可溶性HLA-G1-肽复合物的体外折叠和鉴定

目的合成可溶性HLA-G1-肽复合物。方法利用原核高效表达的可溶性HLA-G1重链和轻链(β2m),在人工合成的HLA-G1限制性九肽(KGPPAALTL)存在的条件下,通过稀释复性折叠成可溶性HLA-G1-肽复合物。利用特异性抗体(W6/32及兔抗人β2m抗体)进行免疫印迹及酶联免疫吸附试验,检测稀释复性的折叠产物。结果折叠复合物含有35%可溶性HLA-G1-肽复合物、5%可溶性HLA-G1重链聚合体及60%复性的β2m3种成分。结论通过原核表达、体外折叠能够获得大量可溶性HLA-G1-肽复合物。

可溶性PD-1协同HSP70-肽复合物抑制荷瘤小鼠肝癌的研究

目的 :研究基因转染和表达的可溶性PD 1(solubleprogrammeddeath 1,sPD 1)对HSP70 肽疫苗抗肿瘤效果的影响及协同机制。方法 :以HSP70 肽疫苗免疫BALB/c小鼠后 ,用半定量RT PCR技术检测和分析HSP70 肽疫苗对小鼠脾细胞上PD 1及其配体基因表达的影响。体内转染表达sPD 1,用MTT比色法检测HSP70 肽疫苗免疫小鼠对肿瘤生长的抑制作用以及脾淋巴细胞的细胞毒活性。结果 :单独的sPD 1就有抗肿瘤效应。HSP70 肽疫苗不仅能预先在动物体内诱导肿瘤特异性的CTL ,而且可使脾细胞上抑制性共刺激受体PD 1及其配体的表达显著升高。用sPD 1与HSP70 肽疫苗联合治疗荷瘤小鼠 ,能提高脾CTL的杀伤效率并延长HSP70 肽疫苗的免疫效果。结论 :sPD 1可通过阻断PD 1与其配体的结合作用 ,及减弱PD 1的负反馈抑制作用 ,而增强HSP70

可溶性HLA-G1抗原肽复合物的体外折叠及其功能研究

目的:体外折叠形成可溶性HLA G1抗原肽复合物,并研究其生物学功能。方法:以原核表达的可溶性HLA-G1的重链及轻链β2m,与人工合成的抗原九肽体外进行共折叠复性。将折叠产物通过SephadexG75层析柱纯化,经Westernblot进行构象鉴定。探讨可溶性HLA-G1分子对NK细胞杀伤活性的影响,对混合淋巴细胞培养中T细胞增殖的影响,以及对活化T细胞凋亡的影响。结果:折叠产物可与mAbW6/32特异性结合,在Westernblot的鉴定中呈阳性反应。可溶性HLA-G1可有效地抑制NK细胞的细胞毒作用,抑制混合淋巴细胞培养中T细胞的增殖,促进活化T细胞发生凋亡。结论:体外折叠成功地形成可溶性HLA-G1抗原肽复合物,该复合物具有抑制NK细胞和T细胞的活性。

B7-1B7-H1相对比例变化对Hsp70-肽复合物抗肿瘤免疫效应的影响

目的 :探讨Hsp70-肽复合物对B7-1 B7-H1相对比例的影响及真核表达可溶性PD-1(sPD-1)对Hsp70-肽复合物抗肿瘤作用的影响。方法 :通过RT-PCR和半定量PCR技术检测Hsp70 肽复合物体外刺激和体内免疫对小鼠脾细胞正调控共刺激分子B7-1和抑制性共刺激分子B7-H1及其受体PD-1表达的影响 ;体内转染表达sPD-1后 ,观察Hsp70-肽复合物免疫小鼠的肿瘤生长以及脾淋巴细胞毒性的变化。结果 :基因表达检测表明 ,Hsp70- 肽复合物体外刺激的小鼠脾细胞B7-1mRNA和B7-H1mRNA的水平随时间而变化 ,B7-1/B7-H1比值随刺激时间而增高 ;Hsp70-肽复合物体内免疫小鼠后期脾细胞B7-1表达下降 ,B7-H1及其受体PD-1表达上调 ,B7-1/B7 H1比值逆转 ;体内表达sPD-1可显著增强和延长Hsp70 肽复合物的抑瘤效果 ;体内表达sPD-1可提高Hsp70-肽复合物免疫的荷瘤小鼠脾细胞的杀伤率。结论 :Hsp70-肽复合物的刺激引起共刺激分子B7-1和B7-H1表达的变化 ,B7-1/B7-H1的比例与激活效应相关 ,sPD-1通过阻抑B7-H1/PD-1途径、上调B7-1/B7-H1比例 ,可增强免疫应答 ,提高Hsp70

