TAP和HLA-Ⅰ类抗原在人肝细胞癌中的表达

为探明肝细胞癌 (HCC)组织中抗原Ⅰ类递呈途径的存在状况 ,采用免疫组织化学技术对 3 0例HCC和2 8例癌旁组织中TAP与HLA -Ⅰ类抗原的表达进行了检测。结果显示 ,HCC和癌旁组织基本上都有较强的TAP和HLA -Ⅰ类抗原的表达 ,两者无明显差异 (x2 <0 0 2 ,P >0 0 5 ) ,这表明HCC中抗原Ⅰ类递呈途径可能基本正常 ,胞毒性T细胞 (CTL)能够杀伤HCC细胞 。

胃癌细胞系MKN中HLA-Ⅰ类分子表达降低的机制研究

目的:探讨胃癌细胞系MKN中HLA-Ⅰ类抗原表达水平异常的分子机制。方法:以胃癌细胞系BGC823、MGC803和SGC7901为对照,利用流式细胞仪检测细胞表面HLA-Ⅰ类复合物的表达情况,W estern b lot检测HLA-Ⅰ类分子重链及轻链表达情况,半定量RT-PCR检测HLA-Ⅰ类分子重链、轻链和抗原加工分子mRNA水平的表达情况,并利用HLA基因区域的微卫星序列检测MKN细胞HLA基因在DNA水平的完整性。结果:胃癌细胞系MKN表面HLA-Ⅰ类复合物表达降低,重链A及B/C位点蛋白无表达而轻链表达无异常。在mRNA水平,胃癌细胞系MKN存在重链A、B、C各位点和抗原加工分子TAP1、LMP2、Tapasin、PA28β的表达缺失。微卫星DNA扩增结果初步显示,MKN细胞无HLA基因区域DNA的大片段丢失。结论:胃癌细胞系MKN HLA-Ⅰ类分子复合物表达降低可能是由HLA-Ⅰ类分子重链及其加工分子在转录水平改变而引起的。

HLA-Ⅰ类分子与非小细胞肺癌的免疫治疗

通过分析HLA-Ⅰ类分子与肿瘤免疫逃逸的关系及其在非小细胞肺癌癌组织中的表达,来探讨HLA-Ⅰ类分子与与非小细胞肺癌的免疫治疗的关系。结果表明在考虑非小细胞肺癌免疫治疗方案时必须考虑癌组织HLA-Ⅰ分子表达状况,并据此选择合适的免疫治疗方案。

我国汉族人群HLAⅠ类经典基因单倍型及连锁分析

本研究旨在探讨我国汉族人群HLAⅠ类经典基因座位HLA-A、HLA-B、HLA-Cw位点的基因频率,单倍型频率及连锁特征。采用序列特异性引物(SSP)PCR低分辨基因分型技术对1014例随机选择的无关个体的经典HLAⅠ类位点进行基因分型,并对其相关遗传学参数进行统计学分析。结果发现汉族人群中较为常见的HLA-Ⅰ类基因是A*02(0.33)、A*11(0.24)、B*15(0.14)、B*13(0.13)、Cw*03(0.25)、Cw*07(0.18);较为常见的单倍型是A*02-B*46(0.071)、A*11-B*15(0.051)、A*02-Cw*01(0.084)、A*11-Cw*03(0.079)、B*46-Cw*01(0.095)和B*13-Cw*03(0.071)等,其中A*02-B*46、A*30-B*13、A*30-Cw*06、A*02-Cw*01、B*46-Cw*01和B*58-Cw*03等单倍型呈现出显著的连锁不平衡;而A*02-B*15、A*02-B*40、A*24-Cw*03、A*02-Cw*03、A*31-Cw*03等连锁不平衡性相对较低,其中A*24-Cw*03在重组事件中较常出现。此外,A*02-B*46-Cw*01(0.075)、A*30-B*13-Cw*06(0.046)、A*11-B*13-Cw*03(0.045)、A*33-B*58-Cw*03(0.044)、A*11-B*15-Cw*08(0.027)、A*02-B*38-Cw*07(0.023)、A*11-B*40-Cw*07(0.022)等为常见扩展单倍型。结论:本研究较系统地分析了我国汉族人群的HLA遗传学分布特点,为群体进化、临床移植及疾病相关研究等提供了有价值的遗传学资料。

