HIV—1 hiv-1 基因 BV 密码子 表达载体构建 融合蛋白
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表达中国流行株HIV-1 gp120外膜蛋白靶细胞模型的建立 被引量:3
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作者 李昌 金宁一 +5 位作者 胡宁宁 刘玉生 佟敬山 李霄 金洪涛 于芳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期12-16,共5页
利用pDispaly真核表达载体构建了用于表达中国流行株HIV-1gp120的真核表达质粒pD-120,通过脂质体转染法将其导入人宫颈癌细胞(HeLa),经G418反复加压筛选,直到细胞不再死亡为止,8代后获得稳定表达中国流行株HIV-1gp120蛋白的靶细胞复制模... 利用pDispaly真核表达载体构建了用于表达中国流行株HIV-1gp120的真核表达质粒pD-120,通过脂质体转染法将其导入人宫颈癌细胞(HeLa),经G418反复加压筛选,直到细胞不再死亡为止,8代后获得稳定表达中国流行株HIV-1gp120蛋白的靶细胞复制模型HeLa-gp,SDS-PAGE,蛋白印迹与间接免疫荧光分析表明,重组蛋白得到很好表达,并具有良好生物活性,为抗AIDS/HIV治疗用基因工程制剂或靶向药物的活性检测奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 HIV.1 gp120 HeLa细胞模型建立
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HIV-1表面糖蛋白gp120 DNA疫苗质粒的构建与表达 被引量:1
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作者 江文正 金宁一 +3 位作者 李子健 金洪涛 王宏 韩文瑜 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第5期257-259,共3页
目的 构建含HIV-1表面糖蛋白基因的真核表达质粒,并在Hela细胞内表达。方法 在核酸疫苗载体质粒 pVAX1中插入gp120基因,构建真核表达质粒pVAXGP。在体外用脂质体法将重组质粒转染Hela细胞,并用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验和Dot-ELIS... 目的 构建含HIV-1表面糖蛋白基因的真核表达质粒,并在Hela细胞内表达。方法 在核酸疫苗载体质粒 pVAX1中插入gp120基因,构建真核表达质粒pVAXGP。在体外用脂质体法将重组质粒转染Hela细胞,并用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验和Dot-ELISA对表达产物进行检测。结果 间接免疫荧光试验结果显示,转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光。免疫印迹试验和Dot-ELISA结果均显示,重组质粒转染细胞的裂解物中存在表达的gp120蛋白。结论 已成功地构建了真核表达质粒,且表达的蛋白具有良好的反应原性和特异性。 展开更多
关键词 hiv-1 表面糖蛋白gp120 DNA疫苗 质粒 构建 表达 艾滋病
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共表达HIV-1 gp120与IFN-α重组鸡痘病毒诱导特异性CTL的初步研究 被引量:1
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作者 江文正 金宁一 +2 位作者 李子健 张立树 金洪涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期254-256,共3页
目的:探讨共表达HIV -1gp12 0与IFN- α重组鸡痘病毒诱导小鼠产生特异性的CTL杀伤活性。方法:将重组鸡痘病毒经肌肉注射免疫BALB c小鼠后,制备小鼠脾淋巴细胞悬液。以免疫小鼠的脾淋巴细胞为效应细胞,以表达HIV- 1结构蛋白的P815细胞为... 目的:探讨共表达HIV -1gp12 0与IFN- α重组鸡痘病毒诱导小鼠产生特异性的CTL杀伤活性。方法:将重组鸡痘病毒经肌肉注射免疫BALB c小鼠后,制备小鼠脾淋巴细胞悬液。以免疫小鼠的脾淋巴细胞为效应细胞,以表达HIV- 1结构蛋白的P815细胞为靶细胞,用乳酸脱氢酶释放法测定免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性。结果:重组病毒可有效地诱导特异性CTL的产生,且重组病毒免疫组小鼠脾特异性CTL对靶细胞的杀伤活性显著高于FPV对照组(P <0 .0 1)和PBS对照组(P <0. 0 1)。结论:共表达HIV- 1gp12 0和IFN -α的重组鸡痘病毒可激发强烈的细胞免疫,可作为我国HIV- 1疫苗候选株。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120 重组鸡痘病毒 细胞毒性T淋巴细胞
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抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:1
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作者 张永臣 文剑 +1 位作者 张亮 赵磊 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期26-28,31,共4页
目的制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体,鉴定其特性,为进一步研制HIV治疗性抗体提供贮备。方法将HIV-1 gp120基因片段连接到经酶切的原核表达载体PEGX-4T-2中,利用大肠杆菌XL1-blue表达GST-HIV蛋白。表达的蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫... 目的制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体,鉴定其特性,为进一步研制HIV治疗性抗体提供贮备。方法将HIV-1 gp120基因片段连接到经酶切的原核表达载体PEGX-4T-2中,利用大肠杆菌XL1-blue表达GST-HIV蛋白。表达的蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆。重组免疫印迹分析(RIBA)和Western blot检测抗体特异性。结果构建的重组质粒的外源基因片段经测序与预期HIV-1 gp120抗原基因片段大小一致。纯化蛋白SDS-PAGE可见1条相对分子质量(Mr)32 000的表达蛋白条带。获得6株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清效价为10-3,小鼠腹水效价为10-5,抗体亚型均为IgG1。RIBA结果显示6株单抗皆只与HIV-1 gp120抗原反应。Western blot结果显示在Mr32 000处可见1条单一目的条带。结论获得6株稳定分泌抗HIV-1 gp120单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研制抗HIV治疗性抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120抗原 原核表达 单克隆抗体 杂交瘤细胞
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