苦参碱和氧化苦参碱致HL7702细胞毒性研究

目的：探讨苦参碱和氧化苦参碱在体外对人正常肝细胞（HL7702）的影响。方法：①采用MTT法检测苦参碱和氧化苦参碱对肝细胞活力的影响;②采用光镜对给药后的细胞形态进行观察;③检测给予苦参碱和氧化苦参碱后,肝细胞培养上清液中的肝功能指标（ALT、AST、ALP、LDH）。结果：①MTT法显示,2.5~5mg/mL的苦参碱对HL7702细胞有明显的抑制作用（P〈0.01）,5mg/mL的氧化苦参碱能够显著性降低肝细胞活力（P〈0.05）;②光镜结果显示,给予苦参碱和氧化苦参碱后,细胞出现皱缩,变圆,体积变小,亮度增加,且药物浓度越大,呈现此状态的数目越多,苦参碱对HL7702细胞形态的影响大于氧化苦参碱;③5mg/mL的苦参碱和氧化苦参碱均能明显升高细胞上清液中的AST、ALP、LDH水平（P〈0.01或P〈0.05）,相同剂量苦参碱的上清液中AST、ALP、LDH水平的升高程度大于氧化苦参碱。结论：苦参碱和氧化苦参碱对肝脏可能具有毒性作用,且苦参碱的肝毒性作用大于氧化苦参碱。

金丝桃苷对HL7702细胞氧化损伤的保护作用及机制

目的研究金丝桃苷对人正常肝细胞HL7702氧化损伤的保护作用及作用机制。方法采用乙醇诱导建立氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率,利用相关试剂盒检测ROS、SOD、MDA、GSH水平,rhodamine 123染色考察线粒体膜电位的变化,PI染色检测细胞凋亡程度,以及Western blot评价线粒体途径相关蛋白表达。结果确定100mmol·L-1乙醇为适宜浓度建立氧化损伤模型,形态学观察发现细胞变圆并悬浮于培养液中,PI染色显示细胞发生凋亡。100μmol·L-1金丝桃苷能够降低乙醇诱导的HL7702细胞中MDA的产生,提高SOD活力。同时,使促凋亡蛋白Bax、细胞色素c(cytochrome c)、caspase 3蛋白表达降低,增加抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达。结论金丝桃苷可以保护乙醇诱导的肝细胞氧化损伤,其作用机制可能与抑制线粒体途径凋亡相关。

微囊藻毒素LR影响人肝细胞HL7702的ERK及JNK的蛋白磷酸化

微囊藻毒素（Microcystin,MCYST）是蓝藻的一些属产生的次级代谢产物,在发生水华的水体中普遍存在。微囊藻毒素LR（MCLR）是微囊藻毒素中存在最为普遍且毒性作用最强的一种。已有研究表明,微囊藻毒素可以诱发肝毒性并且与人群中的肝癌发生密切相关[1,2],因此进一步阐明其致毒机理具有重要的意义。

乙型肝炎病毒X基因对正常肝细胞HL7702凋亡影响的初步探讨

目的研究乙型肝炎病毒X基因(HBX基因)对HL7702肝细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响。方法用脂质体转染法将HBx真核表达载体pcDNA3.1(+)-X瞬时转入HL7702细胞,以转染空质粒pcDNA3.1(+)的细胞及未转染的HL7702细胞为对照。转染后72 h收集细胞标本,作以下处理:RT-PCR法检测HBXmRNA的表达,免疫荧光鉴定HBx蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;以β-actin为内参,半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA的表达量变化。结果转染72 h后,转染pcDNA3.1(+)-X真核表达载体的HL7702细胞经RT-PCR扩增出HBX片段,免疫荧光结果显示细胞内出现HBx蛋白的较强荧光;而转染空质粒组及未转染对照组经RT-PCR法及免疫荧光检测均显示无HBx表达。通过流式细胞术和半定量RT-PCR法检测细胞凋亡情况,结果显示:转染HBX的细胞凋亡率(3.38%±0.67%)相对于转染空质粒组(1.25%±0.30%)及未转染质粒组(1.40%±0.37%)凋亡率增高,差异均有显著性意义(P<0.05);转染HBx的细胞Bax mRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染质粒组明显增高,差异均有显著性意义(P<0.05),Bcl-2 mRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染质粒组明显降低,差异均有显著性意义(P<0.05)。转染空质粒组和未转染质粒组之间,对细胞凋亡率、Bax mRNA、Bcl-2 mRNA进行比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功将HBX转染入HL7702细胞,并在细胞中表达;转染后72 h HBx可上调Bax表达,而下调Bcl-2表达,表明HBx能促进HL7702细胞凋亡。

