基于癌症基因图谱数据库的肺腺癌HJURP表达与预后分析

目的通过分析肺腺癌细胞HJURP的表达水平与临床病理特征及预后的关系,探讨其在肺腺癌发生发展中的潜在作用机制。方法从TCGA中下载肺腺癌HJURP基因表达文件与临床信息文件。比较肿瘤样本与癌旁正常样本HJURP的表达差异。根据HJURP表达中位值分为高、低表达组,利用KS检验或Wilcox检验分析HJURP表达水平与临床病理特征的相关性,采用Kaplan-Meier模型进行生存分析,COX风险回归模型用于临床预后因素分析。结果HJURP在肺腺癌组织中较癌旁组织显著高表达,其表达水平与年龄、性别、吸烟程度、是否淋巴结转移以及分期等具有相关性。生存分析显示HJURP高表达肺腺癌患者生存预后更差,单因素及多因素结果均提示HJURP可以作为独立预后因素预测患者临床预后。结论HJURP可作为潜在的生物标记物预测肺腺癌患者预后。

FOXM1通过调控HJURP表达促进肺腺癌细胞增殖

目的探讨Holliday交叉识别蛋白(Holliday junction recognition protein,HJURP)在肺癌组织中的表达与肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)患者预后的关系及其对肺腺癌细胞(H1299及SPC-A1)增殖的影响机制。方法收集本中心胸外科2019年2月至2020年5月17例非小细胞肺癌患者经手术切除的肿瘤组织样本和正常组织样本,采用RT-qPCR和Western blot分析HJURP在肿瘤组织和正常组织中的表达情况。通过分析癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)和Kaplan-Meier Plotter(KM-plot)数据库,验证HJURP在肿瘤组织和正常组织的表达情况及其与肺腺癌患者预后的关系。采用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2-deoxyuridine,EdU)摄取实验检测HJURP敲低对肺腺癌细胞系增殖的影响。采用裸鼠皮下成瘤实验,检测HJURP敲低对肺腺癌细胞系体内生长的影响。采用Pearson相关性分析收集样本与公共数据库HJURP与叉头盒基因M1(forkhead box protein M1,FOXM1)表达的相关性。通过染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验分析FOXM1对HJURP的转录调控作用。采用双荧光素酶报告基因实验分析FOXM1与HJURP启动子的结合情况。采用SiRNA敲低FOXM1细胞系,检测其对HJURP表达的影响。结果RT-qPCR与Western blot实验均证实,肺腺癌肿瘤组织中HJURP的表达较正常组织显著升高(P<0.05)。基于TCGA及KM-Plot公共数据库肺腺癌患者队列的生存分析显示,肿瘤组织中HJURP高表达与患者不良预后密切相关(P<0.05)。HJURP敲低后显著抑制H1299(P<0.05)及SPC-A1(P<0.05)的体外增殖能力。HJURP与FOXM1的表达呈正相关(本中心样本:r=0.5813,P<0.05;TCGA数据库:r=0.8776,P<0.05;CCLE数据库:r=0.4551,P<0.05)。ChIP实验与双荧光素酶报告基因实验均显示,FOXM1能够与HJURP启动子区域结合。敲低FOXM1后,HJURP表达水平显著下降(P<0.05)。结论HJURP可调控肺腺癌肿瘤细胞增殖,HJURP高表达与肺腺癌患者较差的预后密切相关。FOXM1是调控HJURP的上游主要转录因子。

基于Oncomine荟萃分析HJURP基因在头颈部癌中的表达和预后研究

目的:阐述HJURP基因(holliday junction recognition protein)在头颈部癌及正常组织中的表达及对预后影响。方法:挖掘Oncomine数据库中头颈部癌HJURP基因相关数据,并结合ArrayExpress中芯片数据集进行生存分析。结果:Oncomine数据库中,针对不同癌症,HJURP基因癌组织/正常组织表达量分析共有383个结果,其中在癌组织中显著高表达的有125个结果,低表达的仅18个结果。有13个数据集共27个分析涉及HJURP在头颈部癌组织/正常组织中的表达,其中8个分析结果显示HJURP在头颈部癌组织中显著高表达,仅一个分析结果显示其在癌组织中低表达。通过对ArrayExpress中E-TABM-302芯片数据集生存分析表明,HJURP的表达量与预后存在明显负相关性,即HJURP表达量越高,总体生存越差。结论:通过整合Oncomine芯片数据和生存相关芯片数据,首次提出HJURP在头颈部癌中高表达且对预后有不良影响,为肿瘤药物的开发提供了潜在靶点。

