因HLA和CD36复合抗体致血小板输注无效患者的配型策略

目的为HLA和CD36复合抗体所致血小板输注无效(PTR)患者寻求相合或相容的供者血小板输注。方法采用ELISA方法检测PTR患者的血小板抗体及HLA⁃Ⅰ类抗体特异性;运用MATCH IT!和HLA Matchmaker软件,分析患者HLA⁃Ⅰ类抗体特异性及相应抗原决定簇(epitopes);采用HLA⁃SSO分型技术,获得供、患者的HLA基因型;根据HLA⁃I类抗原交叉反应组(CREG)或HLA表位配型(Eplet)策略,寻找与PTR患者相合或相容的供者血小板;通过血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(MAIPA)和血小板免疫荧光流式检测(PIFT)鉴定匹配程度;最后,通过血小板计数纠正增加指数(CCI)评估血小板输注效果。结果2名PTR患者体内检测到针对HLA⁃Ⅰ类和CD36的复合抗体,且CD36流式表型为Ⅰ型缺失;抗体特异性检测结果显示,患者1和患者2的血清中存在高频的HLA⁃Ⅰ类抗体,PRA分别为56%(54/96)和53%(51/96);运用HLA的CREG和Eplet配型策略,在CD36缺失供者库分别筛选到与患者1匹配等级C的供者1名,与患者2匹配等级D的供者1名,且选择的供者均规避患者HLA⁃Ⅰ类抗体表位所针对的抗原;MAIPA和PIFT结果亦证实患者与供者血小板无免疫反应,且患者2输注相容血小板24 h CCI>4.5。结论针对HLA和CD36复合抗体所致PTR患者,可联合运用血清学交叉配型、HLA⁃CREG及Eplet配型策略,选择CD36缺失,规避HLA⁃Ⅰ类抗体对应抗原且HLA表位匹配的供者血小板。

HLA-A,B,DRB1单体型频率计算及其在骨髓库中的应用

目的从群体资料计算HLAA,B,DRB1三座位单体型频率,并用于骨髓库寻找HLA匹配供者。方法根据HLA表型群体资料,使用最大数学预期值算法(ExpectationMaximization,EM)计算HLA三座位单体型频率。通过实例运算介绍HLA表型频率以及发现HLA匹配无关供者的概率。结果①使用DNA基因分型技术鉴定12193例无关汉族健康个体HLA表型,计算求得HLAA,B,DRB1单体型频率。②预期概率与观察结果吻合,并用于评估骨髓库的最适大小。结论使用EM算法估计大样本汉族群体HLAA,B,DRB1三座位单体型频率,结果可靠,可用于评估骨髓库的最适大小和组份。

3例父子间HLA完全相合家系及1例造血干细胞移植后临床分析

HLA完全相合供者是造血干细胞移植成功的关键因素。父母与子女多数为半相合,两代间HLA完全相合的情况很少见。本室采用PCR-SSP技术对患者及其亲属进行HLA低分辨分型检测。结果在两代间HLA低分辨配型结果中共发现3例父子间完全相合病例,其中1例在本院按单倍型移植预处理方案行造血干细胞移植术,术后造血恢复良好,未发生移植物抗宿主病(GVHD)。术后定期随访嵌合体检测结果均为100%供者型嵌合,融合基因MLL-ENL定量检测结果均为阴性,现已健康生存2年余。结论:子女与其父母HLA完全相合是因为父母间具有1条相同的单倍体,这条相同的单倍体多见于人群中高频且呈显著连锁不平衡单倍型。1例HLA完全相合父供子单倍体造血干细胞移植病例,术后未发生GVHD,且长期健康生存,供临床参考。

