人类白细胞抗原G(HLA-G)与非小细胞肺癌的研究进展

人类白细胞抗原G(HLA-G)属于非经典主要组织相容性复合体Ⅰb(MHCⅠb)类分子,包括膜结合型和可溶性HLA-G两种形式,通过相应受体调节多种免疫细胞的功能,是形成母胎耐受、肿瘤免疫逃逸的重要免疫学机制之一。非小细胞肺癌(NSCLC)在肺癌中占比最高且预后差,研究发现HLA-G的基因多态性及表达水平与NSCLC发生发展密切相关,提示HLA-G可作为NSCLC早期诊断、亚型区分、治疗及预后等潜在的生物标志物,具有辅助诊断依据的临床价值,对其机制的深入研究更可能提供NSCLC诊疗的新策略。

HLA-E、HLA-G及P16蛋白与宫颈癌患者高危型HPV感染的相关性

目的研究人类白细胞抗原(HLA)-E、HLA-G及P16蛋白与宫颈癌患者高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的相关性。方法前瞻性选择2019年1月至2022年11月于湖北民族大学附属民大医院接受治疗的宫颈癌患者82例纳入宫颈癌组,选择同期于本院接受治疗的宫颈上皮内瘤变(CIN)患者64例为CIN组,选择同期于本院健康体检的正常女性60名纳入对照组。3组均行血清HLA-E、HLA-G水平、P16蛋白及HPV分型检测。观察3组HR-HPV分布、血清HLA-E、HLA-G水平及P16蛋白表达情况;观察不同CIN分级患者血清HLA-E、HLA-G水平及P16蛋白表达情况;观察HR-HPV感染宫颈癌不同病理特征患者血清HLA-G、HLA-E及P16蛋白表达情况;分析HLA-E、HLA-G及P16蛋白与HR-HPV感染宫颈癌患者HPV的相关性。结果宫颈癌组HR-HPV检出率大于CIN组、对照组,CIN组HR-HPV检出率大于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组ⅡA期患者HR-HPV感染率高于CIN组Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级及对照组患者,宫颈癌组IB期患者HR-HPV感染率高于CIN组Ⅰ级、Ⅱ级及对照组患者,CIN组Ⅲ级、Ⅱ级患者HR-HPV感染率高于CIN组Ⅰ级及对照组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组血清HLA-E、HLA-G水平及P16蛋白阳性表达率均高于CIN组、对照组,CIN组血清HLA-E、HLA-G水平及P16蛋白阳性表达率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CINⅡ级、CINⅢ级患者血清HLA-E、HLA-G水平及P16蛋白阳性表达率均高于CINⅠ级患者,CINⅢ级患者血清HLA-E、HLA-G水平及P16蛋白阳性表达率均高于CINⅡ级患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。HR-HPV感染宫颈癌不同年龄、病理类型及是否绝经患者血清HLA-G、HLA-E水平及P16蛋白阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);不同FIGO分期、分化程度、HPV阳性分级患者血清HLA-G、HLA-E水平及P16蛋白阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析,血清HLA-G、HLA-E水平及P16蛋白与宫颈癌患者HR-HPV感染呈正相关(P<0.05)。结论高危型HPV持续感染是导致宫颈良性病变并进展为宫颈癌的重要因素。血清HLA-E、HLA-G水平升高及P16蛋白高表达是宫颈癌患者的重要特征。血清HLA-G、HLA-E水平及P16蛋白与宫颈癌患者HR-HPV感染正相关。

非经典HLA Ⅰ类分子(HLA-G和HLA-E)在人肿瘤细胞系的表达及IFN-γ的调节作用

目的：探讨非经典HLA Ⅰ类分子在人肿瘤细胞系的表达及IFN－γ的调节作用。方法：用RT－PCR法检测12种肿瘤细胞系和人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织标本HLA－G和HLA－E mRNA的表达。结果：人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织均有HLA－G和HLA－E mRNA的表达；12株肿瘤细胞中仅人T细胞淋巴瘤Karpas存在HLA－G3的mRNA表达，经IFN－γ处理后，Karpas出现HLA－G1／G5和HLA－G2／G4的表达，宫颈癌Hela细胞、黑色素瘤M21细胞和膀胱癌T24细胞出现HLA－G3 mRNA的表达；12株肿瘤细胞中有9株表达HLA－E mRNA。结论：肿瘤存在HLA－G和HLA－E mRNA的表达，IFN－γ可促进HLA－G mRNA的表达。肿瘤细胞HLA－G和HLA－E的表达可能是肿瘤逃避免疫系统监视的机制之一。

