44种生物碱类化合物对人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60细胞增殖抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果:西萝芙木碱、伊波加因、骆驼蓬碱、哈尔明碱、黄连碱、延胡索碱、白屈菜碱、小檗胺、吐根碱、4-甲氧基-1-甲基-2-喹诺酮、贝母碱N-氧化物、去氢贝母碱N-氧化物、倒千里光碱、9-去甲基小檗碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱、金鸡宁、罂粟碱、喜树碱和酒石酸麦角胺对人鼻咽癌细胞株KB细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱、番茄碱苷和喜树碱,其次为黄连碱、白屈菜碱、哈尔明碱、澳洲茄次碱和延胡索碱。西萝芙木碱、白屈菜碱、哈尔明碱、小檗胺、吐根碱、贝母碱N-氧化物、番茄碱苷、罂粟碱、利血胺和喜树碱对人白血病细胞株HL-60细胞的增殖亦有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱,其次为西萝芙木碱、小檗胺、番茄碱苷和喜树碱。结论:上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱的、有抗肿瘤活性中药的有效成分,亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。

40种香豆素类化合物对人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60细胞生长抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60筛选40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:马栗树皮苷、去甲基呋喃皮纳灵、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人鼻咽癌细胞株KB细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、牛防风素和考迈斯托醇对人白血病细胞株HL-60细胞的生长有一定程度的抑制作用。结论:马栗树皮苷、去甲基呋喃皮纳灵、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人鼻咽癌细胞株KB细胞的生长有抑制作用;伞形花内酯刘寄奴酸酯、牛防风素和考迈斯托醇对人白血病细胞株HL-60细胞的生长有抑制作用。

DADS通过Chk1/Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路诱导白血病HL-60细胞G2/M期阻滞

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞周期阻滞及其分子机制。方法采用细胞计数、软琼脂克隆形成实验及流式细胞术观察DADS对HL-60细胞生长抑制与周期阻滞效应。Western blot检测DADS对HL-60细胞Chk1/2以及下游分子的影响。结果细胞计数显示,60、120μmol·L-1DADS处理后,其群体倍增时间从19.14 h增加到35.03、71.82 h(P<0.05)。软琼脂克隆形成实验表明,30、60、90、120μmol·L-1DADS对HL-60细胞克隆形成率的抑制率分别为35.06%、62.10%、93.79%、99.35%(P<0.05)。流式细胞术检测显示,60和120μmol·L-1DADS分别作用HL-60细胞24 h后,DADS可呈时间与浓度依赖性诱导HL-60细胞G2/M期阻滞(P<0.05)。60μmol·L-1DADS处理HL-60细胞后,p-Chk1可呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1与Chk2总蛋白和pChk2无改变(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB 1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但14-3-3蛋白表达没有改变(P>0.05)。结论 DADS能够抑制HL-60细胞增殖,并通过Chk1/Cdc25C/CyclinB 1/CDK1通路阻滞HL-60细胞于G2/M期。

热休克蛋白70在人白血病细胞HL-60中表达研究

目的 探讨热休克蛋白70(HSP 70)在人白血病细胞的表达。方法 人白血病细胞HL-60经42℃休克2 h,分别于休克后4、8、12、16、24、48 h收集细胞爬片,采用ENVISION免疫组织化学法检测HSP 70在细胞中表达;为明确热休克处理前后白血病细胞表达量变化,采用间接免疫荧光法定量分析细胞休克前及休克后12 h HSP 70表达;应用DNA倍体检测分析HSP 70表达与细胞周期关系。结果 免疫组织化学和免疫荧光检测显示热休克后白血病细胞中HSP70表达明显增加,以12 h达高峰;DNA倍体分析在整个细胞周期HSP 70均有表达,G1期与G2期表达量基本一致。与休克前相比,经热休克处理人白血病细胞HL-60中HSP 70表达明显增高;HSP 70表达与细胞周期并无明显关系。结论 初步了解白细病细胞HSP 70表达规律,为今后进行HSP 70抗原肽提取和纯化及抗癌免疫研究奠定基础。