中国西安地区血小板捐献者HPA及HLA-Ⅰ分型的研究

为了研究中国西安地区人群HPA和HLA-Ⅰ分型的分布及多态性,采用PCR-SSP和PCR-SSO流式微磁珠技术检测西安地区375位血小板无偿捐献者HPA和HLA-Ⅰ分型并进行统计分析。结果发现,在HPA-1-HPA-17中,HPA-7-HPA-14、HPA-16和HPA-17只有-aa型,不具多态性;仅在HPA-3、HPA-15中检出-bb型。在16个表现型为HPA-5ab中有9个样本同时表达HPA-15ab,另7个样本表达-15bb,未见-15aa表型。此次检出的表型有HPA-1aa-17aa、HPA-1ab、-2ab、-3ab、-3bb、-4ab、-5ab、-6ab、-15ab和-15bb。在375人中可观察到16种HLA-A特异性,占该座位可检出表型特异性的76%(16/21),其中大于1%的有11种;观察到36种HLA-B特异性,占该座位可检出表型特异性的84%(36/43),其中大于1%的有23种,均涵盖在中国北方地区HLA-Ⅰ特异性常见型里。在375人中观察到HLA-A-B单体型264种,频率大于1%的有30种。结论:西安地区人群HPA和HLA-Ⅰ基因多态性基本符合中国北方地区分布情况,但具有西安地区特点。

不同IL-15转染对NCI-H446HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ表达及NK敏感性的影响

目的探讨不同形式IL15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCIH446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响。方法在本室已构建的3种细胞模型(转染IL15成熟肽基因的NCIH446/IL15mp细胞、转染原型IL15基因的NCIH446/IL15细胞和转染以IL2信号肽替代IL15信号肽的改型IL15基因的NCIH446/IL2spIL15mp细胞)基础上[1],以野生株细胞为对照,流式细胞分析仪(Fluorescenceactivatedcellsorter,FACS)分析这3种细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定它们对NK杀伤的敏感性。结果野生株NCIH446细胞表面阳性表达HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子;转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因后,这两种分子的表达均被抑制为阴性;转染原型IL15基因后,这两种分子的表达均被显著上调。5名不同健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)对野生株NCIH446细胞的平均NK杀伤率最低,对NCIH446/IL15、NCIH446/IL15mp和NCIH446/IL2spIL15mp细胞的平均NK杀伤率依次升高。结论转染不同形式IL15基因对NCIH446细胞的免疫生物学特性影响不同。转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因,抑制NCIH446细胞表面HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达;转染原型IL15基因,上调这两种分子的表达;转染不同形式IL15基因均可增强NCIH446细胞对NK杀伤的敏感性,但程度不同:以改型IL15者最高,IL15成熟肽者次之,原型IL15者最低。

恶性血液病患者血清sHLA-Ⅰ水平的变化及临床意义

目的探讨白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等恶性血液病患者体内可溶性人类白细胞抗原Ⅰ(sHLA-Ⅰ)水平的变化及其临床意义。方法用ELISA方法检测112例恶性血液病患者的血清sHLAⅠ-水平。结果血清sHLAⅠ-水平白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤均高于正常对照组(P均<0.01),淋巴瘤、多发性骨髓瘤高于白血病(P均<0.05),淋巴瘤组与多发性骨髓瘤组比较无统计学意义(P>0.05);白血病初治组、复发或未缓解组血清sHLAⅠ-水平高于缓解组(P均<0.01),初治组与复发组比较无统计学意义(P>0.05)。血清sHLAⅠ-水平与患者外周血乳酸脱氢酶及β2-微球蛋白水平有关。结论血清sHLAⅠ-可以作为一种辅助监测及判断恶性血液病预后及复发的指标。

中国甘肃地区汉族白血病易感性与HLA-Ⅰ类抗原之间的相关性(英文)

目的 :探讨中国甘肃地区汉族白血病易感性与HLA Ⅰ类抗原之间的相关性 ,找出白血病的易感基因。方法 :采用特异性寡核苷酸探针杂交 (PCR SSO)法 ,初步对 4 3名白血病病人和 6 6名健康对照进行了HLA Ⅰ抗原分型。结果 :经过SSPS 10 0统计软件分析 ,中国甘肃地区汉族白血病患者HLA A 0 1和HLA A 11基因的统计结果分别为X2 =6 35 0 ,P =0 0 2 8、X2 =5 5 74 ,P =0 0 18。显示相关性。结论 :中国甘肃地区汉族人群中HLA A 0 1和HLA A