青海地区子痫前期患者HLA-GmRNA及蛋白表达研究

目的:探讨青海高原地区子痫前期患者人类白细胞相关抗原G(HLA-G)mRNA、蛋白表达情况及临床意义。方法:收集2011年9月至2011年12月在青海大学附属医院产科分娩的30例子痫前期患者和30例正常妊娠妇女的胎盘组织和血清样品,采用实时荧光定量PCR及West-ernblot分析检测HLA-GmRNA和蛋白在正常妊娠与子痫前期患者胎盘中的表达差异,并应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中可溶性HLA-G的表达。结果:①青海高原地区子痫前期患者胎盘组织中HLA-GmRNA、蛋白表达水平明显低于正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05)。②子痫前期患者血清中可溶型HLA-G(sHLA-G)浓度明显低于正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HLA-G基因转录的下调及其蛋白质表达下降,在青海高原地区子痫前期的发生发展过程中可能发挥重要作用。

卵巢浆液性癌中HLA-G的表达及临床意义

目的探讨人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)在卵巢浆液性癌(ovarian serous carcinoma,OSC)中的表达及意义。方法运用免疫组化En Vision法检测108例OSC中HLA-G的表达,分析其与临床病理特征的关系。结果 OSC中HLA-G阳性率为58.33%(63/108),HLA-G表达与肿瘤淋巴结转移、复发、发生部位、FIGO分期和MDACC分级相关(P<0.05)。生存分析显示,HLA-G阳性组生存期明显低于阴性组(P=0.015),HLA-G表达是影响预后的重要因素(P=0.01)。结论 HLAG表达提示为晚期高级别OSC,且患者预后较差,检测HLA-G表达可辅助鉴别诊断高、低级别浆液性癌。

溃疡性结肠炎和克罗恩病的临床病理特征及HLA-G在其鉴别诊断中的应用

目的探讨溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)的临床病理特征及HLA-G在其鉴别诊断中的应用。方法对15例UC和49例病灶限于结肠及回盲部的CD进行临床病理和免疫组化染色的比较。结果①跳跃式分布、鹅卵石症、肠瘘或穿孔、透壁炎、裂隙状溃疡、肉芽肿、隐窝脓肿、杯状细胞减少、幽门腺化生及淋巴细胞聚集改变在UC和CD均有显著差异;②49例CD中28例(57.1%)肠黏膜腺上皮HLA-G(+),UC及正常对照组则(-)。结论①CD较具特征性的改变有跳跃式分布、鹅卵石症、肠瘘或穿孔、透壁炎、裂隙状溃疡、肉芽肿、幽门腺化生及淋巴细胞聚集,而隐窝脓肿和杯状细胞减少更多见于UC。②HLA-G在UC和CD的表达差异使其可以作为一个指标来帮助鉴别两者。

正常妊娠和原因不明习惯性流产者HLA-G基因14bp缺失多态性研究

为研究HLA-G基因3’非翻译区14 bp缺失多态性在习惯性流产患者和正常妊娠妇女中的差异,分别提取患者蜕膜和正常女性外周血DNA。PCR扩增HLA-G基因第8外显子,产物经9%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并经EB染色后在凝胶成像仪下观察。显著性检验用SAS软件包进行四格表χ2分析。结果显示:(1)-14 bp和+14 bp等位基因频率在两组间无显著性差异;(2)与正常对照组相比,RSA患者组中-14 bp/+14 bp杂合子的比例显著升高(χ2=4.7690,P=0.0290)。结果提示,中国人群HLA-G 14 bp缺失多态性在维持正常的妊娠中可能有重要作用。