二烯丙基二硫对人白血病细胞HL-60增殖、细胞周期及p21表达的影响

目的观察二烯丙基二硫(DADS)作用于人白血病细胞系HL-60后,细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p21表达的变化,探讨DADS抑制HL-60增殖、诱导G2/M阻滞的作用机制。方法不同浓度DADS作用HL-60后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,Westernblot检测p21蛋白水平。结果在一定浓度范围之内,DADS能抑制HL-60细胞增殖,细胞周期发生G2/M期阻滞,并上调p21蛋白水平。结论DADS能通过上调p21的表达而抑制HL-60增殖,诱导其G2/M期阻滞。

姜黄素衍生物对人白血病细胞株HL-60增殖的抑制作用及初步机制探讨

目的对姜黄素进行了相应的修饰得到了二十五个姜黄素衍生物,并在细胞水平对这些化合物的体外抗肿瘤活性及其机制进行初步探讨。方法采用MTT法研究姜黄衍生物(6.25μM、12.5μM、25μM和50μM)在体外对HL-60的成活率的影响,并采用吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)荧光双染法染色及流式细胞术对其作用机制进行了初步探讨。结果MTT实验结果表明姜黄素衍生物对人白血病细胞株HL-60的存活率具有一定的影响,其中9#、12#作用最强,且具有时间和剂量依赖性。AO/EB荧光双染法染色及流式细胞术(PI)结果表明姜黄素衍生物9#、12#可以显著的诱导HL-60细胞凋亡,并呈剂量和时间依赖性。结论姜黄素衍生物9#、12#可能通过诱导细胞凋亡抑制细胞生长。

亚硒酸钠抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导白血病细胞HL-60凋亡的机制研究

目的探究亚硒酸钠诱导白血病细胞HL-60凋亡的信号通路及其对信号通路的影响。方法应用不同浓度的亚硒酸钠处理白血病细胞HL-60,或者应用亚硒酸钠按照不同的时间点处理白血病细胞HL-60,使用流式细胞仪检测亚硒酸钠对HL-60细胞凋亡的影响。应用10μmol/L亚硒酸钠处理HL-60细胞,Western blot检测p-PI3K、总PI3K、p-AKT、总AKT、p-m TOR和总m TOR的表达情况。在过表达PI3K的HL-60细胞中应用10μmol/L亚硒酸钠处理白血病细胞HL-60,流式细胞仪检测HL-60细胞的凋亡情况,Western blot检测p-PI3K、总PI3K、pAKT、总AKT、p-m TOR和总m TOR的表达变化。同时以加蒸馏水处理的HL-60细胞为空白对照组。结果与空白对照组凋亡比例(0.045±0.0013)相比,10μmol/L及20μmol/L亚硒酸钠处理组可有效诱导白血病细胞HL-60凋亡[凋亡比例分别为(0.254±0.001 6)和(0.435±0.002 1)],差异均有统计学意义(P<0.05)。此外与10μmol/L的亚硒酸钠处理0 h组相比[凋亡比例(0.055±0.001 1)],10μmol/L亚硒酸钠作用24 h、48 h、72 h后,HL-60细胞的凋亡显著[凋亡比例分别为(0.179±0.0018)、(0.384±0.0023)和(0.535±0.0034)],差异均有统计学意义(P<0.05)。亚硒酸钠处理细胞能下调PI3K、AKT、m TOR的磷酸化水平,但对总的PI3K、AKT以及m TOR的表达没有影响。在过表达PI3K的细胞中,AKT、m TOR表达上调,而亚硒酸钠可逆转过表达PI3K导致的PI3K/AKT/m TOR信号通路的过度激活。过表达PI3K使细胞凋亡被抑制,而亚硒酸钠可诱导过表达PI3K的细胞凋亡增加。结论亚硒酸钠可通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路的激活,诱导白血病细胞HL-60凋亡。

二烯丙基二硫对人白血病细胞增殖和钙网蛋白表达的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对人白血病HL-60细胞增殖和钙网蛋白(CRT)表达的影响。DADS(1.25 mg/L)处理HL-60细胞24、48和72 h,siRNA抑制CRT的表达,采用MTT法检测细胞活力,实时定量PCR和Western blot检测CRT的表达。与对照组比较,DADS处理24、48和72 h组HL-6细胞的增殖水平均显著性降低,呈现时间依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,siRNA瞬时转染显著降低了CRT mRNA的表达(P<0.05),也显著降低了细胞的增殖水平(P<0.05),与DADS具有协同效应。DADS抑制了HL-60细胞增殖,其机制可能与下调钙网蛋白的表达有关。