反向PCR-SSOP技术行HLA-AB分型与临床应用

建立快速、准确的DNA分型技术并用于临床移植前HLA AB配型 ,以弥补血清学分型技术的局限性。采用反向聚合酶链反应 序列特异寡核苷酸探针杂交技术 (反向PCR SSOP)进行DNA分型 ,可检出HLA A( 0 10 1- 80 0 1)和B( 0 70 2 1- 82 0 1)等等位基因。结果表明 ,发现利用反向PCR SSOP技术对所有样本分型均获成功 ,无假阳性和假阴性结果出现 ;美国洛杉矶加州大学 (UCLA)质控细胞DNA分型结果与UCLA公布的测序结果一致 ;血清学与基因分型相比 ,血清学结果HLA A错检率 6 .4 %和HLA B错检率为 7.4 %。 2例白血病病人分别有一个HLA抗原血清学方法不能检出。结论提示 ,反向PCR SSOP技术用于HLA分型分辨率高 ,简单快速 ,结果直观、准确 ,分型结果较血清学方法更加精确 ,可适用于临床应用。

HLA-Ⅰ类配型血小板输注治疗HSCT和血液病患儿效果

目的探讨HLA-Ⅰ类配型血小板输注在造血干细胞移植和血液病患儿血小板减少时提高血小板输注的疗效。方法在5例造血干细胞移植患儿和3例急性白血病患儿骨髓抑制期血小板输注无效时输注HLA-Ⅰ类半相合/相合血小板,以24h血小板校正计数指数(CCI)、判定输注效果。结果8例进行HLA-I类配型血小板输注的患儿中,HLA-I类半相合或1个位点不合血小板输注者7例,共提供HLA-Ⅰ类半相合血小板输注者43例次;HLA-Ⅰ类全相合血小板1例,共提供HLA-Ⅰ类全相合血小板2例次。4例为父母供者,共提供10例次血小板输注,24hCCI值为18.24±2.45;4例为非血缘关系供者,共提供35例次血小板输注,24hCCI值为8.78±1.47;父母供者血小板输注后24hCCI值明显高于非血缘关系供者。8例患儿血小板配型输注前后24hCCI自身对照,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论对于血小板无效输注的造血干细胞移植和血液病患儿,输注HLA-Ⅰ类半相合/相合血小板可明显增强血小板输注的疗效,尤其以直系亲属供者更明显。

脐血库HLA匹配机率分析

对广州脐血库 1998年以来保存的 30 0 0份脐血和 10 6 0名患者进行回溯分析 ,分析患者在脐血库中搜寻非亲缘脐血的HLA匹配结果 ,以探讨患者找到适于移植的非亲缘脐血的可能性。结果表明 ,6 /6HLA全相合的患者有 119人 (11.2 3% ) ,4 /6以上相合的患者高达 992人 (93.5 8% )。其中 ,分别有 6 1.2 9% ,89.79%的患者可以找到总有核细胞 (TNC)剂量≥ 3.7× 10 7/kg ,≥ 2 .0× 10 7/kg的 4 /6以上HLA相合脐血 ,相应的体重最高者分别为 79kg和 175kg。结论 :脐血库容量在 30 0 0份以上就可以有HLA 93%的匹配率。由于不同体重对脐血TNC数量要求更高 ,广州脐血库能够满足 30 % - 80 %成人患者的需要。在为患者寻找造血干细胞移植非亲缘供者时 ,无论成人或儿童患者 ,在寻找骨髓供者的同时 ,都有必要寻找适宜的脐血供者。

匹配HLA位点对肾移植术后长期存活的影响

目的分析供受者匹配HLA分布频率与肾移植术后长期存活之间的关系,以揭示匹配HLA位点对移植效果的不同影响。方法采用HLA血清学分型方法,比较分析肾移植术后存活10年以上患者和10年以下患者供受者匹配HLA分布频率的差异。结果 490例存活10年以上的肾移植术后患者,供受者匹配HLA A位点A2、B5、B35和DR9抗原分布频率显著高于存活10年以下患者(259例)。然而,HLA B位点B13、B46抗原在存活10年以上供受者匹配HLA的分布频率显著低于存活10年以下患者。结论供受者HLA-A2、B5、B35和DR9抗原相容的移植,可能有益于肾移植受者的长期存活。