HJURP基因多态性与晚期肝细胞癌奥沙利铂为基础化疗疗效及不良反应的相关性

目的探讨Holliday交叉识别蛋白(holliday junction recognition protein,HJURP)基因多态性与含奥沙利铂方案一线治疗晚期肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)疗效及不良反应的关系。方法收集广西医科大学附属肿瘤医院的42例接受含奥沙利铂方案一线治疗的晚期肝细胞癌患者的临床资料及外周血样本,采用二代测序(next-generation sequencing,NGS)技术对HJURP基因7个位点进行分型,分析基因多态性与化疗疗效、预后及不良反应的关系。结果42例患者的疾病控制率(DCR)为21.4%,HJURP基因多态性与DCR无关(P>0.05)。全组患者中位无进展生存期(mPFS)为1.5个月,中位总生存期(mOS)为4.4个月。携带rs3771333位点A/A型患者较A/C型患者的mOS更长(6.0个月vs 1.3个月,P=0.016)。HJURP基因多态性与含奥沙利铂方案治疗的血液毒性、胃肠道毒性及神经毒性无关。结论HJURP基因rs3771333位点多态性与含奥沙利铂方案治疗晚期HCC的预后有关,携带A/A基因型患者预后较好。

HJURP基因促进肾癌细胞增殖迁移的机制研究

目的研究HJURP基因对肾癌细胞生物学功能的影响。方法利用TCGA肾癌数据库分析HJURP基因在肾癌中的表达及对预后的影响,qPCR进一步检测HJURP基因在20例肾癌组织,肾癌细胞株CAKI-1、786O、A498及正常化肾小管细胞HK2中的表达。分别设计HJURP特异性siRNA(si-HJURP组)和对照序列(NC组)转染CAKI-1细胞株,采用细胞克隆形成实验和MTT法检测HJURP基因对肾癌细胞增殖活性影响,流式细胞术检测肾癌细胞周期变化,Transwell实验检测肾癌细胞迁移能力,Western blot检测上皮间质转化(EMT)及AKT通路相关蛋白的表达变化。结果(1)TCGA数据库中HJURP在肾癌组织中显著高表达,且随着肿瘤分期的升高而增高(P<0.05)。HJURP高表达组患者总生存率和无病生存率明显较HJURP低表达组患者降低。(2)肾癌组织及肾癌细胞株中HJURP表达均高于癌旁组织及正常肾小管细胞。(3)细胞学实验结果显示,与NC组相比,si-HJURP组CAKI-1细胞增殖活性明显受抑制,G2期细胞比例增高,细胞迁移数量明显下降,EMT相关蛋白N-cadherin表达下降,E-cadherin表达升高,同时AKT通路关键蛋白p-AKT及p-GSK3β明显下调(P<0.05)。结论HJURP基因在肾癌中高表达,促进肾癌细胞的增殖及迁移,其可作为肾癌的潜在临床诊治靶点及预后标志物。

HJURP在肺腺癌组织中高表达并与患者不良预后相关性

目的 分析Holliday交叉识别蛋白(holliday junction recognition protein, HJURP)在肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)中的表达水平及其在预后评估中的价值。方法 从公共数据库TCGA(The Cancer Genome Atlas)和GEO(Gene Expression Omnibus)下载LUAD患者的基因表达和临床数据,利用R语言软件分析HJURP的表达水平;从HPA(Human Protein Atlas)数据库下载LUAD患者的HJURP蛋白表达数据;应用ssGSEA算法进行免疫浸润分析;ROC曲线(receiver operating characteristic curve)、Kaplan-Meier分析、单因素和多因素COX回归分析、列线图和校准曲线评价HJURP在肿瘤预后评估中的价值。结果 LUAD中HJURP的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.001);免疫浸润分析结果显示HJURP与嗜酸性粒细胞、肥大细胞富集评分呈负相关(P<0.001),与活化CD4 T细胞富集评分呈正相关(P<0.001);在预后分析结果中,HJURP对LUAD预后灵敏度高,HJURP高表达的患者总生存率较差。COX回归分析显示,HJURP表达是总生存率的风险因素。结论 HJURP在LUAD中表达异常上调,并与不良预后显著相关,提示HJURP可能为LUAD潜在的诊断标志物和治疗靶点。