HBV野生株及C区突变株调节HLA-Ⅰ表达的作用

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)及其C区突变对机体人类白细胞抗原-Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响和机制。方法构建HBVC区突变株G87、V60的真核表达载体,转染HepG2细胞,检测转染细胞中HLA-Ⅰ的表达以及抗原提呈相关基因LMP2、TAP1和tapasin的mRNA表达。结果各转染细胞株均能有效表达HBsAg;各转染细胞株均有HLA-Ⅰ表达,野生株略高于C区突变株G87、V60;TAP1mRNA表达上调,LMP和tapasinmRNA均未见明显表达。结论HBV能诱导HepG2细胞内HLA-Ⅰ分子的合成,使TAP1基因转录增强,HLA-Ⅰ的表达上调。相对于HBV野生株而言,C区突变株G87、V60使宿主细胞内HLA-ⅠmRNA及其蛋白的表达水平降低。

γ-干扰素基因的导入及删除对人肿瘤细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原表达的影响

目的：制备有效的细胞因子基因修饰的肿瘤细胞作为“瘤苗”。方法：用缺陷型逆转录病毒作为载体将人γ－干扰素（ＩＦ－γ）含信号肽ｃＤＮＡ转导入人胃癌细胞株ＭＫＮ、４５，经Ｇ４１８筛选后得－ＩＦＮ－γ基因修饰株ＭＫＮ－４５－ＩＦＮ。ＰＣＲ方法测得有标记基因ＮｅｏＲ及ＩＦＮ－γ基因的存在，但经３个月连续传代培养后，ＰＣＲ仅能检测到ＮｅｏＲ基因，而未检出ＩＦＮ－γ基因、ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类单抗间接免疫荧光法流式细胞仪测定了上述相应时期ＩＦＮ－γ基因修饰肿瘤细胞ＨＬＡ－Ｉ、Ⅱ类抗原的表达。结果：随着ＩＦＮ－γ基因在染色体中被删除，ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类的表达又恢复至与ＭＫＮ－４５相同的水平。结论：为确保ＩＦＮ－γ基因的作用，应不断检测其基因的存在。

肺癌病人自然杀伤细胞活性改变与HLA Ⅰ类无关联

目的 研究发现控制自然杀伤 (NK)细胞低活性的基因与HLAⅠ类基因相关联。在此基础上 ,检测肺癌病人NK细胞活性和HLAⅠ类抗原 ,以期发现肺癌的HLAⅠ类基因分布的特点及其与NK细胞活性的关系。方法 采用国际标准的微量细胞毒分型方法对 46例肺癌病人和 34例正常人对照进行HLA A、 B分型 ;采用乳酸脱氢酶释放法测定其NK细胞活性 ;数据的统计学处理采用t′检验及卡方检验或Fisher精确概率法。另外 ,46例肺癌病人与已知其单倍型的96例正常人进行了传统的疾病关联分析。结果 发现肺癌病人的NK细胞活性 (4 1.87± 2 5 .44 )明显低于对照组 (6 2 .6 5±47.5 0 ) ,t′=2 .32 ,P <0 .0 5。肺癌病人NK细胞活性下降与HLA的型别分布无关 ,肺癌与HLA A , B抗原均无显著关联。

慢性乙型病毒性肝炎、肝癌组织HLA-Ⅰ类抗原的表达及意义

目的:探讨慢性乙型肝炎、肝癌组织中人类白细胞抗原I(HLA-I)的表达和临床意义。方法:应用流式细胞仪对51例慢性乙型肝炎患者肝组织和43例原发性肝癌癌组织中的HLA-I抗原进行检测。结果:肝癌组织中HLA-I抗原表达为36.47±19.38,明显低于慢性乙肝的79.54±41.55和正常肝组织的81.86±46.53(P均<0.01),而慢性乙型肝炎肝组织和正常肝组织HLA-I类抗原表达无明显差异(P>0.05),伴有肝内和(或)淋巴结转移的肝癌组织中HLA-I抗原表达较无转移组明显降低(22.83±11.59 vs 46.28±23.16,P<0.05);HLA-I类抗原表达与血清AFP水平呈明显负相关(r=-0.741 1,P<0.01),但与肝癌组织分化程度呈明显正相关(r=0.805 1,P<0.05)。结论:HLA-I抗原表达异常与肝癌的发生和转移密切相关。

