母体KIR与胎儿HLA—C基因的组合形式对子痫前期发病的影响

【目的】探索子宫蜕膜自然杀伤细胞（uNk细胞）免疫球蛋白受体基因（KIR基因）人类白细胞抗原C类分子基因（HLA—C基因）的结合对妊娠期高血压疾病发病的影响。【方法]30例早发型重度子痫前期孕妇及其胎儿作为观察组，20例正常健康孕妇及其胎儿作为对照组，孕妇抽取静脉血进行KIR基因分型，胎儿在出生时抽取脐静脉血进行HLA—C基因分型。【结果】两组HLA—C2的百分率相比差异无显著性（x2=0．67，P〉0．05）。子痫前期组母体KIR基因AA型的有14例，对照组母体AA型有3例，子痫前期组有更多孕妇的KIR基因为AA型，差异有显著性（x2=5．31，P〈0．05）。在子痫前期组，胎儿为HLA-C2型基因共16例，有11例母体KIR基因型为AA型，胎儿为HL艮c1共14例，有3例母体KIR基因型为AA型，在对照组，胎儿为HLA—C2基因型共13例，有3例母体KIR基因型为AA型，比较发现，予痫前期组中，胎儿为HLA—C2基因型时，有更多的母体KIR基因型为AA型，差异有显著性（确切概率P值=0．0109）。子痫前期组与对照组比较，子痫前期组有更多的母体KIR为AA基因型与胎儿HLA—C为C2基因型的结合形式（确切概率P=0．0161）。【结论】母体KIR基因为AA型，所生胎儿HLA—C基因为C2型时，子痫前期发病的风险增加。

人类白细胞抗原HLA-C＊04：01：01G组的区分鉴别

本研究旨在区分人类白细胞抗原(HLA)-C*04:01:01G组内等位基因,并分析其与HLA-A、-B的连锁情况。通过收集HLA-C*04:01:01G组标本,采用多聚酶链反应序列分型法(PCR-SBT)分析HLA-C座位第2-7外显子序列,采用PCR-SBT方法对HLA-A、-B、-DRB1和-DQB1基因进行分型。结果表明:在189例HLA-C*04:01:01G组标本中,178例(94.2%)为HLA-C*04:01,11例(5.8%)为C*04:82;共检出HLA-C*04:01:01和C*04:82相关单体型72条,频率大于0.0050的单体型为26条;连锁分析显示HLA-C*04:01:01与A*02:03,A*02:07,A*11:01,A*33:03,B*13:01,B*15:01,B*15:05,B*15:27,B*40:01,B*54:01关联,而HLA-C*04:82与B*40:01关联。结论:HLA-C*04:01:01G组中存在HLA-C*04:01:01和HLA-C*04:82,在常规分型指定中应加以鉴别。

四川骨髓库汉族人群HLA-B~* 07:10的HLA-A,-B,-C,-DRB1,-DQB1 5座位单体型研究

目的了解中华骨髓库四川分库中HLA-B*07∶10的HLA-A,-B,-C,-DRB1,-DQB1 5座位高分辨单体型构成及其分布特点。方法在中华骨髓库四川分库2010～2011年入库数据中,查询含有HLA-B*07∶10的标本,补充其HLA-C,-DQB1高分辨资料;采集家系进行5座位高分辨分型,推导其单体型。以HaploStats查询该单体型在全球的分布。结果筛选到含有HLA-B*07∶10的标本16例。这14名捐献者均携带单体型HLA-A*02∶01-B*07∶10-C*07∶02-DRB1*03∶01-DQB1*02∶01;另2例标本包含HLA-A*02∶01-B*07∶10-C*07∶02,但HLAⅡ类不含有DRB1*03∶01-DQB1*02∶01。HLA-A*02∶01-B*07∶10-DRB1*03∶01 3座位单体型仅在奥地利常见(P>0.001)。结论 HLA-B*07∶10在四川骨髓库汉族人群中有独特的分布,其单体型以HLA-A*02∶01-B*07∶10-C*07∶02-DRB1*03∶01-DQB1*02∶01为主。