输注经照射的HLA部分相合的异基因单个核细胞治疗晚期肾细胞癌

背景与目的:肾细胞癌是一种对免疫治疗敏感的肿瘤,包括了非清髓性异基因移植。然而由于严重的毒性,许多转移性肾细胞癌并不适合非清髓性异基因移植。这促使了其他一些新的异基因免疫治疗的发展。本研究评价输注经照射的HLA部分相合的异基因单个核细胞治疗晚期肾细胞癌的有效性和安全性。方法:选择经病理证实的晚期肾细胞癌患者,予输注经照射的HLA部分相合的异基因单个核细胞。每2个月输注1次,治疗有效或稳定者继续输注,直至疾病进展或出现不能耐受的不良反应或患者(或供者)拒绝继续使用。结果:8例患者进入本研究。6例患者每次输注后每日口服沙利度胺100mg至300mg两个月,1例达到持久的完全缓解(CR),5例稳定(SD),2例进展(PD)。8例患者的中位疾病无进展时间为292d,中位生存时间为879d以上。毒性反应轻微。结论:输注经照射的HLA部分相合的异基因单个核细胞治疗晚期肾细胞癌有了一定疗效,值得进一步研究。

肾移植中随机HLA配型的研究

为了解随机ＨＬＡ 配型的供受者配合率的多寡，为器官移植的广泛开展提供一些基础性资料，对３３６ 例肾移植供受者随机的ＨＬＡＡ、Ｂ 和ＤＲ 抗原配型做了分析。ＨＬＡ６ 个抗原完全错配率为２４ ．４０ ％ （８２／３３６） ，５ 个抗原错配率为３３ ．３３ ％ （１１２／３３６） ，４ 个抗原错配率为２７ ．６８ ％ （９３／３３６） ，３ 个抗原错配率为１１ ．９１ ％ （４０／３３６） ，２ 个抗原错配率为２ ．６８ ％ （９／３３６） ，１ 个抗原错配率和０ 个抗原错配率为０ 。随机ＨＬＡＡ、Ｂ 和ＤＲ１ 个抗原配合的在ＨＬＡＡ 抗原为４９ ．７ ％ （１６７／３３６） ，Ｂ 抗原为２７ ．７ ％ （９３／３３６） ，ＤＲ 抗原为３１ ．８ ％ （１０７／３３６） 。２ 个抗原配合的在Ａ 抗原为４ ．７６ ％ （１６／３３６） ，Ｂ 抗原为２ ．０８ ％ （７／３３６） ，ＤＲ 抗原为３ ．２７ ％ （１１／３３６） 。提示：完全配合的ＨＬＡ 抗原和５ 个ＨＬＡ 抗原配合的几率极低。在随机肾移植供受者中，ＨＬＡ 抗原Ａ、Ｂ 和ＤＲ 抗原位点的２ 个等位基因完全配合的几率很低。

寻找HLA匹配无关供者概率曲线的计算及其应用

目的 建立在骨髓库中寻找到HLA匹配供者概率曲线P的回归方程式 ,并用于评估骨髓库的最适大小。方法 在哈迪 -温伯格群体中的HLA单体型频率可以从供者表型资料求得。寻找到一个HLA匹配供者的概率可以表示成供者数和HLA单体型频率的函数。使用对数曲线拟合方法推导出该概率曲线的回归方程。结果 笔者推导出在中国人骨髓库中寻找到至少一例HLA -A ,B ,DR抗原全配合供者概率的回归方程式为P =- 0 .6 7+0 .2 5lgN(N为骨髓库中的供者数 ,介于 5万到 1 0 0万 )。在骨髓库供者数达到 75万人时 ,大约 80 %的患者可以找到HLA配合供者。结论 找到HLA配合供者概率取决于骨髓库供者人数的多寡以及HLA单体型频率。HLA群体遗传学资料有助于决定骨髓库的最适大小及其供者成员的组成。

