HLA—A0201与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在K562细胞的表达和定位

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与HLA -A 0 2 0 1(A 0 2 0 1)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体 ,分析其在K5 6 2细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT -PCR方法克隆A 0 2 0 1cDNA ,构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,转染K5 6 2细胞 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从两个HLA -A2阳性供者外周血细胞中克隆到A 0 2 0 1cDNA编码区全长序列。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K5 6 2细胞 ,5h后A 0 2 0 1和EGFP的表达百分率分别为 2 5 12± 2 2 6、2 7 37± 3 5 9,2 4h后表达水平无明显提高。表达的融合蛋白主要分布于细胞膜上 ,胞内分布较少。相反 ,转染空载体的细胞不表达A 0 2 0 1分子 ,仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。结论 :成功构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K5 6 2细胞中得到表达 ,表达产物主要分布于细胞膜表面 ,提示表达该融合蛋白的K5 6 2细胞是潜在的人工抗原提呈细胞。