解毒化淤药对白血病K562/A02、HL60/Adr细胞P-gp、Bcl-2、P53基因表达影响的研究

目的探讨解毒化淤中药复方含药血清对白血病K562/A02、HL60/Adr细胞P-gp、Bcl-2、P53基因表达的影响。方法应用中药血清药理学方法制备解毒化淤药的兔血清,以MTT法检测经含药血清处理后K562/A02、HL60/Adr细胞对化疗药物的敏感性;免疫组化方法检测P-gp、Bcl-2、P53耐药基因表达情况。结果 MTT结果显示不同浓度解毒化淤含药血清对K562/A02、HL60/Adr细胞均有耐药逆转作用,其逆转倍数随剂量增加而增大;免疫组化结果显示解毒化淤药含药血清能够降低K562/A02、HL60/Adr细胞耐药基因P-gp和抗凋亡基因Bcl-2的表达,但对P53基因无影响。结论解毒化淤方含药血清逆转白血病K562/A02、HL60/Adr细胞耐药的机制是降低P-gp和bcl-2的表达而逆转耐药的,对P53基因表达无影响。

尾静脉注射HL60、HL60/ADR细胞建立SCID beige小鼠白血病动物模型的研究

目的应用急性早幼粒细胞HL60及耐阿霉素(adriamycin,ADR)细胞HL60/ADR,构建SCID beige小鼠白血病模型。方法将15只4~5周龄的雌性SCID beige小鼠,随机分为对照组3只、四组模型12只(每组3只)。经2Gy X射线预处理,模型组分别经尾静脉接种对数生长期HL60细胞悬液1×10~7个/只(M1组)、5×10~6个/只(M2组),HL60/ADR细胞悬液1×10~7个/只(M3组)、5×10~6个/只(M4组),对照组鼠尾静脉注射等剂量生理盐水。观察一般情况,于照射前、造模第10、18、28天检测血常规、外周血白细胞分类、外周血CD33阳性细胞比例,第32天或濒死时处死取材,组织切片病理检查。结果各模型组于接种细胞第7天开始,出现竖毛、萎靡少动、脊背弓起、步态不稳、偏侧或转圈,M1、M3两组较M2、M4两组体重下降更明显(P<0.05),显著低于对照组(P<0.01)。至观察周期32 d,M1、M3两组生存率分别为33%、67%,M2、M4两组全部生存。各组小鼠经X线照射7 d内白细胞数迅速降低,随时间推移逐渐上升,第28天各模型组白细胞计数均显著高于对照组(P<0.01);且各模型组白血病细胞比例亦明显升高,以接种HL60/ADR的M3组最为显著(P<0.05);接种第28天时各模型组CD33阳性细胞比例显著高于对照组(P<0.01),然各模型组间差异无显著性。第32天或濒死前取材,病理组织切片,造模各组脾均可见弥漫性白血病细胞浸润,肝偶见白血病细胞浸润灶。结论 SCID beige小鼠经2Gy X射线预处理后,每只尾静脉注射HL60、HL60/ADR细胞1×10~7个或5×10~6个均可构建急性髓系白血病动物模型,符合急性髓系白血病的生物学特点,高浓度成瘤更快,中位生存期约29 d。

白血病HL60/ADR细胞Mdr1、NF-κB的表达及解毒化瘀药的干预作用

目的探讨解毒化瘀药血清对白血病HL60/ADR细胞多药耐药基因(Mdr1)、核周因子κB(NF-κB)信号基因表达的影响。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化瘀药血清处理后HL60/ADR细胞Mdr1基因的表达;Western blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达。结果解毒化瘀药血清能够降低HL60/ADR耐药细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50I、κBα的表达,降低Mdr1耐药基因的表达。结论解毒化瘀药对HL60/ADR细胞的耐药逆转作用可能是通过阻断NF-κB信号通路,影响Mdr1耐药基因的表达,进一步逆转耐药。

解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/ADR细胞Survivin基因表达影响的研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/ADR细胞Survivin基因表达的影响。方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化瘀药含药血清处理后HL60/ADR细胞Survivin基因的表达,并与干扰素作对照。结果:解毒化瘀药含药血清能够降低HL60/ADR细胞Survivin基因的表达。结论:解毒化瘀药含药血清通过降低HL60/ADR细胞Survivin基因的表达,逆转白血病细胞耐药。