非亲缘HLA相合骨髓移植治疗一例骨髓增生异常综合征

为了探讨非亲缘HLA相合供者骨髓移植 (UD BMT)治疗骨髓增生异常综合征 (MDS)的可行治疗方案和疗效 ,采用HLA配型相合的非亲缘骨髓移植治疗 1例骨髓增生异常综合征 难治性血细胞减少伴多系病态造血(MDS RCMD)男性患者 ,31岁。预处理方案为马利兰、环磷酰胺、阿糖胞苷、甲基环己亚硝脲和抗胸腺细胞球蛋白。以霉酚酸酯、环孢菌素A加短疗程的甲氨喋呤预防移植物抗宿主病 (GVHD)。结果显示 ,移植后 10天中性粒细胞 (0 .5× 10 9 L ,2 0天血小板升至 5 8× 10 9 L ,3个月血红蛋白升至 114g L ,无GVHD发生 ;移植后无病存活时间已达 9个月。结论 :非血缘HLA相合骨髓移植治疗骨髓增生异常综合征是可行而且有效的。

应用骨髓库HLA资料构建高匹配诱导多能干细胞库的可行性研究

目的研究利用骨髓库HLA资料建立高匹配诱导多能干细胞(iPS)库的可行性。方法通过对中华骨髓库湖南分库长沙实验室5 236(人)份HLA分型数据统计分析,找出O型HLA-A、-B、-DRB1三座位纯合子数据,计算以纯合子志愿者为假定iPS供者、5 236名随机志愿者为假定患者的匹配几率;同时计算随机志愿者HLA单体型频率,评估以O型HLA高频单体型纯合子志愿者为假设iPS供者的匹配几率。结果在5 236份骨髓供者资料中共发现O型HLA单体型纯合子14种,以此建库可以分别为49.81%(2 608/5 236)、61.29%(3 209/5 236)、79.51%(4 163/5 236)、75.76%(3 967/5 236)及97.78%(5 120/5 236)的假定患者提供5种匹配水平的iPS供者;共检出17种高频率(HF>1%)的单体型,以这些单体型的O型纯合子建库可以分别为64.06%(3 354/5 236)、75.55%(3 956/5 236)、81.11%(4 247/5 236)、78.76%(4 124/5 236)及98.28%(5 146/5 236)的假定患者提供5种匹配水平的iPS供者。结论利用中华骨髓库现有的HLA资料可以建立数量少、效率高的iPS细胞库。

妊娠合并再生障碍性贫血患者存在抗-HLA引起血小板输注无效的诊疗

目的为存在抗-HLA的妊娠合并再生障碍性贫血(简称再障)而血小板输注无效患者,从血小板供者库中寻找相匹配的血小板输注并追踪输注效果,确保患者顺利生产以及后续的治疗。方法对1名再障孕妇用ELISA方法检测血小板抗体、用Luminex方法检测抗-HLA特异性;提取患者及血小板供者(库)523名DNA做高分辨HLA基因分型检测;利用自行设计的"血小板输注无效风险评估"软件在血小板供者库中查找出与患者ABO血型相、HLA基因型与患者相容且不含患者特异性HLA Eplets(表位)及其抗体的供者,招募其来做单克隆抗体固相血小板抗体试验(MASPAT)配型后捐献1 U血小板输注给患者,并追踪输注24 h效果。结果血小板抗体检测:患者仅含抗-HLAⅠ类抗体;抗体特异性鉴定:针对Eplets为65QIA,相应的抗-HLA为HLA-B^(*)27∶08、B^(*)27∶05、B^(*)07∶02、B^(*)55∶01、B^(*)67∶01、B^(*)54∶01;抗-HLA-Ⅱ类阴性。高分辨HLA基因分型:患者与供者HLA基因型均为HLA-A^(*)02∶07、A^(*)11∶01,B^(*)46∶01、B^(*)46∶01,C^(*)01∶02、01∶03,DRB1^(*)04∶05、DRB1^(*)0901,DQB1^(*)03∶03、DQB1^(*)04∶01;MASPAT配型:阴性。患者输注该供者的配型血小板1 U后24 h血小板计数(Plt)(×10^(9)/L)由输注前1上升至33。4周后患者剖宫产1男婴,术后血小板低下,有出血倾向,再次招募该献血者,输注1 U血小板后24 h Plt(×10^(9)/L)由输注前5上升至37。追踪产后2 d母婴生命体征均正常。结论妊娠合并再障患者抗-HLA导致的血小板输注无效,可通过建立血小板供者库,及时筛选输注HLA基因型相容且不含患者特异性HLA表位供者的血小板,而得到有效治疗。