一个罕见HLA—C等位基因间重组家系的遗传背景研究

目的 研究HLA-C等位基因座位上的交换重组,探讨HLA新等位基因产生的分子遗传背景.方法 采集拟进行造血干细胞移植的1例慢性粒细胞白血病患者、患者父母以及2名哥哥的静脉血,采用AlleleSEQR HLA 测序分型试剂进行HLA-A、C、B、DRB1和DQB1共5个位点的高分辨基因分型;再采用Protrans S4 HLA单倍体测序技术分离2个HLA-C等位基因,以确定序列异常的1个C等位基因;进一步采用分子克隆和测序方法进行患者及父母HLA-C等位基因的全长单倍体序列分析.按遗传规律分析该家系的HLA 5个位点的连锁单倍型,同时将HLA-C等位基因全长序列经IMGT/HLA Database中的＂BLAST＂程序进行序列的对比,以确定C等位基因重组发生的精确位置.结果 经HLA测序及遗传家系分析,该家系中父亲的2条HLA连锁单倍型分别为a：A＊0207-C＊010201-B＊550201-DRB1＊090102-DQB1＊030302与b：A＊240201-C＊120202-B＊5201-DRB1＊1502-DQB1＊0601;母亲的分别为：c：A＊300101-C＊060201-B＊130201-DRB1＊0405-DQB1＊0401与d：A＊110101-C＊070201-B＊4001-DRB1＊080302-DQB1＊0601.患者的2名哥哥均分别正常遗传了父母的2条单倍体a、d及b、c.患者的2条单倍体分别为母源单倍体c及父源重组单倍体a/b,其中A＊240201来自父亲的1条染色单体b,而B＊550201-DRB1＊090102-DQB1＊030302则来自父亲的另1条染色单体a.对比患者携带的C未知新等位基因与父亲的1对C＊010201 、C＊120202等位基因的全长单倍体序列,推断父亲的2条染色单体在减数分裂时,由于HLA-C等位基因的第273位至330位碱基区域之间发生了交换,重组后形成新的C等位基因及单倍型并遗传给了患者.该C新等位基因的全长序列已递交GenBank,并被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为C＊0121.结论 本研究发现了1个罕见的中国汉族人群HLA-C基因座位上的基因重组家系,阐明了HLA-C＊0121新等位基因及单倍型的产生来源,为更深入研究基因重组及HLA多态性形成机制提供了理论依据.

杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其配体HLA-C基因多态性与不明原因早期复发性流产的相关性

目的:探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其配体HLA-C基因多态性与不明原因早期复发性流产易感性的关系。方法:留取不明原因早期复发性流产患者(38例,URSA组)及正常早孕妇女(35例,对照组)的蜕膜、绒毛组织,抽提基因组DNA,序列特异性引物聚合酶链反应检测蜕膜组织14种KIR基因的表达;DNA测序法分析绒毛滋养细胞HLA-C1、HLA-C2基因多态性。结果:14种KIR基因均以不同频率表达;KIR2DS1基因的频率在URSA组与对照组中分别为60.27%vs41.18%,两组相比,差异有显著性(P=0.03)。两组基因HLA-C1、HLA-C2在绒毛组织中呈不平衡表达,以HLA-C1基因占明显优势。URSA组与对照组HLA-C1基因频率分别为66.67%、81.03%,两组相比差异无显著性,P=0.657;URSA组HLA-C2的基因频率为33.33%,对照组HLA-C2的基因频率为19.07%,两组相比差异有显著性,P=0.007。结论:蜕膜NK细胞活化性KIR基因频率升高,与绒毛滋养细胞的HLA-C2基因结合,传递活化性信号活化NK细胞,可能是引起URSA发病的免疫遗传学因素之一。

