单分子实时测序在HLA基因分型中的应用初探

目的 分析单分子实时(SMRT)测序技术判断HLA基因型、单体型的准确性,以探讨该方法应用于临床的可行性。方法 留取19例需行肾移植的患者血液标本,提取DNA后利用SMRT测序技术检测样本基因序列,并利用PCR-SBT方法验证其准确性。结果 SMRT技术可鉴定出19例样本的HLA基因型和基因单体型,且结果与PCR-SBT方法相符。1和14号样本PCR-SBT方法的C位点结果存在模棱两可现象,结果为HLA-C*03:02/04;03:03/132,SMRT技术可直接区分,结果为HLA-C*03:02:02,03:03:01。另外,SMRT方法在1号样本的B位点发现新的HLA等位基因。结论 SMRT测序技术应用于HLA高分辨率分型具有高度准确性,在HLA单体型分析具有精准定位多个长间距突变位置的独特优势。

广西汉族婴幼儿血管瘤与HLA-DQA1，-DQB1基因的相关性

目的探讨HLA基因连锁不平衡情况与婴幼儿血管瘤发病的相关性。方法 77例广西汉族婴幼儿血管瘤为实验组,并选择103例汉族健康正常儿童作为正常对照组,应用聚合酶链反应—序列特异性引物(PCR-SSP)法分析研究对象的HLA-DQA1,-DQB1基因位点的多态性。根据等位基因及单倍体情况分别进行两组间比较,分析血管瘤与HLA-DQA1,-DQB1等位基因及单倍体的相关性。结果与正常对照组相比,婴幼儿血管瘤组中HLA-DQA1*0102基因频率显著降低(P=0.003);单倍型HLA-DQA1*0401-DQB1*0301显著降低(P=0.008)。结论在广西地区的汉族人群中,HLA-DQA1*0102等位基因及单倍型HLA-DQA1*0401-DQB1*0301可能与该地区汉族婴幼儿血管瘤的遗传易感性相关联。

亲缘HLA单倍体相合高剂量外周血造血干细胞移植后aGVHD与生物标志物表达的关系

目的分析亲缘人类白细胞抗原(HLA)单倍体相合非体外去T细胞高剂量外周血造血干细胞移植(Haplo-HDPSCT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)临床特征,以及程序性死亡受体-1(PD-1)、程序性死亡受体-配体1(PD-L1)在aGVHD后的表达。方法选取2004年1月-2017年12月采用Haplo-HDPSCT移植模式进行移植的154例患者,分析aGVHD发病率、发生部位,以及发生aGVHD后与PD-1、PD-L1的关系。结果(1)移植后Ⅰ~Ⅳ度aGVHD的累计发生率为(61.04±3.92)%,其中Ⅱ~Ⅳ度和Ⅲ~Ⅳ度aGVHD的累计发生率为(37.69±4.50)%和(11.69±3.05)%;皮肤型aGVHD的累计发生率最高,其次为肝脏、消化道;(2)在aGVHD患者中,移植后第30天PD-1血清水平高于无aGVHD患者,III~IV度aGVHD患者移植后第60天PD-1血清水平高于无aGVHD患者,PD-1水平预测aGVHD曲线下面积(AUC)在移植后30 d和移植后60 d为0.857(P=0.048)和0.750(P=0.033)。结论采用Haplo-HDPSCT移植模式虽然aGVHD发生率略高,但重度aGVHD发生率无明显增高,发生部位以皮肤为主,表明此种移植模式是可行的。移植后PD-1水平的升高可以预测aGVHD的发生,对临床诊断的确立能提供帮助。