RGD活性肽对环磷酰胺诱导HL7702正常肝细胞损伤的保护作用

目的探讨含RGD序列的抗肿瘤多肽T30肽对环磷酰胺诱导HL7702细胞凋亡的保护作用。方法将HL7702细胞按一定密度分别接种于96孔板和24孔板,培养24 h后向各孔中分别加入环磷酰胺(CTX)(浓度为4μg/ml),CTX+RGD-T30(浓度依次为20、40、60μg/ml),继续培养24 h,进行WST-1、AO/EB双染、Annexin-V-FITC/PI流式细胞染色。结果 RGD-T30肽与CTX共处理HL7702细胞生长抑制明显改善,当RDG-T30肽浓度达到40μg/ml时,促进生长作用呈现正比例曲线特征。RDG-T30肽组凋亡细胞明显减少,绝大多数细胞形态饱满,几乎没有死亡细胞。CTX单独处理的HL7702细胞组24 h晚期凋亡细胞占30.2%,CTX与RDG-T30共处理细胞组凋亡细胞分别占19.2%和13.1%、7.1%。结论 T30肽对CTX诱导的HL7702凋亡具有拮抗作用。

蜂胶黄酮对环磷酰胺诱导HL7702细胞损伤的保护作用

目的探讨蜂胶黄酮(EPF)对环磷酰胺(CTX)诱导HL7702细胞凋亡的保护作用。方法将HL7702细胞按一定密度分别接种于96孔板和24孔板,培养24 h后,向各孔中分别加入CTX(4 ng/L)、CTX(4 ng/L)+EPF(20、30、40 ng/L),继续培养24 h,进行WST-1、AO/EB双染、Annexin-V-FITC/PI流式细胞染色。采用小鼠随机分组,试验组每天给予EPF 100、200、400 mg/mL灌胃,0.5 mL/支,连续给药10 d,同时注射CTX0.15 g/kg,共3 d。取血清检测过氧化氢酶(CAT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)等活性及尿素氮(BUN)含量。结果 EPF与CTX共处理HL7702细胞生长抑制明显改善,当EPF浓度达到40 ng/mL时,促进生长作用呈现正比例曲线特征。试验组凋亡细胞明显减少,绝大多数细胞形态饱满,几乎没有死亡细胞。CTX单独处理的HL7702细胞组24 h晚期凋亡细胞占30.2%,CTX与EPF共处理细胞组凋亡细胞分别占19.2%、13.1%、7.1%。结论 EPF对CTX诱导的HL7702凋亡作用具有拮抗作用,可缓解CTX引起的毒性。

茶氨酸对酒精诱导人肝HL7702细胞损伤的保护作用及机理

【目的】探究茶氨酸在酒精诱导人肝HL7702细胞损伤方面的保护作用及机理。【方法】选取500~1000 mmol范围内,梯度设置为100 mmol的6个酒精浓度处理组对HL7702细胞进行初步处理,选择不同浓度茶氨酸培养HL7702细胞,MTT法测定细胞的存活率以确定酒精造模浓度和茶氨酸最适浓度范围。以不同浓度茶氨酸预保护模型浓度酒精处理过的细胞,测定细胞的存活率,检测其过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶活性(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)及总抗氧化能力(T-AOC)的含量。【结果】初步确定酒精造模浓度为800 mmol;茶氨酸浓度在2000μg/mL以下对HL7702细胞无毒性,结合实际情况将茶氨酸给药浓度调整为200~800μg/mL;与模型组相比,茶氨酸显著提高了酒精损伤模型中HL7702的存活率,对HL7702细胞内H2O2和MDA的生成起到了一定的抑制作用,而SOD、GSH-PX活性升高,T-AOC能力也增加。【结论】茶氨酸在不同方面均被证明对酒精诱导人正常肝细胞氧化损伤具有保护作用。其作用机理是茶氨酸通过抑制酒精刺激下抗氧化关键酶活性的降低及氧化反应中间产物的产生,避免人正常肝细胞在酒精诱导下发生氧化损伤及氧化应激反应。

