HLA—B^＊27高分辨等位基因在1606例疑似强直性脊柱炎患者中的表达

目的:探讨HLA-B*27高分辨等位基因分析对强直性脊柱炎(AS)诊断和鉴别诊断的临床应用价值。方法:采用PCR-SSP和PCR-SBT技术对2004年1月-2008年3月本院收治的广东地区1606例骨和关节疾病(OAP)患者(其中确诊AS患者1022例)进行了HLA-B*27低分辨和HLA-B*27高分辨的基因频率调查和分析。结果:OAP患者中B*27高分辨基因频率(70.50%,141/200)高于B*27低分辨基因频率(41.82%,588/1406)(P<0.001);1022例AS患者中高分辨的B*27基因频率(84.21%,121/133)也高于B*27低分辨基因频率(44.77%,398/889)(P<0.001)。HLA-B*27阳性患者表达出的HLA-B*27等位基因为B*2704占88.44%(459/519),B*2705占9.83%(51/519),B*2702占1.73%(9/519)。结论:高分辨技术能够准确检测HLA-B*27阳性患者,AS患者在不同地区或人群所表现出的HLA-B*27易感基因不同;应用高分辨技术进行HLA-B*27等位基因分型,将有益于提高AS早期诊断和鉴别诊断,发挥对AS预后预测和治疗选择的临床应用价值。

HLA—B^＊27基因亚型与强直性脊柱炎的相关性研究

目的比较强直性脊柱炎患者与中华骨髓库福建人群中HLA-B*27基因携带者HLA-B*27基因亚型的分布差异;探讨HLA-B*27基因亚型与强直性脊柱炎的相关性。方法中华骨髓库中HLA-B*27基因携带者(阳性对照组)采用PCR-SSO方法检出,强直性脊柱炎患者(AS组)HLA-B*27基因采用低分辨PCR-SSP方法检出;2组HLA-B*27基因亚型均采用高分辨PCR-SSP方法检测。结果阳性对照组130名HLA-B*27基因携带者中,共检出B*2703、B*2704、B*2705、B*2706、B*2707、B*2711、B*27207种基因亚型;在强直性脊柱炎患者中共检出B*2704、B*2705、B*2707、B*2711、B*27155种基因亚型。两组HLA-B*27基因亚型的频率的差异无显著性意义(P>0.05)。结论HLA-B*27基因健康携带者与强直性脊柱炎患者HLA-B*27基因亚型的总体分布未见显著性差异。

HLA-B＊2736等位基因的序列分析

使用FLOW-SSO、PCR-SSP以及测序等分型技术,发现一个与HLA-B*270401基因相关的未知基因。设计基因特异性引物单独扩增B*27基因的外显子2-5,包括内含子2-4,并进行双向测序,分析与B*270401基因序列的差异。该基因的扩增产物为1815bp。与B*270401相比在外显子3和4共有10个碱基的改变,从而使相应氨基酸发生错义或同义突变。碱基634A→C(密码子130丝氨酸→精氨酸);670A→T(密码子142苏氨酸→丝氨酸);683G→T(密码子146色氨酸→亮氨酸);698A→T(密码子151谷氨酸→缬氨酸);774G→C(密码子176谷氨酸→天冬氨酸);776C→A(密码子177苏氨酸→赖氨酸);781C→G(密码子179谷氨酰胺→谷氨酸);789G→T(密码子181丙氨酸同义突变);1438C→T(密码子206甘氨酸同义突变);1449G→C(密码子210甘氨酸→丙氨酸)。在IMGT/HLA数据库中B*27组只有3个基因(B*270502/2706/2732)提交了内含子序列。该未知基因的内含子2序列与B*2706相同,显示了与B*27组基因的同源性,但其同源性在内含子3、4均未得到支持,与B*27组基因相比,内含子3的第106个碱基C→G,碱基168缺失,碱基179G→A,碱基536G→A;内含子4中碱基82T→C。但其内含子3、4序列却与B*070201完全相同。该基因序列已提交GenBank,编号为被DQ915176,被WHO确认为HLA-B*2736等位基因。