HLA氨基酸残基配型标准在肾移植中的应用

目的 评价HLA氨基酸残基配型新标准在肾移植中的应用 .方法 应用血清学和基因分型方法对 134例肾移植供受者进行HLA Ⅰ ,Ⅱ类抗原分型 ,并比较氨基酸残基配型标准与传统的HLA六抗原无错配标准的关系 .结果 HLA氨基酸残基配型标准可以提高肾移植供受者的相配率 ,六抗原无错配率可由 0 .75 %提高到 2 .2 4 % ,六抗原完全错配的几率由 15 .6 7%降至 2 .2 4 % .

HLA配型和PRA对再次肾移植的影响研究

目的 研究再次肾移植患者长期存活与人类白细胞抗原（HLA）配型和群体反应性抗体（PRA）的关系.方法 回顾性分析60例再次肾移植手术患者HLA供受者分型和PRA水平对移植肾功能的影响.结果 60例患者中HLA-1~6个抗原错配的患者分别为3例、16例、19例、12例、9例和1例;PRA阳性患者分别为2例、3例、7例、1例、3例和0例.肾功能下降或丧失患者分别为2例、5例、6例、1例、4例和0例.抗体阳性与抗体阴性患者比较,肾功能下降或丧失的比率具有显著性差异（χ2=30.72,P〈0.001）.HLA配型与肾功能下降或丧失无显著性差异（χ2=0.19,P〉0.5）.结论 再次肾移植患者长期存活与PRA密切相关.

免疫性血小板输注无效患者血清中血小板相关抗体的变化及其临床意义

目的分析免疫性血小板输注无效(IPTR)患者血清中血小板相关抗体的变化情况及其对血小板输注效果的影响。方法30例确认为IPTR的患者,收集其性别、年龄、血型、身高、体重、疾病类型、输注前后血小板计数等资料,分别于0、1、3、6个月时检测其血清中的HLA抗体和HPA抗体。ELISA方法进行血小板相关抗体检测,通过计算获得抗体相对强度。微珠法进行HLA特异性抗体检测。结果在随访的30例患者中,共有12例患者的抗体转阴,平均转阴时间为(4.08±1.78)M,7例患者呈现强度逐渐减弱的趋势,另有10例患者呈现稳定存在状态。HLA抗体相对强度的变化同时伴有HLA特异性抗体种类的变化,二者呈正相关趋势。患者HLA抗体相对强度的降低使患者更容易找到交叉配型相合的供者,但是对输注交叉配型相合血小板后的24 h血小板计数纠正增加指数(CCI)和输注有效率没有显著的影响。结论大多数IPTR患者血清中的HLA抗体在6个月内减弱或消失,部分患者的HLA抗体持续稳定存在。抗体减弱或消失同时伴随特异性抗体种类的减少,使患者更容易找到交叉配型相合的供者,但对其输注效果无显著影响。