天麻素通过SIRT1/PGC-1α信号通路抗叔丁基过氧化氢诱导的HL7702细胞氧化损伤

目的 ：探讨天麻素对叔丁基过氧化氢诱导的人肝细胞HL7702氧化损伤的保护作用。方法：以叔丁基过氧化氢损伤人肝细胞HL7702建立氧化损伤模型,以不同浓度天麻素（5-20μmol/L）进行干预。采用MTT比色法检测细胞活力,光学显微镜观察细胞形态,罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位改变,免疫印迹实验检测细胞中SIRT1和PGC-1α蛋白的表达。结果：不同浓度天麻素（5-20μmol/L）能够提高叔丁基过氧化氢作用的细胞存活率并呈时间-剂量依赖性,确定其最佳作用时间为24 h,最佳作用浓度为10μmol/L。与对照组相比,模型组细胞氧化应激作用明显增强,而天麻素10μmol/L作用24 h后,能够显著降低活性氧和丙二醛含量,升高超氧化物歧化酶活力;抑制叔丁基过氧化氢诱导的线粒体膜电位降低并显著增加SIRT1和PGC-1α蛋白的表达。结论 ：天麻素能够抑制活性氧对HL7702细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起线粒体功能损伤并上调SIRT1/PGC-1α蛋白表达有关。

二甲基甲酰胺对HL7702肝细胞毒性及线粒体膜电位的影响

目的观察二甲基甲酰胺(DMF)对HL7702肝细胞的细胞活力、凋亡及线粒体膜电位的影响,探讨DMF引起肝细胞凋亡的可能机制。方法 HL7702肝细胞给予50、100、150、200和250 mmol/L DMF处理,于24 h后检测其细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)释放量。根据细胞毒性测试结果设置对照组及DMF染毒组(200 mmol/L)。流式细胞术检测DMF对HL7702细胞凋亡以及对线粒体膜电位的影响。结果 DMF剂量依赖性地降低HL7702细胞的存活率,其中150、200和250 mmol/L DMF组与对照组相比,细胞存活率明显降低;并且,随着DMF染毒浓度增加,释放至细胞外的LDH的含量增加,与DMF浓度呈正相关。200 mmol/L DMF染毒24 h后,与对照组相比,细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.001),线粒体膜电位降低,差异也有统计学意义(P<0.001)。结论 DMF对HL7702细胞的毒性作用具有剂量依赖性,DMF引起HL7702线粒体膜电位的改变与DMF导致细胞凋亡有关。

Lithocarpus polystachyus(Sweet Tea)water extract promotes human hepatocytes HL7702 proliferation through activation of HGF/AKT/ERK signaling pathway

Objective:Sweet Tea(ST),derived from the leaves of Lithocarpus polystachyus,is a Chinese folk medicine with wide pharmacological activities.However,the promotive effects of ST water extract on hepatocytes proliferation and its underlying mechanism remains still unknown.In the present study,the beneficial effects of ST water extract on human hepatocytes and its possible mechanism were investigated.Methods:MTT assay was used to detect the safety range of ST;HL7702 cells were divided into four groups:control group,ST low-(50μg/m L),medium-(200μg/m L)and high-concentration(800μg/m L)groups;Brd U ELISA and EDU staining were used to observe DNA content and cell proliferation;Moreover,flow cytometry was applied to analyze the distribution of cell cycle.Furthermore,the expression of cyclin D1,CDK4,HGF/c-Met,Akt,Erk1/2 were detected by Western blot.Results:It was found that ST water extract concentration-dependent promoted human hepatocytes HL7702 cell proliferation within 72 h through accumulating the cells in S phase and G2/M phase.Furthermore,ST water extract up-regulated expression of Cyclin D1 and CDK4 proteins.Moreover,ST water extract not only increased HGF expression and phosphorylation of c-Met level,but also activated the phosphorylation levels of AKT,ERK1/2.Interestingly,both of AKT inhibitor A6730 and ERK1/2 inhibitor U0126 reversed the promotive effects of ST water extract,which further confirmed that activation of AKT and ERK1/2 were involved.Conclusion:The findings reveal that ST water extract promoted HL7702 cells proliferation through the stimulation of cell cycle mediated by activating the AKT-and ERK1/2-related pathway.