HLA不全相合无关供者或单倍体外周血干细胞移植治疗X连锁无丙种球蛋白血症

异基因造血干细胞移植是目前可治愈X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)的唯一方法。该研究病例1为4岁男性患儿,行HLA不全相合无关供者外周血干细胞移植;病例2为儿童期起病的24岁男性患者,合并原发皮肤肢端CD8+T细胞淋巴瘤,行单倍体外周血干细胞移植。两者均采用减低毒性的清髓性预处理方案,并用后置环磷酰胺、兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白、甲氨蝶呤和环孢素预防移植物抗宿主病(GVHD)。病例1+11 d (移植后为"+")中性粒细胞及血小板均植入,+90 d供者嵌合下降,经供者淋巴细胞输注后于+150 d恢复。病例2移植后+20 d中性粒细胞植入,+87 d血小板植入,+30 d为完全供者嵌合。两患者的相关指标(IgG、IgM、IgA和外周血中CD19+B细胞比例)分别于移植后2个月内、1年余恢复正常。两患者均未发生急性GVHD,病例1供者淋巴细胞输注后出现局限性慢性皮肤GVHD,经治疗后好转。该研究首次报道采用HLA不全相合无关供者或单倍体外周血干细胞移植联合后置环磷酰胺方案,配合改进的预处理方案成功治疗2例XLA患者,为供者的选择提供了新的途径。

不同类型造血干细胞移植术后重型β-地中海贫血患儿长期生存质量情况

目的了解同胞人类白细胞抗原(HLA)全合、非亲缘HLA全和及单倍体造血干细胞移植术后重型β-地中海贫血患儿长期生存质量情况。方法选取2012—2019年于广西医科大学第一附属医院干细胞移植病区收治的不同移植类型的133例重型β-地中海贫血患儿为研究对象,其中男87例,女46例,平均年龄为5.39岁。使用单因素分析和多重线性回归分析重型β-地中海贫血患儿造血干细胞移植术后长期生存质量的相关因素。计量资料采用独立样本t检验或单因素方差分析,计数资料采用χ2检验。结果133例重型β-地中海贫血患儿及其家长参与本次问卷调查。急性移植物抗宿主病(GVHD)发生率为14.3%(19/133),慢性GVHD发生率为3.8%(5/133)。接受非亲缘HLA全合移植的患儿生活质量评分均较高,急性GVHD、慢性GVHD和合并症发生率均低于接受单倍体造血干细胞源移植的患儿(均P<0.05)。外周血干细胞移植(PBSCT)或脐血干细胞移植(UCBT)、PBSCT+骨髓移植(BMT)、BMT、BMT+UCBT均对生活质量无明显影响(均P>0.05)。单因素分析表明年龄(B=-3.234,P<0.001)、慢性GVHD(B=-19.452,P=0.001)、并发症(B=-23.327,P<0.001)和移植时长(B=13.369,P<0.001)与移植后重型β-地中海贫血患儿生活质量相关,其他因素如性别、移植物类型、供者类型、HLA是否相合、供受者血型是否相合、GVHD预防方案、急性GVHD与患儿生活质量均无显著相关性(均P>0.05)。多元线性回归分析表示患儿年龄越大、并发症种类越多,患儿移植后生活质量越差,而随着移植后时间延长,患儿生活质量越好(均P<0.05)。结论有合适供者重型地中海贫血患儿尽早进行异基因造血干细胞移植,注重控制移植并发症,保证患儿移植后生活质量。

亲缘HLA单倍体相合与同胞HLA全相合外周血造血干细胞移植术后患者间质性肺炎的发生及疗效比较

目的比较恶性血液病患者行亲缘HLA单倍体相合非体外去T细胞外周血造血干细胞移植（RHNT-PBSCT）与同胞HLA全相合非体外去T细胞（MSNT）-PBSCT术后间质性肺炎的发生率及其疗效。方法以2006年1月至2014年12月行RHN^PBSCT术的109例恶性血液病患者为研究对象，以同期行MSN-PBSCT术的125例患者为对照，对两组患者间质性肺炎的发生情况和采用更昔洛韦为主联合肾上腺糖皮质激素治疗后的疗效进行比较研究。结果RHN-PBSCT和MSN-PBSCT患者组间质性肺炎发生率分别为15．60％（17／109）、13．60％（17／125）（P=-0．150），治疗有效率均为76．47％（13／17）（P=-0．536），差异均无统计学意义。单因素分析结果显示急性移植物抗宿主病是影响RHNT-PBSCT术后发生间质性肺炎的危险因素（P=0．001）。结论行RHN％PBSCT术后的恶性血液病患者，与行MSN-PBSCT术后的患者比较，间质性肺炎的发生率并不增高，采用更昔洛韦为主联合肾上腺糖皮质激素治疗后两组疗效相当。