云南傣族、汉族HLA-G基因14bp插入/缺失多态性研究

14bp插入/缺失多态性是指存在于HLA-G基因第8外显子3′非翻译区(3′UTR)的一个插入/缺失多态,因其能影响HLA-GmRNA的稳定性,并进一步影响HLA-G蛋白的翻译而受到广泛关注。文章采用PCR和电泳技术对云南傣族和汉族两个人群进行了HLA-G基因14bp插入/缺失多态性的检测分析,结果显示傣族和汉族人群+14bp等位基因频率分别为31.97%和40.87%,+14bp/+14bp基因型频率分别为8.20%和17.31%,+14bp/-14bp基因型频率分别为47.54%和47.11%。与国内外已报道的其他人群的数据比较表明:云南汉族群体中HLA-G基因14bp插入/缺失的分布与其他群体相似;傣族则有自己独特的基因型和等位基因分布特点,推测其可能受到了遗传漂变的作用,但不排除自然选择作用的影响。

卵裂期胚胎sHLA-G抗原表达及其与胚胎发育和种植的关系

【目的】通过对卵裂期胚胎培养液可溶性人类白细胞抗原G(sHLA-G)的定性和定量分析,了解卵裂期胚胎sHLA-G抗原表达及其与胚胎发育和种植的关系。【方法】应用免疫发光WesternBlot了解卵裂期胚胎sHLA-G和HLA-I类抗原的表达情况;应用双抗体夹心法ELISA了解卵裂期胚胎培养液中sHLA-I类抗原的表达量与胚胎发育和种植的关系。【结果】①胚胎培养液中以sHLA-G抗原为主,其它sHLA-I类抗原量极少或不存在,因此用培养液中sHLA-I类抗原的量来估计培养液中sHLA-G的含量是可行的。②卵裂期胚胎培养液中1级胚胎sHLA-I类抗原的绝对吸光度(A)值为0.077±0.006;2级胚胎为0.064±0.002;3级胚胎为0.043±0.002;3组比较差异有显著性(P=0.014)。胚胎种植率与胚胎sHLA-I类抗原绝对A值的相关系数为0.426,P=0.004。它们的表达量与胚胎发育和种植的有关。【结论】卵裂期胚胎培养液中sHLA-G的表达量与胚胎发育和种植的有关。

中国4个民族群体HLA-G基因14bp插入/缺失多态的分布特征及其HLA-A位点的相关性

近年来,位于HLA-G基因第8外显子3′UTR的一个14 bp插入/缺失多态位点与复发性流产、自身免疫性疾病和肝癌等疾病相关而引起广泛关注。本实验室前期的研究表明,不同群体的HLA-G基因14 bp插入/缺失频率具有群体语系分布特点。文章对土族、裕固族、傈僳族和怒族进行HLA-G基因14 bp插入/缺失的基因分型,结合HLA-A基因分型数据,分析土族、裕固族、傈僳族和怒族4个民族群体中14 bp插入/缺失与HLA-A等位基因的关系。研究结果显示:(1)尽管HLA-G基因14 bp插入频率在不同群体中的分布具有各自群体的特点,但遵循着按语系及语族分布的规律,除汉藏语系汉语族与阿尔泰语系蒙古语族无差异外,语族间差异明显;(2)不同群体中,14 bp插入与不同的HLA-A等位基因相关联。

HLA-G在生殖系统癌中的检测:免疫组织化学研究

为检测生殖系统癌有无 HL A- G表达 ,采用免疫组化 L DP法对 2 2 3例生殖系统癌手术切除标本进行了鼠抗 HL A-G单克隆抗体染色 ,观察了 HL A- G在乳腺癌 (n=10 0 )、卵巢癌 (n=30 )、子宫颈癌 (n=30 )、子宫内膜癌 (n=40 )、前列腺癌 (n=2 0 )和睾丸胚胎癌 (n =3)中的表达与分布。结果发现 ,除睾丸胚胎癌外 ,生殖系统其余部位癌标本可见到 40～5 7.5 %的 HL A- G阳性表达。HL A- G阳性反应物在癌细胞内呈颗粒状及均质状 ,主要分布于细胞浆。结果提示 ,HL A- G表达可能是肿瘤生物学中的普遍现象 ,生殖系统癌细胞在发生和发展过程中其基因表达有可能出现反分化现象 ,开始表达HL A- G ,从而使癌细胞产生免疫耐受 。