直接测序法用于四川骨髓库汉族人群HLA-C等位基因分布的研究

目的建立HLA-C等位基因通用引物直接测序法,研究中华骨髓库四川分库(简称四川骨髓库)中川籍汉族人群HLA-C等位基因分布。方法在四川骨髓库已获HLA-A/B/DRB1高分辨分型结果的600余份川籍汉族街头无关自愿捐献者标本中,随机选择244份标本,采用PCR-SBT对HLA-C位点测序分型,通用引物测序后产生的模棱两可分型结果,分别采用加测相应外显子和组特异性测序方法确认;获得所有标本确切的高分结果后,计算HLA-C各等位基因分布频率,并与其他人群比较。结果 244份标本中直接出HLA-C位点高分辨结果的比例为27.87%(68/244),须加测外显子1、5、6和7的为61.07%(149/244),须组特异性测序的为47.54%(116/244);共检出HLA-C等位基因25个,其中等位基因频率>10%的3个:C*01∶02、C*07∶02和C*03∶04,等位基因频率>1%的12个,累计频率95.69%;四川汉族人群HLA-C等位基因的分布与中国南方人群最为接近,与美国高加索人群和黑人的差异最大。另外,发现了1例新等位基因C*06∶45,它与同源性最高的C*06∶02在第187位碱基存在1个点突变:G>T,使密码子39由GAC>TAC,导致编码的氨基酸由天门冬氨酸(Asp)>酪氨酸(Tyr);此位点在此之前尚未发现过碱基突变。结论建立了针对HLA-C基因第2—4外显子的通用引物直接测序法,并提出了模棱两可结果的解决策略,所测标本均获得确切高分结果;四川汉族人群中HLA-C等位基因呈现多样性并存在自身特点。

血小板输注效果和HLA-C基因关联性研究

目的 研究血小板输注效果与HLA-C基因的关联性。方法 选取HLA抗体检测阳性患者72名进行血小板交叉配型实验,从中筛选出合适供者的血小板给患者输注,采用PCR-SSP方法分别对患者和供者进行HLA-C位点基因分型;分析HLA-C1和C2两组基因型在血小板输注中的作用。结果 在再生障碍性贫血(AA)患者中血小板输注有效率显著高于急性髓细胞白血病(AML)患者,分别是60.71%(17/28)和39.29%(11/28)。HLA-C1C1相合,在AA和AML患者中,血小板输注有效率均高于无效率;当HLA-C不相合,患者C1C1-供者C1C2和C2C2,在AA和AML患者中,血小板输注有效率均低于无效率,患者C1C2-供者C2C2,在AA患者中血小板输注有效3人次,无效0人次,而在AML中血小板输注有效0人次,无效2人次,患者C1C2-供者C1C1,在AA和AML患者中血小板输注的有效率和无效率相当,当患者C1C1和C1C2-供者C2C2时,在AML患者中血小板输注无效。结论 HLA-C基因型与血小板输注效果有关。

HLA在C^3I系统仿真中的应用

首先介绍了 C3I系统仿真的特点 ,以及高层系统结构 HLA的思想 ,并对其在 C3I系统仿真中的应用作了初步的讨论。

造血干细胞移植供受者HLA-C分子结构分析

目的 观察造血干细胞移植 (HSCT)供受者HLA C分子结构差异 ,探讨免疫抑制信号系统在HSCT后GVHD中的作用。方法 利用DNA测序和蛋白质三维空间结构模拟分析方法回顾性观察HSCT后发生GVHD的供受者的HLA C分子结构差异。结果 HLA C分子在氨基酸序列、三维空间结构、电性分布和分子表面结构上有明显差异。结论 HSCT供受者间HLA C分子结构差异导致HLA C分子不能被供者免疫细胞的杀伤细胞抑制性受体识别 。

HLA-C基因分型与皖籍汉族人寻常性银屑病关系的研究

目的 探讨皖籍汉族人寻常性银屑病 (PsV )与HLA C等位基因的相关性。方法 运用聚合酶链反应 -序列特异性引物 (PCR SSP)法 ,对 166例皖籍PsV患者和 2 48例健康对照进行HLA C基因分型。结果 ①PsV患者组HLA Cw 0 60 2等位基因频率较对照组显著升高 (OR =4.13 ,95 %可信限 2 .3 8～ 7.16,Pc <0 .0 1) ,但HLA Cw 0 3 0 4等位基因频率则较对照组明显减低 (OR =0 .3 2 ,95 %可信限 0 .17～ 0 .60 ,Pc <0 .0 1) ;②早发型PsV (I型银屑病 )及有PsV家族史患者携带HLA Cw 0 60 2等位基因频率分别高于迟发型PsV (II型银屑病 )及无PsV家族史患者 (OR =4.3 2 ,95 %可信限 2 .44～ 7.67,Pc <0 .0 1和OR =13 .2 8,95 %可信限 6.12～ 2 9.11,Pc <0 .0 1)。结论 皖籍汉族人PsV与HLA Cw 0 60 2等位基因高度关联 ,且携带该等位基因的个体易发生早发型银屑病 ,并有家族倾向性。