HJURP基因缺陷表达的人胚胎绒毛细胞模型的构建与鉴定

目的构建HJURP基因的RNA干扰慢病毒表达载体并在人胚胎绒毛细胞上鉴定其沉默效率,进而提供HJURP基因缺陷表达的原代胚胎绒毛细胞模型。方法针对目的基因HJURP的序列,按照RNA干扰序列的设计原则,设计合成3个HJURP基因特异性的小分子干扰RNAi靶点,将其合成短发夹RNA(sh RNA)并退火形成双链RNA,克隆至慢病毒载体中形成sh RNA表达载体,通过PCR和测序鉴定获取正确重组载体。将筛选出的重组载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞并测定病毒滴度。随后将其干扰人胚胎绒毛细胞,采用Western blotting和real-Time PCR检测靶基因的沉默效率。结果对重组载体p HBLVU6-Zs Green-Puro进行测序鉴定,证实插入的sh RNA序列无碱基变异。重组慢病毒载体经293T细胞包装后,病毒滴度为108PFU/ml。RNA干扰人胚胎绒毛细胞HJURP基因后,可见感染后内源HJURP的蛋白表达水平显著下降,HJURP m RNA水平明显下降,其中sh RNA1干扰效率大于70%。结论成功构建了HJURP基因的sh RNA慢病毒表达载体,该重组载体可以在细胞水平有效沉默靶基因,为后续研究HJURP基因表达抑制对人胚胎绒毛细胞的增殖凋亡和染色体分离的影响,探索HJURP基因在自然流产发生中的作用机制提供细胞模型。

HJURP基因表达下调对人胚胎绒毛细胞增殖凋亡作用的研究

目的研究HJURP基因的表达下调对人胚胎绒毛细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法用CCK8法、Annexin V-EGFP/PI双染法、TUNEL法、Trans Well迁移侵袭实验等方法研究HJURP表达下调对人胚胎绒毛细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 HUJRP基因表达下调后,与对照组比较,明显抑制胚胎绒毛细胞的增殖及迁移侵袭能力。胚胎绒毛细胞的凋亡率为9.87±1.92%增加至,明显高于NS组3.92±1.12%(P<0.01)。对细胞周期的影响表现为G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞从42.9±3.12%增加至62.4±1.92%。Trans Well侵袭实验结果显示,实验组穿过Trans Well膜的数目明显少于对照组。结论 HJURP基因的表达下调可以导致人胚胎绒毛细胞增殖抑制,诱导人胚胎绒毛细胞凋亡,使人胚胎绒毛细胞周期阻滞于G0/G1期,推测HJURP基因表达下调与人胚胎自然流产有相关性。

Holliday交叉识别蛋白rs3771333多态性与原发性肝癌临床表型的关联研究

目的：分析Holliday交叉识别蛋白（Holliday Junction Recognition Protein,HJURP）rs3771333多态性与原发性肝癌（HCC）的临床病理特征的关系。方法：采用Taqman基因分型方法检测rs3771333的基因型,分析各基因型与146例HCC患者的TNM分期、癌栓形成等指征的关系,并对可能影响亚组间匹配的混杂因素如性别等5个因素进行校正。结果：在146例肝癌患者中,HJURP rs3771333位点的AA、AC和CC基因型的频率分别为69.2%（101/146）、29.5%（43/146）和1.3%（2/146）。在使用性别等因素校正后,AC基因型在原发灶T1组中的频率高于T2~T4组中的频率（36.4%vs 23.8%）,AC基因型在原发灶数目〈3个组中的频率高于≥3个组中的频率（34.0%vs 19.6%）,但差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论：HJURP rs3771333位点的多态性与HCC的临床特征可能无相关性,该位点的多态性与HCC的疾病演变的关系还需要进一步验证。