骨显像和血HLA-B_(27)检测早期诊断强直性脊椎炎

目的 探讨放射性核素骨显像及人类白细胞抗原 (HLA B2 7)检查对强直性脊椎炎 (AS)早期诊断价值。方法 对首次发病且X线检查未见异常的 35例后臀部疼痛患者作了骨显像及HLA B2 7测定 ,并制订了对AS的早期诊断标准 ,对患者临床随访 0 5～ 2 5a ,用纽约会议标准再次进行诊断 ,以评价早期诊断标准的准确性。结果 根据早期诊断标准有 30例患者被诊断为AS ,随访后再次诊断 ,其中 2 9例被诊断为AS ,前后 2次诊断符合率为 96 7%。结论 放射性核素骨显像与HLA B2 7检查相结合对AS的早期诊断和治疗可提供可靠依据。

南方汉族强直性脊柱炎患者及健康人群HLA-B27基因的分子多态性及分布

目的研究南方汉族强直性脊柱炎(AS)患者及健康人群HLA-B27亚型等位基因的多态性和分布特点。方法采用HLA测序分型方法,对收集到的46份B*27阳性的南方汉族AS患者血样以及随机选择的80份经rS-SOHLA流式磁珠低分辨检测为B*27阳性的造血干细胞南方汉族捐献者血样,做HLA-B基因的第2—4外显子测序分型,测序反应产物用ABI PrismTM3730测序仪检测,Assign3.5分析软件分析结果。对检出的模棱两可结果及"罕见型"等位基因,辅以PCR-SSP法HLA-B27高分辨基因分型。结果46名南方汉族AS患者中,共检出4个HLA-B*27相关的等位基因:B*2704的检出比例最高,为82.98%(39/47);其次是B*2705,为12.77%(6/47);B*2707和B*2724各为2.13%(1/47)。80名南方汉族造血干细胞捐献者中,共检出7种B*27相关等位基因:以B*2704的检出比例最高,为57.32%(47/82);其次为是B*2705,为26.83%(22/82);B*2706和B*2707各为6.10%(5/82);B*2703、B*2715和B*2724各为1.22%(1/82)。结论南方汉族AS患者HLA-B*27基因中以B*2704最为常见,健康人群以B*2704和B*2705等位基因为主要亚型。

HLA—B＊27基因亚型与强直性脊柱炎临床特征的相关性

目的比较不同HLA-B*27亚型的强直性脊柱炎患者的临床症状、实验室和影像学检查结果,分析其与基因亚型的相关性。方法应用PCR-SSP方法检测HLA-B*27抗原阳性的强直性脊柱炎患者(ankylosing spondylitis,AS)70例,应用Olerup高分辨PCR-SSP试剂检测HLA-B*27的基因亚型,并分析亚型与临床特征的相关性。结果70例样本共检出B*270447例(67.1%)、B*270520例(28.6%)两种基因亚型,另有3例因为等位基因同质性而无法判定型别。HLA-B*2704与B*2705亚型患者的临床表现、实验室参数之间的差异无统计学意义。结论本地区AS患者HLA-B*27亚型以B*2704和B*2705为主,且B*2704最多见;HLA-B*27各亚型与临床特征的相关性无统计学意义。

流式细胞仪检测HLA-B_(27)抗原初探

目的 建立一种快速、准确的HLA B2 7检测技术。方法 利用流式细胞仪 (FCM)检测HLA B2 7抗原 ,并将结果与基因定型法比较 ,74例临床样本分别用FCM法、PCR ASP基因定型法检测HLA B2 7抗原和基因。结果 FCM法有 2 2例HLA B2 7阳性 ,5 2例阴性 ,与PCR ASP法结果比较 ,阳性符合率 88% ,阴性符合率 10 0 % ,总观察一致率 95 .9% ,二种检测方法无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 可以认为 ,FCM法检测HLA B2 7具有快速灵敏、多参数检测等优点 ,针对不同的样本来源和临床要求 ,与PCR ASP法配合使用 。