HLA-A/B/C/DRB1/DQB1对非血缘造血干细胞移植影响的分析

本研究探讨供受者HLA-A/B/C/DRB1/DQB1等位基因不合的数目和位点对非血缘造血干细胞移植的影响。选取北京市道培医院101例非血缘造血干细胞移植病例,分别根据供受者HLA-A/B/C/DRB1/DQB1位点0-3个等位基因不合和HLA-C位点的不同,分组统计移植后1年以上总生存率、急性GVHD发生率和复发率。结果表明:①按供受者HLA等位基因水平10/10全相合组(30例)与9/10相合组(32例),8/10相合组(31例)以及7/10相合组(8例)分组比较,10/10和9/10组的1年以上总活存率(OS)较8/10组(78%and 82%vs50%,p=0.39)增多;10/10组、9/10组和8/10组复发率为16%和18%vs20%;10/10组没有Ⅱ度以上GVHD发生,9/10和8/10组10%左右。7/10组虽然病例数少,缺乏统计学意义,但结果证实安全有效。②)对比HLA-C位点等位基因不合组与HLA-10/10全合组,HLA-C不合组有延长1年以上总生存率(77%vs85%,p=0.30),降低复发率的趋势(8%vs17%,p=0.47),其Ⅱ度以上GVHD发生率明显增高,统计学有明显差异(0%vs25%,p=0.006)。③按抑制性KIR的配体HLA-C1/C2将HLA-10/10组与HLA-C一个等位基因不合组按供受者HLA-C1/C2 match和mismatch分为两组(37例和5例),发现1年以上总生存率、复发率,GVHD发生率无明显差异(78%vs80%,14%vs20%,和5%vs20%)。结论:供受者HLA-A/B/C/DRB1/DQB1等位基因不相合数目0-2个情况下,数目越少,1年以上生存率越高,复发率和急性GVHD无明显差异。7/10组是安全的。HLA-C不相合组GVHD发生率明显增高,有减少复发和延长生存率的趋势,但其原因是否与抑制性KIR与其配体HLA-C1/C2有关,尚待研究。

PCR-SBT检测HLA-C座位1-7外显子序列鉴别HLA-C＊07：01：01G和C＊07：02：01G组等位基因

本研究旨在探讨区分人类白细胞抗原(HLA)-C*07:01:01G和HLA-C*07:02:01G组内等位基因,并分析其与HLA-B的连锁情况。通过收集HLA-C*07:01:01G组和HLA-C*07:02:01G组标本,采用聚合酶链反应测序分析方法(PCR-SBT)检测HLA-C座位第1-7外显子编码序列,并采用PCR-SBT方法对标本进行HLA-B基因分型。结果表明,13例HLA-C*07:01:01G组标本中,4例(30.8%)标本为HLA-C*07:01:01,9例(69.2%)标本为HLA-C*07:06;连锁分析显示,HLA-C*07:06与HLA-B*44:03高度连锁。102例HLA-C*07:02:01G组标本全部为HLA-C*07:02:01;连锁分析显示,HLA-C*07:02:01与HLA-B*51:01、B*46:01、B*39:01、B*40:01、B*38:02、B*15:02高度连锁。结论:HLA-C*07:01:01G组中发现存在HLA-C*07:01:01和HLA-C*07:06,而HLA-C*07:02:01G组中以HLA-C*07:02:01为主导。