解毒化瘀复方含药血清对白血病HL60/Adr细胞耐药的逆转作用

目的探讨解毒化瘀复方含药血清对白血病HL60/Adr细胞的耐药逆转作用。方法应用中药血清药理学方法制备解毒化瘀复方的兔血清,以MTT法检测经含药血清、干扰素处理后HL60/Adr细胞对化疗药物的敏感性;免疫组化方法检测P-gp、Bcl-2、P53耐药基因表达情况。结果 MTT结果显示不同浓度解毒化瘀复方含药血清对HL60/Adr细胞均有耐药逆转作用,其逆转倍数随剂量增加而增大;免疫组化结果显示解毒化瘀复方含药血清能够降低HL60/Adr细胞耐药基因P-gp和抗凋亡基因Bcl-2的表达,但对P53基因无影响。结论解毒化瘀复方含药血清能够降低白血病HL60/Adr细胞P-170和bcl-2的表达,逆转HL60/Adr细胞的耐药。

解毒化瘀药对白血病HL60/ADR耐药细胞凋亡影响的研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/ADR耐药细胞凋亡的影响。方法:应用流式细胞仪检测解毒化瘀药含药血清处理后的各组HL60/ADR细胞凋亡的情况。结果:解毒化瘀药中药复方能促进白血病耐药细胞HL60/ADR早期凋亡率,并呈浓度相关性。结论:解毒化瘀药含药血清能够促进HL60/ADR细胞凋亡。

HL60/ADM的耐药性及逆转研究

目的 :研究人类白血病多药耐药细胞株HL6 0 /ADM对 8种常用化疗药的耐药性及环孢菌素A(CsA)对其耐药的逆转作用。方法 :MTT比色法检测细胞耐药性及CsA对细胞耐药性的影响 ,流式细胞仪检测细胞内柔红霉素 (DNR)的浓度。结果 :HL6 0 /ADM对DNR、ADM、VCR、Har、VP16、MIT交叉耐药 ,对DNR耐药性最强 ,对Acla和Ara c基本不耐药。CsA使HL6 0 /ADM细胞内药物浓度增加 ,而对HL6 0的胞内药物浓度基本无影响。结论 :HL6 0 /ADM对Acla基本不产生耐药性 ,阿克拉霉素可能成为治疗白血病和克服白血病多药耐药性的重要药物。CsA对HL6 0

五味子甲素对K562/ADR、HL60/ADR、MCF-7/ADR多药耐药逆转机制的研究

目的探讨五味子甲素(schizandrin A or deoxyschizan-drin,schA)对白血病细胞K562/ADR、HL60/ADR、乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的逆转作用,并初步探讨其逆转机制。方法 MTT法检测schA对耐药细胞的逆转作用;流式细胞仪检测schA对细胞内柔红霉素、罗丹明-123含量和细胞表面P-gp表达水平的变化;用Real-time PCR方法检测schA对细胞内mdr1 mRNA和mrp1 mRNA表达;生化检测法检测schA对细胞内GSH含量的变化。结果耐药逆转实验显示:不同浓度的schA对作用机制不同的化疗药物耐药产生不同的逆转效果;蓄积实验表明schA可增加柔红霉素、罗丹明123在耐药细胞内的蓄积,并且有良好的剂量依赖关系;schA处理K562/ADR、HL60/ADR细胞24 h后,能降低P-gp蛋白和mdr1、mrp1基因的表达;schA处理K562/ADR、HL60/ADR细胞4 h后,可降低细胞内谷胱甘肽含量。结论 schA对耐药机制不同的细胞株K562/ADR、HL60/ADR均有耐药逆转作用,推测可能是与抑制细胞表面的P-gp蛋白功能和表达,降低mdr1、mrp1耐药基因的表达和降低细胞内谷胱甘肽含量有关,schA通过影响上述机制,进而增加细胞内的药物浓度,达到有效杀灭肿瘤细胞的作用。

蟾毒它灵逆转急性髓系白血病HL60/ADR耐药细胞的作用及机制

为探讨蟾毒它灵逆转急性髓系白血病HL60/ADR细胞耐药的作用及机制,采用低浓度药物梯度诱导法建立HL60/ADR耐药细胞,采用CCK8法和Western blot检测耐药情况,采用0.01μg/mL蟾毒它灵对HL60/ADR细胞进行预处理24 h,通过CCK8法检测HL60/ADR对阿霉素的敏感性,通过Western blot检测MDR1、MRP1、BCRP 3种耐药蛋白的表达水平。CCK8检测结果显示:HL60/ADR细胞24 h的IC_(50)由2.344μg/mL提升至9.50μg/mL,耐药倍数是4.06倍,72 h的IC_(50)由0.0852μg/mL提升至1.039μg/mL,耐药倍数是12.19倍;0.01μg/mL蟾毒它灵预处理24 h可将HL60/ADR细胞24 h的IC_(50)降至1.572μg/mL,逆转倍数是6.04倍,72 h的IC_(50)降至0.2649μg/mL,逆转倍数是3.92倍。0.01μg/mL蟾毒它灵处理HL60/ADR细胞24 h后,Western blot检测结果显示:MDR1、MRP1、BCRP 3种耐药蛋白的表达水平显著降低。上述结果表明:蟾毒它灵能够通过降低MDR1、MRP1、BCRP 3种耐药蛋白的表达水平来逆转HL60/ADR细胞耐药,可为蟾毒它灵逆转白血病细胞耐药的相关研究提供理论依据。

