Smad锚着蛋白在高糖诱导人肾小管上皮细胞细胞外基质沉积中的作用

目的:阐明Smad锚着蛋白(Smad anchor for receptor activation,SARA)在高葡萄糖诱导的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)细胞外基质(ECM)沉积中的作用及分子机制,探讨以SARA为靶点抑制高葡萄糖诱导的HK-2细胞ECM沉积的策略。方法:用高浓度葡萄糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激HK-2细胞,通过WesternBlot及实时定量PCR(Real-time PCR)检测纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(ColⅠ),进而检测转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3的表达变化,通过细胞免疫荧光、Western Blot、Real-time PCR检测SARA的表达变化;分别转染全长SARA质粒[SARA(WT)]及敲除SBD结构域的SARA质粒[SARA(dSBD)],检测转染后高糖诱导HK-2细胞FN及ColⅠ表达的变化。结果:Western Blot及Real-time PCR结果显示,30mmol/L D-葡萄糖刺激后,HK-2细胞ColⅠ赁白及mRNA表达呈时间依赖性升高。高糖可诱导TGF-β1、Smad3蛋白及其mRNA表达呈时间依赖性上调;Smad2 mRNA表达呈时间依赖性上调,而其蛋白表达呈时间依赖性下调;高糖可促进Smad2和Smad3磷酸化,但Smad3的活化时间更长。而SARA的蛋白及mRNA表达呈时间依赖性降低,细胞免疫荧光结果亦汪实高糖刺激后SARA表达下降。与高糖组相比。转染SARA(WT)可使HK-2细胞FN和ColⅠ表达下凋;转染SARA(dSBD)对高糖诱导的HK-2细胞FN和ColⅠ表达无明显影响。结论:高糖诱导的HK-2细胞ECM沉积过程中,TGF-β1信号通路活化,SARA的表达下凋;过表达SARA可能通过上调Smad2的蛋白表达,抑制TGF-β1信号传导,从而减少高糖诱导的HK-2细胞ECM分泌。