HLA-C和HLA-G基因真核细胞双表达载体的克隆及鉴定分析

目的 构建人HLA C和HLA G基因真核细胞双表达载体。方法 用RT PCR从孕妇蜕膜组织有核细胞总mRNA中逆转录扩增全长HLA C和HLA GcDNA ,首先将HLA G经BamHⅠ和ClaⅠ双酶切 ,HLA C经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后 ,分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2的多克隆位点 1(mcs1)和 2 (mcs2 )中 ,然后经酶切和测序鉴定 ,确定已建立pVITRO2的单表达质粒pVITRO2 HLA G和pVITRO2 HLA C ,再将HLA CcDNA经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切 ,定向插入单表达质粒pVITRO2 HLA G的多克隆位点 2 (mcs2 )中 ,经PCR反应初筛 ,再经双酶切鉴定。结果 限制性内切酶和测序分析表明已成功构建了HLA Cw 0 10 3和HLA G 0 10 1的单表达质粒pVITRO2 HLA C和pVITRO2 HLA G以及双表达质粒pVITRO2 HLA CG。结论 本研究成功构建了真核细胞双顺反子载体pVITRO2的双表达质粒pVITRO2 HLA CG ,以及单表达质粒pVITRO2 HLA C和pVITRO2 HLA G。

HLA/RTI仿真环境和C^3I系统通用接口设计与实现

仿真系统和C3I系统之间的互操作性,逐渐成为仿真界和研制C3I系统的工业部门关注的热点。首先从理论角度,分析了两类系统的互操作技术参考模型。其次在分析C3I系统与仿真系统的互连互通现有的接口方法的基础上,从通用性的角度,提出了一种HLA/RTI仿真环境和C3I系统之间进行互操作的通用接口,接着以一个作战想定为例,阐述了两类系统互操作接口的运行机制,最后设计了接口的原型实现。

人类白细胞抗原HLA-A／C座位间基因重组的发现

目的：发现并证实两例人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）复合体 HLA-A/C座位间的基因重组。方法采集拟进行 HLA-I，II类 A，B和DRB1位点进行低分辨分型的两个家系共计12人的外周血标本，采用聚合酶链反应-序列特异寡核苷酸探针技术（PCR-SSO）和聚合酶链反应-序列特异性引物技术（PCR-SSP）进行 HLA低分辨分型，然后用基于测序的分型方法（SBT）进行高分辨基因分型，再根据结果进行遗传家系分析研究，确定 HLA基因重组相关位点。结果通过 HLA低、高分辨基因分型的结果进行家系分析，其中一个家系 A＊30∶01/32∶01-C＊06∶02间发生了重组，另一个家系是 A＊11∶01/26∶01-C＊07∶06间发生了重组，两个家系均是在染色单体减数分裂时 HLA-A和-C基因座位间发生了重组，均是父亲的2条染色单体间发生了交换，重组后产生的新的单倍型又完整的遗传给了下一代。结论发现并证实两例中国汉族人群 HLA-A/C基因座位间的基因重组家系，为更深入研究 HLA重组机制奠定了坚实的基础。

HLA-C基因5'端-35kb T/C多态性对HIV感染进展影响的研究

目的探讨HLA-C基因5'端-35kb C/T多态性(Rs9264942)在四川汉族HIV感染中的影响。方法采用序列特异性引物扩增(PCR-SSP)方法对四川汉族259例HIV感染进展组,46例HIV感染长期不进展组,和270例四川汉族对照组人群HLA-C基因5'UTR区域-35kb C/T的多态性进行分型。结果 -35kb C/T多态性在HIV感染进展组,HIV感染不进展组及正常对照组人群中各等位基因分布符合Hardy-Weinberg平衡,在HIV感染进展组中:CC频率为15.1%、CT频率41.3%、TT频率43.6%;HIV感染不进展组中:CC频率为21.7%、CT频率39.1%、TT频率39.1%;在正常对照组中:CC频率为18.9%、CT频率43.0%、TT频率38.1%。经统计学检验,-35kb C/T多态性中各等位基因频率在3组人群中没有统计学差异。结论 HLA-C基因-35kb C/T多态性与四川汉族HIV感染者的感染进程没有相关性。