mTOR信号通路影响人早幼粒白血病细胞株HL60的趋电性

生物电信号指导的细胞定向迁移行为在多细胞生物体的重大生理和病理过程中发挥重要作用,然而电信号指导细胞定向迁移的机制并不清楚.利用体外直流电刺激探究细胞定向迁移机制是研究生物电信号指导细胞行为常用的手段.作者对人早幼粒白血病细胞株HL60的趋电性作用进行了研究,发现在300 mV/mm的直流电场中,HL60细胞发生明显朝向电场阴极的趋电性运动,其趋电性指数和轨迹速度分别为0.89±0.04和9.72±0.38μm/min;Rictor敲低突变株的趋电性与野生型之间无限制性差异.利用高浓度mTOR的特异性抑制剂PP242药物处理HL60细胞后,细胞在直流电场中的趋电性指数降低到0.82±0.06,运动速度也被显著抑制.以上研究结果表明,mTOR信号通路在HL60细胞的趋电性运动中发挥了一定的作用,但Rictor并不是关键基因.研究结果为开发生物电场依赖的靶向药物提供了理论基础.

急性早幼粒细胞白血病HL60细胞适配体亲和性鉴定方法的实验研究

目的用三种不同的检测方法鉴定HL60细胞适配体单链DNA(ssDNA)亲和性,比较不同方法的鉴定结果。方法用荧光显微镜、化学法(酶标仪)和流式细胞术三种方法,通过镜下观察、OD值、荧光强度和平衡解离常数等指标鉴定HL60细胞适配体的亲和性。结果荧光显微镜法可见在蓝色背景下,被标记的适配体(5’-FAM-ssDNA)与HL60细胞结合,发出绿色荧光,并应用ImageJ对该荧光结果进行分析,发现L36P的亲和性最高;化学法测定OD值,通过GraphPad Prism7制作柱状图并进行统计学分析,发现5条ssDNA与HL60细胞的亲和性均明显高于对照组(单个核细胞),且L36P的亲和性最高;流式细胞仪检测荧光强度,计算平衡解离常数,确定5条ssDNA与HL60细胞的亲和性由高到低依次为:L36P、L24P、L139P、L2P、L135P。结论荧光显微镜法可更直观地观察ssDNA与细胞的结合情况,化学方法(酶标仪)和流式细胞术可对结果进行定量分析,三种方法的检测结果基本一致。

蟾毒它灵诱导急性早幼粒细胞白血病HL⁃60细胞铁死亡的机制研究

目的探究蟾毒它灵(Bufotalin)对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞HL‐60铁死亡的作用及机制。方法用不同浓度(0.1、0.5、1.0、2.0、4.0μg·mL^(-1))蟾毒它灵分别作用于APL细胞HL‐60,使用光学显微镜观察细胞的形态学变化;采用CCK‐8法检测细胞的存活率情况;采用Western blot法检测细胞中铁死亡相关蛋白CD71、xCT、FTH1、GPX4的表达水平;采用谷胱甘肽(GSH/GSSG)检测试剂盒检测细胞内GSH和GSSG的含量变化;采用脂质氧化(MDA)检测试剂盒测定细胞内MDA的含量变化。将0.5μg·mL^(-1)蟾毒它灵、0.1μmol·L^(-1)Fer‐1和0.5μg·mL^(-1)蟾毒它灵+0.1μmol·L^(-1)Fer‐1分别作用于HL‐60细胞,使用光学显微镜观察细胞形态学变化,并用Western blot法检测铁死亡相关蛋白的表达水平。结果不同浓度蟾毒它灵处理HL‐60细胞后,细胞形态呈现出哑铃型、梭形等不规则形状,细胞的存活率降低,且呈时间‐剂量依赖关系。与对照组相比,蟾毒它灵可降低铁死亡相关蛋白GPX4、xCT、FTH1的表达水平和总谷胱甘肽的含量(均P<0.01),升高CD71蛋白的表达水平和MDA含量(均P<0.05)。蟾毒它灵与铁死亡抑制剂Fer‐1联合处理HL‐60细胞后,与对照组比较,HL‐60细胞的生长数量和形态学无明显变化,CD71、xCT、FTH1、GPX4蛋白表达水平的差异也无统计学意义(均P>0.05)。结论蟾毒它灵可抑制APL细胞HL‐60的增殖并诱导铁死亡,其可能通过GPX4介导的抗氧化途径和铁代谢途径实现。