Holliday交叉识别蛋白在肺鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的研究肺鳞状细胞癌中Holliday交叉识别蛋白(Holliday Junction Recognition Protein,HJURP)的表达及临床意义。方法从美国TCGA肿瘤数据库中,下载肺鳞状细胞癌患者的基因表达和临床特征数据,分析HJURP表达与肺鳞状细胞癌临床病理特征和预后的关系;进一步收集我院2014年1月至2020年1月我院74例肺鳞状细胞癌组织标本进一步验证HJURP在肺鳞状细胞癌中的表达与预后的关系。进一步采用GSEA基因富集通路研究HJURP的相关生物学机制。结果HJURP基因在人肺鳞状细胞癌组织中显著高表达,且表达随着病理分级的恶性程度的升级而增高,与肺鳞状细胞癌的肿瘤转移密切相关,生存分析显示高表达HJURP组患者,预后明显比HJURP组患者差(P=0.032)。我院临床样本进一步验证发现HJURP在肺鳞状细胞癌组织中高表达,且与临床病理分期有关(P<0.05),K-M生存曲线分析显示,HJURP高表达预示患者更差的生存期(P=0.026)。GSEA富集分析发现HJURP高表达样本富集至G1 pathway,ATM pathway,cell cycle pathway及ERK pathway通等信号通路集。结论HJURP在肺鳞状细胞癌组织表达升高,是一个预后不良因素,其可作为肺鳞状细胞癌的潜在临床诊治靶点及预后标志物。

CENP-A与恶性肿瘤的相关性研究进展

CENP-A作为最早被发现的一种着丝粒蛋白,它对于着丝粒的组装形成、染色体的正确分离以及细胞分裂的正常进行起到了不可替代的作用。近年来研究发现CENP-A在多种恶性肿瘤中过表达,这种过表达会导致染色体非整倍体的形成,而染色体非整倍体是肿瘤形成的重要原因之一。研究CENP-A的过表达与肿瘤的关系,对于肿瘤的靶向治疗具有重要的现实意义。

基于在线数据库分析Holliday交叉识别蛋白在膀胱癌中的表达以及与肿瘤浸润免疫细胞的关系

目的探讨Holliday交叉识别蛋白(HJURP)基因在膀胱癌中的表达及其与肿瘤免疫细胞浸润的相关性。方法运用Oncomine和基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库检索HJURP基因与膀胱癌相关的数据,通过GEPIA和Kaplan-Meier分析HJURP表达量与膀胱癌患者预后的关系,通过肿瘤免疫评估资源(TIMER)数据库分析HJURP基因表达量与膀胱癌免疫细胞浸润的相关性。结果Oncomine数据库中检索到383项针对HJURP在不同类型癌组织/正常组织表达量的研究结果,其中在膀胱癌中有2项基因芯片数据提示HJURP在膀胱癌组织中显著高表达,生存分析提示HJURP高表达组膀胱癌患者的无病生存期明显低于低表达组(P<0.05),但HJURP高表达组膀胱癌患者的总生存率及无复发生存率与低表达组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。进一步通过TIMER数据库分析发现膀胱癌中HJURP表达量与CD8^(+)T细胞、中性粒细胞和树突状细胞浸润水平相关。结论HJURP在膀胱癌中高表达,可能与无病生存期及免疫细胞微浸润有关。

Holliday交叉识别蛋白表达与胃癌发生发展及其预后的关系

目的探讨Holliday交叉识别蛋白(HJURP)的表达与胃癌发生、发展及预后的关系。方法收集2009年1月至2016年12月于本院普外科接受根治术的79例胃癌患者的胃癌组织作为实验样本,另收集同期就诊的27例胃良性疾病患者的正常胃组织(非癌样本旁的正常胃组织)作为对照样本,采用免疫组化二步法检测胃癌组织、正常胃部组织中HJURP蛋白的表达,并结合胃癌患者的临床病理资料进行相关性分析,采用Kaplan-Meier法、Cox比例风险模型进行生存分析。结果实验样本胃癌组织的HJURP阳性表达率明显高于正常对照组(P=0.037)。HJURP的表达可能与胃癌组织的淋巴转移、TNM分期、脉管有无癌栓相关(P<0.05),而与性别、年龄、术前CEA、肿瘤大小、分化程度、胃壁侵润深度无关(P>0.05)。HJURP的高表达与患者的不良预后相关(P=0.005)。结论HJURP基因的表达与胃癌的发生发展相关,可能是胃癌不良预后的潜在独立预测因子。