用肝肾共培养体系研究细胞毒性的方法学考察

目的建立肝肾共培养体系,并证明此体系的合理性与可行性方法采用MTT法比较川楝素(20、40、80、160μg/mL)、葛根素(200、100、50、25μg/mL)、苦参碱(5、2.5、1.25、0.625 mg/mL)、汉防己乙素(50、25、12.5、6.25 mg/mL)在肝肾单独培养和共培养体系中对肝、肾细胞活力的影响。结果 2种体系中:川楝素仅对肝细胞的活力有抑制作用,葛根素对肝肾细胞均无抑制作用,苦参碱对肝细胞活力的抑制程度大于肾细胞,汉防己乙素对肾细胞活力的抑制程度大于肝细胞。结论用肝肾细胞共培养体系与单独培养体系进行实验得出的结果一致,这2种体系均可用于药物对细胞的毒性研究,其中共培养体系能更好地反映药物对靶器官的选择性。

PPAR-α激动剂Wy14643减轻肝细胞系氧化应激损伤

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α激动剂Wy14643对过氧化氢(H2O2)诱导HL7702肝细胞损伤的保护作用及其机制。方法 RT-PCR、Western blot分别检测H2O2损伤后HL7702肝细胞PPAR-αmRNA及蛋白表达。Wy14643预孵育细胞,观察其对H2O2损伤HL7702肝细胞活性、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及NF-κB活化的影响。结果 H2O2可诱导HL7702细胞PPAR-αmRNA及蛋白表达降低,200和300μmol/L H2O2损伤后蛋白表达量由0.69±0.04分别降至0.48±0.05和0.38±0.03(P<0.01);Wy14643能够抑制H2O2诱导的HL7702细胞活性降低、SOD、CAT活性下降及NF-κB的激活。结论 Wy14643减轻H2O2诱导的肝细胞损伤,并增强细胞的抗氧化能力,可能与抑制NF-κB的活化有关。

3株肝细胞在硝酸纤维素膜界面上生长的初步研究

目的在体外培养的条件下,观察3株肝细胞在硝酸纤维素膜材料上的生长情况,研究膜的细胞相容性及理化性能的改变,初步探讨硝酸纤维素膜作为一种新的组织工程膜材料用于构建生物人工肝生物反应器中细胞的载体材料的可行性。方法将生物人工肝常用的细胞:肝肿瘤细胞HepG2、C3A、永生化HL7702细胞株分别接种在浸泡处理后的硝酸纤维素膜片上常规培养,在普通光学显微镜以及扫描电镜观察肿瘤细胞在此种膜上的贴壁情况和细胞形态。同时行免疫细胞化学染色和细胞功能检测。结果细胞经常规染色、透明处理后,在光镜下观察到膜上生长的细胞保持了较好的增殖状态及细胞形态;免疫细胞化学染色结果表明,膜上细胞特异性标志物表达良好。培养液上清的生化检测表明培养细胞的主要分泌、代谢功能与常规培养无明显差异;扫描电镜下膜表面细胞呈集落式三维生长,增殖明显。结论硝酸纤维素膜能促进细胞黏附,并且与细胞有良好的相容性。硝酸纤维素膜作为一种良好的细胞黏附生长介质的同时,还具有可以在其上面直接进行相关培养物观察和检测的优点。

血清药理学方法评价叔丁基对苯二酚的安全性

运用血清药理学方法评价食品抗氧化剂叔丁基对苯二酚的毒性。大鼠灌胃700 mg/kg叔丁基对苯二酚后,分别于0.08、0.25、0.50、24.00、48.00 h采血,分离血清。以人正常肝细胞HL7702为研究对象,采用MTT法检测叔丁基对苯二酚、含叔丁基对苯二酚及其代谢物血清的细胞毒性,在倒置显微镜下观察细胞生长形态变化。结果表明:虽然高浓度的叔丁基对苯二酚会抑制细胞生长,并使细胞形态学特征改变,但叔丁基对苯二酚经体内代谢后的血清对细胞生长无显著性抑制作用。因此,在卫生标准许可范围内,叔丁基对苯二酚食用安全。