免疫抑制酸性蛋白与HLA－Ⅰ类分子在胃癌组织中的表达及其关系

本文应用抗ＨＬＡ－Ⅰ类重链单态决定簇和抗免疫抑制酸性蛋白Ⅱ型（ＩＡＰ－２）单克隆抗体，分别对６４例胃癌、癌旁组织和６例正常胃粘膜冰冻和石蜡切片进行了免疫组化分析。结果表明，正常胃粘膜及癌旁上皮细胞ＩＡＰ－２表达阴性，ＨＬＡ－Ⅰ类分子表达阳性。但在胃癌组织Ⅰ类分子表达缺失（４２．２％），ＩＡＰ－２表达阳性（９０．５％）。其中肿瘤分化程度与Ⅰ类分子缺失和ＩＡＰ－２高表达均呈负相关，即分化程度越低，Ⅰ类分子缺失率越高，ＩＡＰ－２表达阳性率亦越高。提示：①ＨＬＡ－Ⅰ类分子表达缺失可能是胃癌细胞逃避宿主免疫监视而得以生长、扩散和转移的机理之一；②ＩＡＰ－２的高表达可能是胃癌细胞引起宿主免疫抑制的重要因素。

HLA-Ⅰ类抗原在喉癌中的表达及意义

目的:研究HLA-Ⅰ类抗原在喉癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化方法检测HLA-I类抗原在40例喉癌组织及癌旁正常组织中的表达。结果:HLA-Ⅰ类抗原在喉癌组织中表达下调比例60%,缺失比例17.5%。有转移淋巴结组与无转移淋巴结组之间差异存在统计学意义。结论:HLA-Ⅰ类抗原在喉癌组织中表达下调或缺失,可能与淋巴结转移相关。

人群HBV易感性与HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因相关性研究

[目的]探讨人类白细胞抗原Ⅰ、Ⅱ类基因与乙型肝炎病毒（HBV）感染的相关性。[方法]2003～2004年，采用PCR-SSP方法对青岛市178例HBV感染者（实验组）和1383名无血缘关系的自愿骨髓捐献者（对照组）分别进行HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因分型检测。[结果]HLA-DR9、DR12的分布频率在实验组为30．9％（55／178）和28．0％（50／178），在对照组为20．7％（286／1383）和19．5％（270／1383）（P〈0．01）。[结论]HLA—DR9、DR12有助于HBV对宿主的感染，可能是HBV的易感基因。

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR快速检测HLA-B27方法学的建立

建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法快速检测HLA—B27，拟确定该法的阳性参考区间。强直性脊柱炎患者42例、类风湿性关节炎患者53例及健康体检者80例分别应用PCR—SSP法和SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法检测HLA—B27，并对两种方法进行比较。两种方法结果符合率为100％，初步拟定HLA—B27的阳性参考范围是：GAPDH的Ct在23．85-25．59，以99％百分位法建立HLA—B27阳性参考范围为CtB27〈21．54。SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法快捷、灵敏，适合于临床开展。

HLA-Ⅰ基因单核苷酸多态性与中国南方汉族女性乳腺癌易感性的相关性研究

目的:探讨位于白细胞抗原复合体基因HLA-Ⅰ区域的17个单核苷酸多态性位点与中国南方汉族女性乳腺癌易感性的相关性。方法:应用Sequenom MassArray iPLEX检测系统对所选位点在267例乳腺癌患者和274例健康对照女性中进行基因分型分析。χ2检验分析各位点基因型分布频率在病例组和对照组中的差异,非条件Logistic回归评价多态性位点与乳腺癌遗传易感性的相关性。另外,根据临床治疗中癌组织ER、PR和HER-2状态进行分层分析。结果:所选位点在中国南方汉族女性中均存在多态性,其中rs9260682遗传多态性与乳腺癌易感性显著相关,与AA基因型相比,AT基因型可增加携带者乳腺癌的患病风险(P=0.04),且与HER-2阴性乳腺癌相关(P=0.04);rs9260734位点多态性分布在病例-对照分组中无显著性差异(P=0.25),但AA基因型与PR阴性乳腺癌相关(P=0.048);其余位点与乳腺癌易感性、ER、PR和HER-2状态均无显著相关性。结论:位于HLA-Ⅰ基因区域的多态性位点rs9260682既与乳腺癌易感性相关,又与HER-2阴性乳腺癌相关,而rs9260734位点的AA基因型与PR阴性乳腺癌相关。

