急性早幼粒白血病细胞ATRA耐药株HL-60R、NB4R的构建及鉴定

目的:构建急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60、NB4的全反式维甲酸耐药株HL-60R、NB4R,并对其生物学性状进行鉴定。方法:以全反式维甲酸(ATRA)为诱导药物,采用浓度递增间歇诱导法构建HL-60、NB4细胞相应的ATRA耐药株。CCK8法鉴定其ATRA耐药性,并检测耐药细胞株的生长曲线及多药耐药性。结果:成功构建了ATRA耐药细胞株HL-60R、NB4R,并发现与亲代细胞相比,其生长增殖速度减慢,群体倍增时间延长,且对其它多种化疗药物产生一定程度的交叉耐药。结论:成功构建的耐药细胞系HL-60R、NB4R为急性早幼粒细胞白血病多药耐药机制的进一步研究奠定了基础。

外源性hRARβ基因对HL-60R细胞生长抑制和诱导分化作用

目的 探讨hRARβ基因在白血病发病以及维甲酸类治疗中的细胞生物学作用。 方法 用电穿孔方法将 pcDNA3 hRARβ重组质粒导入缺失hRARβ基因表达的HL 6 0R细胞中 ,并用软琼脂集落形成、细胞形态学、硝基四氮唑蓝 (NBT)还原试验和流式细胞术等方法对其生物学特性进行研究。结果 建立了具有功能性hRARβ基因表达的HL6 0R hRARβ细胞株 ,在 0 .1μmol/LCh5 5作用下其生长抑制率为 5 0 % ,软琼脂培养集落形成率下降 ,细胞分化。结论 在人髓系白血病细胞中恢复外源性hRARβ基因的表达可以恢复该细胞对维甲酸类药物的敏感性 。

人早幼粒白血病细胞HL-60胞内pH的^(31)P核磁共振研究

建立了无损伤性测定HL 60细胞胞内pH的31 P NMR方法。细胞内无机磷 (Pi)的化学位移对pH非常敏感 ,随pH变化而变化 ,通过测定其化学位移进而能间接确定细胞内的pH。HL 60细胞的31 P核磁共振谱由Pi、ATP等的共振峰组成。根据Pi 峰的化学位移对HL 60细胞内pH进行了测定。HL 60细胞内Pi 峰的化学位移为 5 .78± 0 .0 1 ,计算得到细胞内pH值为 6.1 6±0 .0 1。31 P核磁共振能在测定细胞胞内pH的同时 ,观测到细胞内多种含磷小分子代谢物 。