强直性脊柱炎患者HLA-B~＊27亚型与KIR基因相关性研究

目的:探讨强直性脊柱炎患者人类白细胞抗原B27(HLA-B*27)各基因亚型与杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性的关联性。方法:采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法,分析60例强直性脊柱炎(AS)且HLA-B*27阳性患者的HLA-B*27亚型和KIR基因各基因频率,并以30例无血缘关系的正常人做对照,进行相关性分析。结果:HLA-B*27阳性者中以B*2704和B*2705两种亚型为主,两个HLA-B*27亚型的KIR基因频率无统计学差异。AS组中抑制型KIR2DL2、活化型KIR2DS5基因频率较正常对照组显著降低,差异有统计学意义,活化型KIR2DS4基因频率较正常对照组显著升高,差异有统计学意义。结论:强直性脊柱炎患者较正常对照KIR基因有显著差异,KIR基因在强直性脊柱炎发病机理上扮演重要角色,但HLA-B*27亚型与KIR基因多态性无显著关联性。

中国人群HLA-B*27基因亚型与强直性脊柱炎的相关性研究

在全球范围内,强直性脊柱炎(AS)在不同地区的分布有明显差别。AS与HLA-B*27基因多态性密切相关,HLA-B^*27基因不同亚型对AS的发病作用机制可能不同。目前已发现至少105种HLA-B^*27基因亚型,分为"致病"亚型、"保护"亚型和不确定亚型。中国不同地区和种族的HLA-B^*27基因亚型分布有一定差异,不同地区的HLA-B^*27基因亚型与AS的关系也不完全相同。因此,临床上早期诊断AS时,应考虑本地区的亚型分布特点和规律,进行相应的亚型检测。现总结中国人群HLA-B*27基因亚型与AS的关系,探讨HLA-B^*27基因亚型检测用于早期诊断AS的必要性及下一步研究方向。

幼年型与成年型强直性脊柱炎HLA*B等位基因高分辨分型研究

目的 通过对幼年型强直性脊柱炎(JAS)和成年型强直性脊柱炎(AAS)患者HLA*B等位基因进行高分辨测序分型,了解HLA-B基因多态性与JAS是否有相关性。方法 收集2019年8月—2021年12月就诊于本院的符合JAS和AAS患者各50例,采用PCR-SBT法对HLA*B位点特异性扩增,再使用ABI 3100毛细管测序仪对外显子1正向测序,外显子2、3、4、5同时进行正反向测序,采用uTYPETMHLA测序分析软件处理测序结果。结果 JAS组中男41例,女9例,AAS组中男43例,女7例,两组男女性别比例差异无统计学意义(P=0.585);JAS组发病年龄(12.5±2.9)岁,显著低于AAS组的(29.7±6.8)岁(P<0.001)。JAS组检出HLA-B*27纯合子5例占10.0%,AAS组检出HLA-B*27纯合子4例占8.0%,JAS组中45例杂合子中B*27:04、B*27:05、B*27:15、B*27:86分别为34例、6例、3例、2例,AAS组46例杂合子中B*27:04、B*27:02分别为45例、1例;HLA-B*27阳性的JAS和AAS各检出15例HLA-B*40,高分辨分型中以B*40:01:02为主要亚型。结论 HLA-B*27纯合子与等位基因HLA-B*40对JAS的早发病并无直接相关性。HLA-B*27:04是JAS和AAS主要基因亚型,HLA-B*27:05:02:01、HLA-B*27:15,在JAS中多于AAS组,携带该等位基因的患者倾向于早发。