表没食子儿茶素没食子酸酯对黄曲霉毒素B1致肝细胞氧化损伤的保护作用

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对黄曲霉毒素B1(AFB1)致人正常肝细胞(HL7702细胞)氧化损伤的影响。方法:将HL7702细胞分为正常对照组、溶剂对照组(0.3%DMSO)、AFB1染毒组和低、中、高剂量EGCG组(5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL)。AFB1染毒组用60μg/mLAFB1作用细胞24h,建立肝HL7702细胞氧化应激模型。低、中、高剂量EGCG组预先用相应浓度EGCG处理细胞1h,再加入60μg/mLAFB1作用24h。用CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS),并检测细胞培养上清液中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)以及受损细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。结果:与对照组相比,AFB1染毒组ALT、AST、MDA及ROS水平明显升高,肝细胞存活率、SOD酶活性明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);与AFB1染毒组相比,EGCG处理可使ALT、AST、MDA及ROS水平明显降低,肝细胞存活率、SOD活性明显升高(均P<0.05)。结论:EGCG可明显减轻AFB1诱导的肝细胞损伤,其作用机制可能与抗氧化损伤有关。

乙型肝炎病毒全x蛋白体外诱导肝星状细胞炎症反应并促进肝细胞凋亡

目的探究乙型肝炎病毒(HBV)全x蛋白(HBwx)诱导肝星状细胞(HSCs)炎症反应和促进肝细胞凋亡的作用及其机制。方法取LX2细胞,分为对照组、脂多糖(LPS)处理组、转染HBwx处理组和LPS联合转染HBwx处理组。采用Western blot法检测自噬相关蛋白p62和LC3及炎症相关蛋白NLRP3和pro-IL表达,采用ELISA法检测培养上清IL-1β水平;收集上述各组LX2细胞培养上清刺激HL7702细胞培养,使用流式细胞仪检测HL7702细胞凋亡。结果经HBwx质粒转染的LX2细胞在细胞质表达HBwx蛋白;与正常组比,LPS组、HBwx组和LPS联合HBwx组LC3表达显著减低,而p62表达显著增强(P<0.05);与正常组比,LPS组、HBwx组和LPS联合HBwx组NLRP3和pro-IL1表达显著增强(P<0.05);与正常组比,LPS组、HBwx组和LPS联合HBwx组IL-1β分泌显著增多(P<0.05);与正常组比,LPS、HBwx和LPS联合HBwx处理HL-7702细胞凋亡水平显著增强(P<0.05);与LPS组或HBwx组比,LPS联合HBwx处理HL-7702细胞凋亡水平进一步增强(P<0.05)。结论HBwx作用于HSCs抑制自噬并促进细胞炎症反应,HSCs分泌IL-1β,诱导肝细胞凋亡。

紫薯黄酮对酒精诱导人正常肝细胞氧化损伤保护作用

目的：研究紫薯黄酮对酒精损伤人正常肝细胞（HL7702）的保护作用。方法：分别以酒精培养（摩尔浓度100、200、300、400、500、600、700、800 mm）HL7702,CCK-8检测细胞的生存率以筛查复制模型的最佳浓度以及考察紫薯黄酮对细胞的毒性的影响。并使用试剂盒比色法检测各组细胞超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢（H2O2）及总抗氧化能力（T-AOC）水平。采用统计分析软件SPSS17.0进行统计学分析。结果：建立酒精诱导损伤模型最佳浓度为500 mm;紫薯黄酮最适宜的给药范围是100~800μg/m L;200、400、600、800μg/m L的紫薯黄酮可以剂量依赖性的升高酒精损伤模型中HL7702的存活率,并提高HL7702细胞内的T-AOC、SOD、CAT及GSH-PX水平,同时降低H2O2的生成。结论：紫薯黄酮能够保护酒损伤的HL7702,其保护机制与增强T-AOC、SOD、CAT及GSH-PX活性,降低H2O2含量有关。

