血管内皮生长因子反义核酸对细胞株HL60及耐药细胞株HL60/VCR的抑制作用

目的探讨反义血管内皮生长因子(AS-VEGF)对HL60、耐药细胞株HL60/VCR的影响及其机制,包括基因水平的耐药相关基因(Bcl-2,Mcl-1,MDR1,MRP,GSTπ,TopoⅡα,TopoⅡβ)和蛋白水平的耐药相关蛋白P糖蛋白(P-gp)表达量变化。方法分子生物学方法构建AS-VEGF表达真核载体,通过脂质体转染技术将其转染至细胞株HL60和耐药细胞株HL60/VCR内,观察并绘制细胞生长曲线,ELISA法检测细胞培养上清VEGF表达量变化,RT-PCR法从mRNA水平检测细胞内耐药相关基因表达,蛋白质印迹方法从蛋白水平检测细胞表面P-gp表达。结果1.25mmol/L的AS-VEGF真核表达载体转染HL60和HL60/VCR细胞株后继续培养24和48h与未转染组比较均可明显抑制细胞生长,细胞生长减慢;转染组细胞48与24h相比较VEGF、MDR1、MRP、GSTπ和TopoⅡβ的表达量均明显减少,Bcl-2、Mcl-1和TopoⅡα表达量则无明显变化;转染组HL60/VCR细胞表面P-gp表达量48与24h相比较也明显减少。结论AS-VEGF可通过抑制白血病细胞生长,改变细胞内的微环境和细胞膜相关蛋白转运通道,降低细胞解毒能力和自我修复能力逆转白血病细胞多药耐药。

ASON对急性早幼粒白血病细胞株HL60/VCR多药耐药的逆转作用

目的:探讨反义寡核苷酸(ASON)对耐长春新碱的急性早幼粒白血病细胞(HL60/VCR)多药耐药(mdr1)的逆转效果。方法:以HL60/VCR细胞为模型,合成正、反义寡核苷酸作用于HL60/VCR细胞,采用RT-PCR方法、流式细胞术及药敏试验等观察细胞mdr-1mRNA表达、mdr-1基因产物P-糖蛋白(P-gp)的表达和对药物长春新碱(VCR)的敏感性。结果:反义寡核苷酸处理的细胞mdr-1mRNA表达、P-gp表达较正义组及HL60/VCR细胞显著降低,且可明显提高HL60/VCR细胞株对长春新碱的敏感性。结论:反义寡核苷酸具有逆转HL60/VCR细胞多药耐药的作用。其作用机制可能是抑制mdr1mRNA的转录,使P-gp的表达受到明显抑制,提高对长春新碱的敏感性。

HL60/VCR白血病细胞多药耐药机制的初步探讨

目的探讨白血病细胞产生耐药的机制,以及VEGF在白血病细胞产生耐药过程中的作用。方法采用反复暴露并逐渐提高诱导药物浓度的方法建立HL60/VCR多药耐药细胞系,MTT法检测细胞的耐药性及交叉耐药性;RT-PCR检测诱导前后mdr1、MRP、TopoⅡα、GSTπ和VEGF mRNA的表达情况。结果诱导后的HL60/VCR耐药细胞不仅对VCR高度耐药,对其他类化疗药物亦具有交叉耐药性;与HL60相比,HL60/VCR的mdr1、TopoⅡα和VEGF mRNA的表达明显增强,GSTπmRNA的表达无明显变化;HL60和HL60/VCR均不表达MRP mRNA。结论耐药基因mdr1和TopoⅡα以及VEGF共同参与HL60/VCR多药耐药的形成。

正常人骨髓基质细胞对HL-60和HL-60/VCR细胞凋亡易感性的影响

为了观察正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL对白血病敏感细胞HL-60和多药耐药细胞HL-60／VCR 凋亡易感性的影响,先建立HL-60或HL-60／VCR细胞与HFCL细胞共培养体系;采用瑞氏-吉姆萨染色和吖啶橙／ 溴化乙啶(AO／EB)染色,分别在光镜和荧光显微镜下进行形态学观察;TUNEL检测晚期凋亡细胞,流式细胞术检 测细胞周期、凋亡峰和annexin V阳性的早期凋亡细胞;Western blot检测Bcl-2、活化的胱冬蛋白酶(caspase)-3蛋 白和P糖蛋白(Pgp)的表达变化。结果表明,经topotecan(TPT)处理后的HL-60和HL-60／VCR细胞,在光镜和荧光 显微镜下均有典型的凋亡细胞形态学改变,这些改变具有时间和剂量依赖性;annexin V染色后能检测到早期凋亡 细胞;细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期减低,并有明显凋亡峰;TUNEL能检测到许多阳性细胞;同时出现活 化的caspase-3,伴有Bcl-2的表达下调,但与HFCL细胞共培养后,经TPT处理的HL-60和HL-60／VCR细胞中早期 和晚期凋亡细胞有所减少,凋亡峰减低,而且活化的Caspase-3表达减弱,Bcl-2蛋白表达上调,且以直接接触组为 甚。结论:正常骨髓成纤维样基质细胞HFCL能轻度降低白血病HL-60和HL-60／VCR细胞对TPT的凋亡易感性, 并有caspase-3和Bcl-2重要信号传导分子的参与。

LY294002对多药耐药急性白血病细胞株HL60/VCR的凋亡及细胞周期的影响研究

目的:研究磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002对多药耐药急性白血病细胞株HL60/VCR凋亡与细胞周期的影响及可能机制。方法:取耐长春新碱(VCR)的HL60/VCR多药耐药急性白血病细胞株分为未加药的对照组及加入不同浓度的LY294002(其终浓度为1.0、2.5、5.0、10μmol.L-1)组,MTT法检测2种细胞的半数抑制浓度(IC50),流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测抗凋亡蛋白Bcl-2、细胞周期调控分子CyclinD1mRNA表达。结果:与对照组比较,LY294002可明显降低HL60/VCR对VCR的IC50(P<0.05),且与剂量相关;LY294002可显著增加HL60/VCR细胞凋亡率,阻滞细胞于G0/G1期,降低HL60/VCR细胞的Bcl-2、CyclinD1mRNA的表达(P均<0.05)。结论:LY294002可能是通过影响Bcl-2及CyclinD1基因的表达,从而促进HL60/VCR细胞凋亡及抑制细胞增殖。