HLA-G多态性与妊娠高血压综合征相关性研究

目的 :探索HLA G与妊娠高血压综合征的发生是否存在关联。方法 :采用非同位素地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术 ,对上海地区 5 4例妊娠高血压综合征 (Pregnancy inducedHypertension ,PIH)病人和 14 6例正常孕妇对照进行HLA G等位基因分型。结果 :在正常对照组及妊高征组中均可检出 9种HLA G等位基因 :G 0 10 11、G 0 10 12、G 0 10 13、G 0 10 18、G 0 10 3、G 0 10 4 1、G 0 10 4 2、G 0 10 4 3、G 0 10 5N。其中G 0 10 11在PIH病人和正常对照组中均是最常见的等位基因 ,各占31 4 8%和 37 33% ,其次是G 0 10 13分别为 2 5 0 0 %和 2 0 2 1% ,G 0 10 4 1分别占 18 5 2 %和 18 4 9%。检出的各等位基因在两组之间比较均无显著性差异。结论 :HLA

HLA-G在子痫前期患者与正常妊娠胎盘中的差异表达

目的通过检测人类白细胞相关抗原-G(HLA-G)在子痫前期患者与正常胎盘组织中的表达,探讨HLA-G在子痫前期中的表达意义。方法采用半定量逆转录-聚合酶链技术(RT-PCR)及免疫印迹(Western blot)分析技术分别检测了24例子痫前期患者(观察组,轻度子痫前期12例,重度子痫前期12例)及24例年龄相仿的正常晚期妊娠胎盘组织(对照组)中HLA-G的表达差异。结果子痫前期患者胎盘组织中HLA-G基因与蛋白表达水平均显著低于正常妊娠组,两者比较差异有统计学意义(P<0.01),轻度与重度子痫前期比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论子痫前期胎盘组织HLA-G的表达明显下降,这一异常可能参与了子痫前期的发生和病理生理过程,但不能作为病情严重程度的筛选指标。

母儿中HLA-G 14bp插入/缺失多态性在早发型、晚发型重度子痫前期和正常妊娠中分布的差异

目的:探讨早发型、晚发型重度子痫前期和正常妊娠中母儿HLA-G 14bp插入/缺失多态性分布的差异。方法:(1)分析早发型重度子痫前期31例,晚发型重度子痫前期25例,正常妊娠组30例;(2)采用聚合酶链反应技术(PCR),对3组母儿进行HLA-G基因第8外显子14bp插入/缺失多态性的等位基因分型,分别比较3组母亲之间和3组新生儿之间等位基因及基因型的频率分布,通过母/儿基因型配伍,比较3组间基因型配伍频率分布的差异。结果:(1)早发型重度子痫前期组母/儿基因型配伍为母缺失纯合子(-/-14bp)/儿杂合子(+/-14bp)出现的几率要高于晚发型组(χ2=5.034,P=0.025),其和正常妊娠组相比有升高的趋势(χ2=3.685,P=0.055);早发型重度子痫前期组母/儿基因型配伍为母杂合子(+/-14bp)/儿缺失纯合子(-/-14bp)出现的几率要低于正常妊娠组(χ2=3.985,P=0.046);(2)正常妊娠新生儿组HLA-G 14bp缺失多态性等位基因频率分布高于早发型组(χ2=6.270,P=0.012),缺失纯合子(-/-14bp)基因型频率分布高于早发型组(χ2=6.139,P=0.013)。结论:(1)早发型重度子痫组母/儿HLA-G 14bp插入/缺失多态性基因型配伍的不同可能引起母儿之间免疫耐受异常,导致了早发型重度子痫前期的发生;(2)胎儿HLA-G 14bp缺失多态性可能降低了早发型重度子痫前期的发生。