沙眼衣原体感染对Hela细胞HLA-Ⅰ类分子表达的影响

目的 探讨沙眼衣原体 (Ct)感染对上皮细胞系Hela细胞HLA Ⅰ类分子表达的影响。方法 用直接免疫荧光和流式细胞仪分析等方法 ,对感染Ct的Hela细胞HLA Ⅰ类分子表达水平进行检测。结果 Ct感染的Hela细胞HLA Ⅰ类分子表达水平随感染剂量增加和感染时间延长而下降 ,并且IL 10抗体能部分抑制这种下降。结论 Ct感染可下调Hela细胞HLA Ⅰ类分子表达 ,下调与感染过程中分泌的IL 10有关 。

中国北方汉族人HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因与HBV水平感染及预后相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原Ⅰ、Ⅱ类基因与乙型肝炎病毒(HBV)感染及其预后的相关性。方法采用PCR-SSP方法分别对102名慢性持续性HBV感染者(实验1组)、76名急性HBV感染者(实验2组)及1383名中华骨髓库山东分库无血缘关系自愿骨髓捐献者(对照组)作HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因分型检测,将结果作统计学处理。结果HLA-DR9、DR12在实验组(实验1组+2组)中的分布频率较对照组明显增高(P<0.01);HLA-DR8在实验1组的分布频率明显高于实验2组(P<0.01);HLA-DR13,DR15在实验1组中的频率明显低于实验2组(P<0.01,P<0.05)。结论HLA-DR9可能有助于HBV对宿主的感染;HLA-DR8,DR12可能有助于HBV对宿主的持续感染,对HBV感染的慢性化有促进作用;HLA-DR13,DR15可能有助于宿主对HBV的清除,对HBV感染的慢性化有抑制作用。

Beclin1和HLAⅠ、Ⅱ在人卵巢癌SKOV3细胞中的表达

目的探讨转染Beclin1质粒的自噬基因Beclin1和免疫应答效应分子HLAⅠ、Ⅱ在人卵巢癌SKOV3细胞中的表达,分析Beclin1在卵巢癌免疫应答中的作用。方法应用基因转染技术、RT-PCR、Western blot法检测Beclin1质粒转染SKOV3细胞前后Beclin1和HLAⅠ、Ⅱ的mRNA和蛋白表达水平的变化。应用免疫荧光显微镜观察Beclin1质粒转染SKOV3细胞后,其自噬小体的变化。用MTT法检测Beclin1质粒转染SKOV3前后细胞的增殖活性。结果 SKOV3细胞转染Beclin1质粒后,Beclin1的转录和翻译水平分别是空载体组的5、2倍。荧光显微镜观察,转染Beclin1质粒组卵巢癌细胞MDC标记的自噬小体数量显著增多。RT-PCR和Western blot结果显示,转染Beclin1可诱导HLAⅠ、Ⅱ等位基因的转录和翻译。Beclin1质粒组的HLAⅠ-A、B、C和HLAⅡ-DP、DQ、DR的mRNA分别是空载体组的2、1.6、3倍和2、6、3倍;其HLAⅠ、Ⅱ的蛋白表达分别是空载体组的2、1.6倍。MTT结果显示,Beclin1质粒组与空载体组、空白对照组相比,在转染24、48、72、96 h后,其细胞生长抑制率分别为42.6%、37.8%、24.35%、14.81%。结论在人卵巢癌SKOV3细胞中,转染外源性Beclin1可诱导细胞自噬并使免疫应答效应分子HLAⅠ、Ⅱ的表达增加。HLAⅠ、Ⅱ表达的增加可能使卵巢癌细胞免疫应答增强。转染外源性Beclin1可抑制卵巢癌SKOV3的细胞增殖。