血清HNP1-3、t-PAIC联合检测在冠心病诊断中的价值

目的探讨血清人中性粒细胞多肽1-3(HNP1-3)、组织型纤溶酶原激活物-抑制剂复合物(t-PAIC)联合检测在冠心病诊断中的价值。方法选择冠心病患者116例作为研究组,根据Gensini积分分为轻度病变组(0<Gensini积分≤26.1分)35例、中度病变组(26.1<Gensini积分≤51.4分)53例和重度病变组(Gensini积分>51.4分)28例,另选择同期查体健康者110例作为对照组。比较各组血清HNP1-3、t-PAIC水平,分析血清HNP1-3、t-PAIC水平与冠心病患者Gensini积分的相关性,应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HNP1-3、t-PAIC水平对冠心病的诊断价值。结果研究组TC、TG、LDL-C及血清HNP1-3、t-PAIC水平高于对照组(P均<0.05),HDL-C水平低于对照组(P<0.05)。冠心病患者血清HNP1-3、t-PAIC水平及Gensini积分随冠状动脉病变程度升高而升高(P均<0.05)。Pearson相关分析显示,冠心病患者血清HNP1-3、t-PAIC水平与Gensini积分呈正相关(r分别为0.317、0.425,P均<0.05)。ROC曲线分析显示,HNP1-3对冠心病诊断的灵敏度为0.832,特异度为0.794;t-PAIC对冠心病诊断的灵敏度为0.903,特异度为0.843。两者联合检测对冠心病诊断的灵敏度和特异度分别为0.931和0.891。结论冠心病患者血清HNP1-3、t-PAIC异常升高,其水平与患者Gensini积分呈正相关关系,血清HNP1-3、t-PAIC联合检测有助于冠心病诊断。

免疫学

猪FasL基因在猪软骨细胞上的表达和鉴定；重组蓖麻毒紊A链的融合表达、纯化及活性研究；凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义；人CD59基因的突变和表达及其活性研究；预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外折叠；人源噬菌体抗体库的构建及抗人NH-LBP抗体的筛选与鉴定；抗禽流感病毒轻链抗体库的构建；CTL识别的HLA-A2限制性人卵巢癌相关抗原OVA66表位的鉴定；含多抗原表位的嵌合SARS-CoV基因疫苗的构建和免疫原性研究；TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α，对U937细胞的激活作用；NK92细胞的胞吐效应与SNAP-23蛋白转位相关；CXCL16抗体可阻断BCG和LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤；GM-CSF对抗原化抗体基因免疫TH细胞应答的调节作用；趋化性细胞因子受体在Tc1和Tc2亚群的差异表达；在单个细胞水平上分析抗原特异性Th1／Th2细胞因子产生的关联性；人OX40-Fc分子的构建、真核表达及活性研究；人免疫缺陷病毒Ⅱ型核心蛋白DNA疫苗的实验免疫研究；PD-L1 mAb的制备、鉴定及其特性的研究；噬菌体呈现的多聚多肽3A8诱导Jurkat细胞的凋亡效应；T细胞受体Dβ-Jβ sjTRECs连接区多样性；α-Dystroglycan在胸腺T细胞的表达及其对胸腺发育的作用；Bcl-2家族蛋白参与调节CD3ε和5-氟尿嘧啶介导的T淋巴细胞凋亡；人白细胞介素21在真核细胞中表达及其体外促T细胞增殖作用；小干扰RNA特异性抑制淋巴细胞共刺激分子CD28基因表达的研究；猪-猕猴延迟性异种移植排斥反应的发生机制；天花粉蛋白在不同小鼠品系中区分性下调树突状细胞IL-12分泌和CD80表达；复合HA-2氨基多肽可增强chitosan-DNA疫苗的免疫保护效果；CD4^＋CD25^＋调节性T细胞抑制小鼠自身免疫性甲状腺炎的发生；人β2-微球蛋白在pET-22b（＋）表达载体中的克隆、表达与纯化；B7-1／B7-H1相对比例变化对Hsp70-肽复合物抗肿瘤免疫效应的影响。