细胞膜表达的HLA-G诱导免疫耐受性树突状细胞的产生

为了探讨体外诱导免疫耐受性树突状细胞(dendritic cell,DC)产生的方法及其机制,利用人HLA-G1真核表达载体转染K562细胞并与DC共培养后,用流式细胞术检测DC表面CD80、CD86、ILT3和ILT4分子表达情况,同时采用氚胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测DC对T细胞功能的影响。结果表明,膜表达的HLA-G1分子与树突状细胞作用后,DC表面免疫共刺激分子CD80、CD86表达下调,而抑制性分子ILT3、ILT4表达上调。HLA-G1作用后DC异基因抗原诱导淋巴细胞增殖的活性明显下降。结论:HLA-G1分子可以在体外条件下,下调DC表面免疫共刺激分子水平,促进ILT3、ILT4表达,诱导免疫耐受性树突状细胞产生。

sHLA-G对复发性流产患者滋养细胞侵袭功能的影响

【目的】探讨外源性可溶性人类白细胞相关抗原G(sHLA-G)对不明原因复发性流产(RSA)患者滋养细胞侵袭功能的影响,为探索RSA的有效治疗措施提供依据.【方法】正常组30例,为正常早孕人流患者,无自然流产史,孕周8-10周;RSA组20例,相应孕周RSA患者,绒毛组织20例。滋养细胞原代培养,分离绒毛外滋养细胞,正常组患者每例滋养细胞接种1瓶、RSA患者每例3瓶备实验用。正常组及RSA对照组、研究1组、研究2组分别以生理盐水、生理盐水、5×10-4/L%终浓度sHLA-G、0.1%终浓度sHLA-G干预培养16 h,取悬浮细胞获得绒毛外滋养层细胞(EVCT)团,加入CD146单克隆抗体,采用流式细胞仪检测各组滋养细胞CD146阳性率。【结果】①正常组EVCT CD146阳性率为(63.29±6.76)%,明显高于RSA对照组(10.61±3.34)%,P<0.01。②研究1组EVCT的CD146的阳性率为(30.61±7.52)%,较RSA对照组显著升高,P<0.01;研究2组EVCT的CD146的阳性率为(64.15±9.54)%,显著高于研究1组及RSA对照组,P均<0.01,与正常组比较差异无统计学意义,P>0.05。【结论】外源性sHLA-G干预可显著提高RSA患者EVCT侵袭功能,可望成为RSA的有效治疗措施之一。

造血干细胞移植后HLA-G表达与移植物抗宿主反应的相关性研究

背景长期以来,许多研究者花费大量精力致力于研究移植排斥与存活相关的机制,但对造血干细胞移植、器官移植的了解依然缺乏。自从上世纪90年代发现HLA-G在诱导母亲与胎儿耐受起着重要的生理作用以来,研究HLA-G作用于异体移植的观点已经得到有力支持。一些研究报道已经证实,同种移植中HLA-G的出现以及可溶性sHLA-G的血清/血浆水平的增加与更好的移植耐受,并增加移植物的存活都有相关性。目的本研究确定造血干细胞移植后血浆sHLA-G水平和单个核细胞(mononuclear cells)膜HLA-G表达与移植物抗宿主反应的关系。方法 225名首次造血干细胞移植患者依据移植物抗宿主反应的活性,分为急性移植物抗宿主反应组(acute GVHR)和慢性移植物抗宿主反应组(chronic GVHR),分别为96名和129名。健康献血者95名作为对照组。流式细胞法分析单核白细胞膜HLA-G(mHLA-G)表达。ELISA法检测血浆中可溶性HLA-G(sHLA-G)含量。ROC曲线评价sHLA的临界值与预判GVHR活性的相关性。RT-PCR和Western印迹分别分析HLA-G mRNA表达和蛋白一致性。免疫组化染色检测12名移植患者皮肤组织HLA-G表达状态。结果外周血单个核白细胞在acute GVHR组和chronicGVHR组都有低表达。急性组外周血中单核细胞CD14+mHLA-G1+细胞占(45.53±17.32)%,而慢性组中只有(10.22%±5.78)%,两者比较差异有统计学意义。sHLA-G5表达水平在急性组有显著性增加。sHLA-G5预判急性GVHR的最佳临界值是253.9μg/L,有很高的诊断准确度。12名acute GVHR患者中10名皮肤组织HLA-G表达阳性。RT PCR和Western印迹分析显示急性GVHR组的血浆sHLA-G5水平显著高于慢性组。结论 ROC曲线分析得出血浆sHLA-G5水平的临界值253.9μg/L可用于预测造血干细胞移植后移植物对宿主的急性排除反应。单核细胞CD14+HLA-DR-HLA-G+细胞具有干细胞特征,该细胞将可能用于移植排除反应的预防和治疗。