表没食子儿茶素没食子酸酯对肝细胞氧化损伤的初步研究

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对正常人HL7702肝细胞氧化损伤的作用。方法以正常人HL7702肝细胞为研究对象,用不同浓度EGCG (0μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL)处理细胞1 h、12 h、24 h,均以0μg/mL EGCG浓度组为对照组。倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS),生化分析检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果 EGCG浓度在40μg/mL以下时,对肝细胞存活率下降无明显影响,差异均无统计学意义(P>0.05);且5μg/mL、20μg/mL EGCG处理24 h后的肝细胞存活率分别为(108.34±4.12)%、(109.59±3.14)%,与对照组的(100.00±3.40)%比较,细胞存活率明显提高,差异均有统计学意义(P<0.05);80μg/mL EGCG处理细胞1 h后,ROS为(5.36±0.68)%,与对照组的(3.88±0.10)%比较明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);80μg/mL EGCG处理细胞24 h,与对照组的细胞存活率[(100.00±3.40)%]、LDH [(168.89±4.90) U/L]、ROS [(3.54±0.68)%]比较,细胞存活率[(40.05±7.83)%]明显降低,LDH [(195.48±11.23) U/L]、ROS [(10.99±1.54)%]显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);160μg/mL EGCG作用肝细胞1 h,与对照组的细胞存活率[(100.00±2.23)%]、LDH [(163.89±5.37) U/L]、ROS [(3.88±0.10)%]比较,肝细胞存活率[(79.87±4.72)%]明显降低,LDH [(200.72±13.45) U/L]、ROS [(8.14±0.29)%]明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);160μg/mL EGCG作用肝细胞12 h、24 h,细胞存活率分别为(16.00±0.99)%、(11.11±0.41)%,LDH分别为(199.21±13.11) U/L、(435.71±25.84) U/L,与对照组的细胞存活率[(100.00±0.34)%、(100.00±3.40)%]和LDH[(169.56±3.55) U/L、(168.89±4.90) U/L]比较差异均有统计学意义(P<0.05),同时显微镜下可见大量细胞死亡。结论低剂量EGCG (<40μg/mL)对正常人HL7702肝细胞无明显损伤作用,并具有一定的促增殖作用,高剂量下(>80μg/mL)可明显增加肝细胞氧化损伤,且随EGCG作用浓度、作用时间的增加损伤也增加。

葡萄糖-组胺美拉德产物的生成及对HL-7702细胞生长抑制和细胞周期的影响

探讨了葡萄糖-组胺美拉德产物(MRPs)和组胺(Histamine)对人正常肝细胞(HL-7702)生长抑制和细胞周期可能的作用和影响。用不同剂量的葡萄糖-组胺美拉德产物和组胺处理HL-7702细胞,用MTT方法分别检测美拉德产物和组胺对HL-7702细胞的生长抑制效果;用Annexin检测法,在流式细胞仪下观察两种药物对HL-7702细胞周期分布的影响。MRPs和组胺作用于HL-7702细胞24、48、72 h后,对细胞均有生长抑制作用,其抑制作用呈现剂量和时间依赖性。但组胺对HL-7702细胞的生长抑制作用明显强于MRPs;MRPs产物和组胺两种药物作用于细胞72 h后对细胞周期都有一定的影响,其中组胺的作用明显强于MRPs。葡萄糖和组胺生成的产物能显著消减组胺对HL-7702细胞的杀伤作用。

rhGLP-1(7-36)对肝细胞Akt/GSK3信号通路的影响

目的观察rhGLP-1(7-36)对肝细胞Akt/GSK3信号通路的影响。方法培养人HL7702细胞系至对数生长期,将其分为实验组和空白对照组,分别用含rhGLP-1(7-36)100nM的培养基、不含rhGLP-1(7-36)的培养基培养90min。用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测两组Akt、糖原合成酶激酶3(glycogen synthase kinase,GSK3)、糖原合酶(glycogen synthase,GS)水平。结果与空白对照组(1.00±0.00)比,实验组p-Akt(Thr308)蛋白相对表达水平(1.81±0.28)明显增加(P=0.01),Akt及p-Akt(Ser473)蛋白表达水平无明显变化;实验组p-GSK3α(Ser21)(1.27±0.09)、p-GSK3β(Ser9)(1.24±0.09)蛋白表达水平明显升高(P值分别为0.003、0.002),GSK3α及GSK3β蛋白表达水平无明显变化;实验组p-GS(Ser641)蛋白表达水平(0.70±0.16)降低(P=0.03),GS蛋白表达水平无明显变化。结论GLP-1可抑制GSK3/GS信号通路,激活GS活性,促进糖原合成。