西安地区供血员中HLA-A2抗原分布和HCV感染关系的初步研究

用对比研究的方法分析了１５例感染丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的供血员（病例组）和１５例健康供血员（对照组）中ＨＬＡⅠ类抗原分布频率。结果发现，病例组中，ＨＬＡ－Ａ２、Ａ１１、Ｂ４０、Ｂ１５的抗原频率分别为２６．６７％、３３．３３％、６．６７％、２０．００％。对照组中ＨＬＡ－Ａ２、Ａ１１、Ｂ４０、Ｂ１５的抗原频率分别为７３．３３％、４０．００％、６．６７％、６．６７％，ＨＬＡ－Ａ２抗原频率在病例组和对照组之间存在显著差异（Ｐ＜０．０５）。

广州地区HLA-DR基因多态性与汉族HCV-6a感染相关性的研究

目的探讨广州地区HLA-DR抗原和HCV-6a感染相关性。方法选取2002～2008年抗-HCV检测双试剂阳性无偿献血者250名,随机抽取135名广州地区无血缘关系的健康无偿献血者作为对照,用逆转录-套式聚合酶链反应扩增HCV E1和NS 5B基因,并进行测序。根据所测定的序列,与GENE BANK标准序列进行比对,作病毒基因的分型。利用LUMINEX-SSO方法检测HLA-DR位点。根据公式对HLA型别相关性的相对危险性进行评估。结果 250名无偿献血者中有69个样本的HCV E1和NS 5B区分型结果为HCV-6a,占到分析总数的27.6%。DR*14与HCV-6a感染相关评估的RR值均>4,与HCV-6a感染具有强关联性;DR*13,DR*12,DR*07和DR*16与HCV-6a感染相关评估的RR值均<1,表示此HLA-DR抗原位点对HCV-6a感染有抵抗性。结论广州地区HCV-6a的感染与DR*14存在强关联性,对HCV-6a的治疗、预后评价以及免疫逃逸有一定预见作用。

用计算机程序预测可与HLA－A2分子结合的HCV抗原肽

本文设计了一个具有查找ＨＬＡ分子结合多肽功能的“Ｆｉｎｄｉｎｇｅｐｉｔｏｐｅ”程序，并针对ＨＬＡ－Ａ２分子特异的多肽结合基序（ｐｅｐｔｉｄｅｂｉｎｄｉｎｇｍｏｔｉｆ）建立了一个计算机评分系统。对ＨＣＶ１型丙型肝炎病毒株中的ＨＣＶ－１和ＨＣＶ－Ｈ两条氨基酸序列分析后发现，报道的ＨＩ－Ａ－Ａ２分子结合的ＨＣＶ抗原均包含于查找的结果中，且绝大多数（１１／１２）评分≥１４４分。提示该程序可作为一种较为灵敏的能预测与ＨＬＡ－Ａ２分子结合的ＨＣＶ抗原的方法。

献血人群中HCV感染与HLA-Ⅱ类基因的相关性研究

目的人类白细胞抗原(HLA)在机体抗病毒免疫中起重要作用,探讨献血人群中丙型肝炎病毒(HCV)感染与HLA-II类基因的相关性。方法选择2011年10月至2013年10月在浙江省血液中心献血的人员中HCV RNA阳性的样本45例,同时以健康人群为对照,其中HLA-DRB1位点对照样本8 333例,HLA-DRB1位点对照样本72例,用PCR-SBT方法测定献血者HLA-II类基因中DRB1和DQB1等位基因情况。结果 HLA-DRB1基因的DRB1*01:02(P=0.0394,OR=23.4,95%CI=2.89~189.1),DRB1*13:01(P=0.0095,OR=5.60,95%CI:1.74~18.00);HLA-DQB1基因的DQB1*03:03(P=0.0402,OR=0.45,95%CI:0.21~0.94),DQB1*06:01(P=0.0456,OR=2.47,95%CI:1.05~5.83),这些基因位点的多态性在HCV RNA阳性献血者中的频率与健康对照人群比较有统计学差异。结论在献血人群中HCV感染与HLA-II类基因中部分多态性位点有相关性。