HLA-G蛋白及基因在子宫内膜异位症在位和异位内膜中的表达

目的探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)基因及蛋白在子宫内膜异位症(EM)在位和异位内膜组织中的表达及其生物学意义。方法应用免疫组化法和原位杂交法检测38例子宫腺肌症、30例卵巢子宫内膜异位症异位内膜及在位内膜、20例子宫肌瘤患者(对照组)在位子宫内膜中HLA-G蛋白和基因的表达。结果HLA-G蛋白和基因在子宫内膜异位症患者异位和在位内膜组织中的表达均明显高于对照组(P<0·01),但在异位内膜和在位内膜的表达无明显差异(P>0·05)。HLA-G蛋白在EM不同临床分期的表达无明显差异(P>0·05),在增生期和分泌期子宫内膜的表达无差异(P>0·05)。结论HLA-G的表达可能与子宫内膜异位症的发病有关。

药物对卵巢癌裸鼠移植瘤组织中HLA-G和HLA-E表达的影响

目的探讨天花粉蛋白、米非司酮、顺铂在卵巢恶性肿瘤治疗中的作用机制。方法培养卵巢癌OVCAR3细胞株。制备人卵巢癌裸鼠移植瘤模型。将裸鼠随机分为5组:对照组、天花粉蛋白组、米非司酮组、顺铂组、顺铂和米非司酮联合用药组。观察各组裸鼠皮下移植瘤体积,采用RT-PCR方法和流式细胞技术检测其中人类白细胞抗原G(HLA-G)、人类白细胞抗原E(HLA-E)mRNA和蛋白表达情况。结果(1)各用药组移植瘤体积均明显小于对照组(P<0.01),米非司酮组和顺铂组对肿瘤的抑制率明显低于联合组(P<0.01)。(2)和对照组比较,HLA-G、HLA-E、mRNA和蛋白表达在顺铂组无明显改变(P>0.05),在其余各组都显著降低(P<0.01)。HLA-GmRNA和蛋白表达之间呈正相关(r=0.692,P<0.01)。HLA-EmRNA和蛋白表达之间呈正相关(r=0.472,P<0.01)。HLA-GmRNA和蛋白表达与HLA-E呈正相关(r分别为0.388和0.668,P<0.05)。结论与顺铂不同,天花粉蛋白和米非司酮的抗肿瘤作用机制之一是能够明显下调肿瘤组织中HLA-G和HLA-E的表达水平,同顺铂联合使用,有望取得更好的治疗效果。

血管内皮细胞(ECV304)表达的HLA-G1对NK细胞杀伤活性的抑制作用

目的:证实HLA-G1分子能够抑制NK细胞对同种血管内皮细胞系的杀伤作用。方法:采用脂质体介导的DNA转染技术,以构建的真核表达质粒pcDNA3-HLA-G1转染人脐静脉内皮细胞系ECV304,再用免疫荧光法检测表达的HLA-G1分子。并用MTT比色法检测HLA-G1对NK细胞杀伤活性的影响。结果:ECV304细胞上可稳定表达HLA-G1。NK细胞对空质粒pcDNA3转染的ECV304细胞的杀伤率为(50.6±18.1)%;而对pcDNA3-HLA-G1转染的ECV304细胞的杀伤率为(29.7±11.4)%,两者差异具有显著意义(P<0.01)。结论:HLA-G1分子可明显抑制NK细胞对同种血管内皮细胞的杀伤效应。