基于HA修饰的CoFe_(2)O_(4)-TiO_(2)纳米颗粒体外PDT灭活HL60细胞的试验研究

通过水热法和表面修饰法制备了以CoFe_(2)O_(4)为内核、TiO_(2)为外壳、用透明质酸修饰的HA@CoFe_(2)O_(4)-TiO_(2)。利用场发射扫描电子显微镜(SEM)成像、能谱分析(EDS)、X射线衍射(XRD)、X射线光电子谱(XPS)、紫外-可见吸收光谱(UV-Vis)以及傅里叶变换红外光谱(FTIR)对复合纳米颗粒的理化性质进行表征。用细胞计数试剂(CCK-8)法研究HA@CoFe_(2)O_(4)-TiO_(2)复合纳米颗粒在暗室条件下对白血病HL60细胞的毒性,以及在光照条件下的光动力疗法(PDT)灭活效果。结合复合纳米颗粒的荧光光谱(FS)、细胞内活性氧(ROS)产量和摄取纳米颗粒水平分析,初步探究CoFe_(2)O_(4)和透明质酸与TiO_(2)结合影响PDT灭活HL60细胞的作用机制。试验结果表明,HA@CoFe_(2)O_(4)-TiO_(2)形貌规则呈球形,尺寸符合细胞摄取要求。CoFe_(2)O_(4)拓宽了TiO_(2)的可见光响应范围。暗毒性试验表明,HA@CoFe_(2)O_(4)-TiO_(2)复合纳米颗粒对HL60细胞的毒性较小。同时,与TiO_(2)和CoFe_(2)O_(4)-TiO_(2)纳米颗粒相比,HA@CoFe_(2)O_(4)-TiO_(2)对HL60细胞的光动力灭活效率高达82.6%,表明其有望成为应用于体外PDT治疗白血病的光敏剂,提高光动力效率及靶向性。

姜黄素对白血病耐药细胞HL_(60)/ADR的抑制作用

目的：研究姜黄素对白血病耐药细胞HL60/ADR的抑制作用。方法：应用MTT法检测姜黄素对细胞的细胞毒作用，流式细胞仪、荧光显徽镜观察细胞凋亡；流式细胞仪检测bcl-2蛋白表达水平。结果：姜黄素明显抑制白血病耐药细胞HL60/ADR细胞的生长，24、48、72 h的IC50分别为8．94、5．21、3．82μg/ml，姜黄素处理 HL60 72 h的IC50为 3．99μg/ml。荧光显微镜观察见核浓缩等凋亡特征性改变。AnnexinV-FTTC/PI双染见AnnexinV-FTTC单阳性细胞高达17．8％。流式细胞仪分析显示姜黄素可下调bcl-2蛋白表达。结论：姜黄素可抑制白血病耐药细胞HL60/ADR细胞的生长，与阿霉素之间无交叉耐药。

解毒化瘀药调控白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin通路研究

目的探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin信号基因表达的影响,逆转耐药的机制。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化瘀药含药血清处理后HL60/adr细胞survivin的表达;Western blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达。结果解毒化瘀药含药血清能够降低HL60/adr耐药细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα信号,降低survivin基因的表达。结论解毒化瘀药能够降低HL60/adr细胞NF-κB信号通路,影响NF-κB-survivin途径,逆转耐药。

解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/ADR耐药细胞NF-κB信号靶向干预研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/ADR细胞核周因子κB(NF-κB)信号基因表达的影响。方法:将HL60/ADR耐药细胞分为牛血清组、兔血清组、含药血清高、中、低剂量处理组和干扰素对照组,用Western blot法检测各组细胞NF-κB/p65,NF-κB/p50,IκBα的表达情况。结果:流式细胞仪检测结果显示非细胞毒作用的解毒化瘀药血清能够增加HL60/ADR细胞内柔红霉素的浓度。HL60/ADR耐药细胞NF-κB信号基因呈高表达,HL60敏感细胞未见表达,加用不同浓度解毒化瘀含药血清处理后,p65,p50和IKBa的表达均有不同程度下降,以高、中剂量组对p65的下调作用更明显。结论:解毒化瘀药对HL60/ADR细胞的耐药逆转作用是通过阻断NF-κB信号通路实现的。