闽南地区HLA-B27基因亚型与强直性脊柱炎相关性研究

目的对闽南地区人群中HLA-B27阳性标本进行回顾性调研及分型检测,探讨闽南地区HLAB27亚型分布情况,分析HLA-B27亚型与强直性脊柱炎(AS)的相关性。方法采用PCR-SBT(测序法)基因分型技术,对流式细胞术(FCM)检测为阳性的186例标本进行HLA-B*27基因分型。结果 186例HLA-B27阳性(FCM法)标本中,再用PCR-SBT法检测,HLA-B*27基因型均为阳性;而基因亚型分布,174例为B*27:04亚型,占93.5%,有8例B*27:05亚型,占4.3%,B*27:15亚型2例,占1.1%,另外B*27:06和B*27:07各1例,均占0.5%。186例中有103例确诊为AS患者,其中98例为B*27:04亚型,占95.1%,3例为B*27:05亚型,占2.9%,B*27:07和B*27:15亚型各1例,均占1.0%。结论闽南地区HLA-B27阳性的强直病患者以B*27:04为主,其次为B*27:05。AS患者与其他B27基因携带者,在亚型分布上没有明显的差异。

福氏志贺氏菌属与Reiter综合征发病的相关性研究

本研究对6例Reiter综合征(Reiter’s syndrome,RS)患者进行大便培养,从1例RS患者中分离得到福氏志贺氏菌(Shigella Flexneri,SF,代号SF22682)。研究发现,SF22682所含的3kb质粒DNA可与代表HLA-B27分子片段的15mer DNA探针出现阳性杂交反应,而其它非来源于RS患者的多种SF,对照痢疾杆菌及大肠杆菌质粒DNA则为阴性,提示SF22682的3 kb质粒DNA编码的多肽可能通过与B27分子在分子水平的模拟而在诱发B27阳性个体发生RS上起重要作用。本文还简要讨论了SF的3kb质粒DNA在RS发病机制中的可能作用。

HLA-B*27及其亚型与强直性脊椎炎的相关性研究

目的:探讨人类白细胞抗原B*27(HLA-B*27)及其亚型与强直性脊柱炎(AS)患者发病的相关关系。方法:采用二重Taqman实时PCR方法检测23名AS就诊患者及其105名一级亲属的HLA-B*27,并采用高分辨的PCR-SSP技术分析HLA-B*27的亚型。结果:AS就诊患者HLA-B*27的阳性率为91.30%,其一级亲属HLA-B*27的阳性率为42.85%,患病率22.86%;3个家系的HLA-B*27亚型为HLA-B*2705,其他家系均为HLA-B*2704。结论:AS的发生与HLA-B*27密切相关,且具有家族遗传性;与HLA-B*2705比较,HLA-B*2704是发生AS更危险的因素。

双重TaqMan实时PCR检测中国汉族人群HLA-B*27的研究

目的:建立一种快速有效的双重TaqMan实时PCR法检测中国汉族人群的人白细胞抗原B*27(HLA-B*27)。方法:以156例已定型的基因组DNA标本为标准建立一种双重TaqMan实时PCR方法用于检测HLA-B*27,并对118例强直性脊柱炎(AS)患者和225例健康志愿者的HLA-B*27进行基因分型。结果:156个已定型标本的CtGAPDH为23.19±2.28且呈正态分布。45个已定型阳性标本的CtB27为29.12±2.05,也符合正态分布,而111个已定型阴性标本的CtB27>40。以CtB27≤31.17和20.91≤CtGAPDH≤25.47为阳性判断标准,则AS患者和健康志愿者的阳性率分别为93.22%和4.95%,而且15例标本基因测序结果与TaqMan实时荧光PCR结果完全吻合。结论:TaqMan实时PCR是一种快速有效的检测HLA-B*27的方法,具有传统的PCR所不可比拟的优点,可取代传统的PCR法用于中国汉族人群HLA-B*27的基因分型。