标准HLA-A、B、DR配型与氨基酸残基配型在肾移植术后早期急性排斥反应中的差异

目的 研究标准HLA -A、B、DR配型和氨基酸残基配型与肾移植术后早期急性排斥反应中的差异。方法 将 14 47例次肾移植受者 ,按HLA误配率 (MM )对标准配型和氨基酸残基配型 ,分别进行分组 ,统计各组术后 1～ 2个月内 ,急性排斥反应的发生率。结果 标准HLA配型 6误配组 ,术后早期急性排斥反应发生率为 2 1 .6% ;5误配组为 2 8. 9% ;4误配组为 19 .1% ;3误配组为 16. 5 % ;2误配组为 16 .3 % ;1和 0误配组未见术后早期急性排斥反应发生。而氨基酸残基配型 6误配组 ,术后早期急性排斥反应发生率为 2 8 .6% ;5误配组为 2 0 . 2 % ;4误配组为2 3 . 6% ;3误配组为 2 0 . 2 % ;2误配组为 2 0 . 4% ;1误配组为 19% ;0误配组为 16%。结论 标准HLA -A、B、DR配型比氨基酸残基配型在肾移植术后早期急性排斥反应中的作用更为明显。

HLA氨基酸残基配型在免疫致敏受者肾移植中的应用探讨

[目的]探讨人类自细胞抗原(HLA)氨基酸残基配型(Res M)在免疫致敏尤其是高敏受者肾脏移植中的临床意义。[方法]对47例致敏受者采用酶联免疫吸附法(ELUSA)检测体内预存的群体反应性抗体-IgG(PRA-IgG)的水平及特异性;采用一步法单克隆抗体技术和微量序列特异性引物聚合酶链反应(Micro-PCR-SSP)技术进行HLA Ⅰ类和Ⅱ类分型。[结果]47例致敏受者的PRA-IgG水平为8.3％-96.4％,平均为38.8％,供受者间按传统的HLA抗原错配(MM)原则,0-1错配(MM)、2 MM的患者分别为5例(10.6％)、9例(19.1％),而按Res M的原则,0-1 MM、2 MM患者分别提高到22例(46.8％)、17例(36.1％)(P<0.001);其中PRA≥50％的18例高敏受者中,0-1MM 13例(72.2％),而PRA<50％的29例受者中,0-1MM 9例(31％),两者间差异有统计学意义(P<0.001);47致敏受者肾移植术后3个月内排斥反应的发生率为35％,在18例PRA≥50％的高敏受者中,仅有4例(22.2％)发生排斥反应,29例PRA<50％的受者中,11例(37.9％)发生排斥反应(P>0.05).[结论] HLA氨基酸残基配型可显著提高供受者的相配率,良好的HLA配型对减少高敏受者肾移植的排斥反应、提高移植物的存活率具有重要意义。

Delta模块HLA配型检测方法的建立

为了建立delta模块配型的检测方法,采用盐析法提取DNA,PCR技术扩增delta模块,GeneScan模式检测PCR产物。结果表明,在104份随机样本中,PCR扩增出的delta模块具有高度多态性。DNA片段长度范围在81-393bp,片段数目为6-32个;片段长度集中在81-118bp,140-175bp,217-301bp,340-393bp4个区域。结论:建立的delta模块配型技术是可行的,可以用于造血干细胞移植供者的筛选。首次获得了中国汉族人群delta模块的数据资料。

变性高效液相色谱进行HLA-DRB1配型的可行性研究

为了探讨通过变性高效液相色谱(DHPLC)进行HLA-DRB1配型的可行性,选择经PCR-SSP证实的20例HLA-DRB1相合及2例HLA-DRB1不相合的病人及其同胞供者的标本为实验对象,全部标本通过PCR扩增HLA-DRB1第二外显子基因片段,PCR产物经梯度变性处理后通过DHPLC检测,在部分变性温度下,检测病人与供者的HLA-DRB1第二外显子DHPLC峰型是否相同,以判断供受者的HLA-DRB1基因型是否相同。结果表明DHPLC与PCR-SSP进行DRB1配型比较分析,经kappa检验,kappa值为0.776,P值=0.00,说明两种方法的配型结果无显著性差别。结论变性高效液相色谱方法用于HLA-DRB1配型方便,经济实用并解决了HLA新基因的不断出现与相应的位点的引物或探针设计和开发的相对滞后之间的矛盾。