蟾酥注射液对HL60/ADM细胞多药耐药的逆转作用研究

目的:研究蟾酥注射液对人耐阿霉素(ADM)的急性髓性白血病细胞HL60/ADM多药耐药(MDR)的逆转作用。方法:采用MTT法分别考察蟾酥注射液对HL60/ADM细胞增殖能力和对ADM敏感性的变化,并采用高效液相色谱法考察HL60/ADM细胞对ADM的摄取能力。结果:蟾酥注射液能抑制细胞增殖;非细胞毒剂量蟾酥注射液预作用后,ADM对HL60/ADM细胞的半数抑制浓度(IC50)显著降低(P<0.01),HL60/ADM细胞对ADM摄取能力显著增加(P<0.01)。结论:蟾酥注射液可部分逆转HL60/ADM细胞对ADM的耐药性。

HSP90β在ATRA诱导的白血病细胞株HL60耐药中的作用研究

目的:通过检测HSP90β基因在白血病细胞株HL60及其耐药株HL60/ATRA中的表达差异,探讨HSP90β基因在ATRA相关多药耐药性发生中的作用。方法:采用ATRA浓度递增及间歇诱导法建立HL60/ATRA耐药细胞株;用MTT法和流式细胞检测技术(Flow cytometry,FCM),分别检测HL60和HL60/ATRA细胞的增殖及细胞周期;RT-PCR、Western blot法检测HSP90β基因在HL60及HL60/ATRA细胞中的表达;通过MTT法检测HL60和HL60/ATRA细胞对常用化疗药物(VCR、CTX、VP-16、ADM)敏感性。结果:成功构建了白血病细胞耐药株HL60/ATRA;在mRNA和蛋白两个水平,均检测到HSP90β在耐药株HL60/ATRA中的表达较HL60明显增高(P<0.01);药敏结果显示HL60/ATRA细胞对VCR、CTX、ADM、VP-16的耐药倍数分别为10.74、5.51、4.01、3.24。结论:ATRA能够诱导HL60细胞中HSP90β高表达,经ATRA诱导后的HL60/ATRA细胞对抗癌药物的敏感性显著降低、耐药性增高,这提示HSP90β可能在ATRA相关多药耐药性的发生过程中发挥着重要作用。

人类白血病多药耐药细胞株K562/ADM、HL60/ADM的耐药性及耐药逆转的研究

目的 :研究 K5 6 2 / ADM、HL6 0 / ADM的耐药性及 Cs A对其耐药的逆转作用。方法 :MTT比色法检测细胞耐药性及 Cs A对细胞耐药性的影响 ,流式细胞仪检测 Pgp、MRP的表达及细胞内柔红霉素 (DNR)的浓度。结果 :K5 6 2 / ADM、HL6 0 / ADM对 DNR、ADM、VCR、Har、VP1 6 、MIT交叉耐药 ,对 Acla和 Ara- C基本不耐药。 K5 6 2 / ADM细胞 Pgp过度表达 ,HL6 0 / ADM细胞的 MRP过度表达。 Cs A使 K5 6 2 / ADM、HL6 0 / ADM细胞内药物浓度增加 ,逆转了 K5 6 2 / ADM、HL6 0 / ADM的耐药性 ,而对 K5 6 2、HL6 0的耐药性基本无影响。结论 :两种不同耐药机制的细胞株对 8种常用化疗药物的耐药谱相似 ,对 Acla基本不产生耐药性 ,故在防止和克服多药耐药的基础上 ,Acla可能取代DNR、ADM。环孢菌素 A(Cs A)对两种不同耐药机制的细胞株的耐药性均有逆转作用 。

姜黄素对HL_(60)/ADR细胞多药耐药逆转作用的研究

目的:研究姜黄素对白血病耐药细胞HL60/ADR多药耐药的逆转作用。方法:用不同浓度姜黄素联合阿霉素处理HL60/ADR细胞,MTT法检测药物对细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞内阿霉素的浓度及bcl-2表达水平。结果:HL60/ADR细胞经0.4、0.8μg/ml姜黄素作用24 h后,阿霉素的IC50分别为3.79、2.58μg/ml,耐药逆转倍数为1.37、2.02,细胞内ADR浓度增加,bcl-2蛋白的表达下降。结论:姜黄素能部分逆转HL60/ADR细胞的多药耐药。