岩舒注射液影响人HL-60白血病耐药细胞耐药性的机制

目的:研究复方中药岩舒注射液能否抑制人白血病HL-60多药耐药细胞增殖及其相关机制。方法:采用人白血病HL-60敏感细胞及其HR-20耐药细胞进行研究。MTT法检测药物对细胞增殖的影响,流式细胞术检测多柔比星的荧光强度变化,免疫印迹方法检测P-糖蛋白含量的变化。结果:岩舒注射液作用耐药和敏感细胞的IC50值相近,没有明显的交叉耐药性。岩舒注射液增加高三尖杉酯碱对耐药细胞的增殖抑制作用,增加多柔比星在耐药细胞内的积聚。免疫印迹法检测到:岩舒注射液处理后明显降低耐药细胞的P-糖蛋白水平。结论:岩舒注射液能克服人白血病HL-60细胞的多药耐药性,其机制与降低P-糖蛋白的水平有关。

下调组蛋白去乙酰化酶1的表达引起人白血病HL-60细胞的分化

研究RNA干扰沉默HDAC1基因对髓系白血病HL-60细胞株细胞分化的影响。HDAC1基因的siRNA片段转染入HL-60细胞后,采用RT-PCR、Western blotting分别检测HDAC1 mRNA和蛋白的表达变化,Wright-Giemsa染色观察细胞形态,流式细胞术分析CD13、CD33、CD14的表达变化,NBT还原比色实验观察细胞分化能力。结果表明,HDAC1 siRNA可沉默该基因表达;HDAC1 siRNA的浓度为30～60 nmol·L-1时,24 h后细胞形态向成熟粒系分化;60 nmol·L-1组的NBT还原能力为0.25±0.02,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);但更高浓度组却无明显变化;60 nmol·L-1组细胞CD13、CD33表达率分别为(96.50±0.70)%、(66.73±0.50)%,而对照组分别为(3.39±0.68)%、(96.80±1.70)%,差异有统计学意义(P 0.000 5);但是CD14的表达率无明显变化。结果提示,HDAC1 siRNA的浓度在30～60 nmol·L-1时可诱导细胞向成熟粒细胞分化,有望成为白血病靶向基因治疗的新工具。

榄香烯静脉输注浓缩液体外抗人体肿瘤细胞疗效实验研究

[目的]了解榄香烯静脉输注浓缩液的体外抑瘤效果。[方法]用CremophorEL作增溶剂配合丙二醇制成2%榄香烯静脉输注浓缩液,进行体外细胞增殖抑制实验(MTT活细胞染色法)。[结果]榄香烯静脉输注浓缩液体外细胞毒实验对多种人体肿瘤细胞:SHG-44人体神经胶质瘤、LAX人体肺腺癌、HL-60人白血病、人体肝细胞癌QGY及人体胃癌MGC,IC50依次为56.07～60.47μg/mL、88.76～92.80μg/mL、39.37～40.14μg/mL、90.26～100.82μg/mL、61.29～83.64μg/mL。[结论]榄香烯静脉输注浓缩液对上述人体肿瘤细胞具有一定的增殖抑制作用。

拟康氏木霉胞外多糖抗肿瘤活性研究

目的:研究拟康氏木霉胞外多糖体内外抗肿瘤活性。方法:体外采用MTT法检测拟康氏木霉胞外多糖对人白血病细胞HL-60抑制作用;体内试验是将昆明种小鼠接种S180实体瘤后随机分组,灌胃50、100、200mg.kg-1.d-1剂量的多糖,以生理盐水和环磷酰胺为空白对照组和阳性对照组。检测受试药物对小鼠S180实体瘤的抑制作用,计算小鼠的相对生长率及其免疫器官指数。结果:经MTT法检测,拟康氏木霉胞外多糖0.2～1.0mg/mL五个浓度对HL-60细胞均有不同程度的抑制作用,并呈现出剂量相关性,其中1.0mg/mL多糖浓度在72h的抑制率可达40.36%。而该多糖低、中、高三个剂量组均能明显减少S180小鼠的瘤重,其中高、中剂量组能明显提高小鼠的胸腺指数和脾指数(P<0.05,P<0.01),但与空白对照组比较,三个给药组对小鼠的相对生长情况并无明显影响。结论:拟康氏木霉胞外多糖具有一定的抗肿瘤作用。