HLA等位基因DRB1*0301和DQB1*0602与自身免疫性甲状腺疾病的关系

①目的 探讨山东沿海地区自身免疫性甲状腺疾病 (AITDs)的发病与HLA DRB1 0 30 1、DQB1 0 6 0 2等位基因的相关性。②方法 应用多聚酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)技术 ,对已确诊的Graves病(GD) 90例、桥本甲状腺炎 (HT) 4 3例和正常对照 90例 ,扩增其HLA等位基因DRB1 0 30 1、DQB1 0 6 0 2的目的DNA片段 ,分析两对等位基因在不同人群中表达频率的差异。③结果 山东沿海地区GD和HT病人DRB1 0 30 1等位基因频率均显著高于对照组 (χ2 =4 .6 2 4、5 .0 0 3,P <0 .0 5 ) ;而DQB1 0 6 0 2等位基因频率均显著低于对照组 (χ2 =1 1 .2 0 4、6 .970 ,P <0 .0 1 )。④结论 HLA DRB1 0 30 1可能是山东沿海地区GD和HT的易感基因 ,而DQB1 0 6 0

压力超负荷致心肌细胞增殖细胞核抗原和周期素D1的表达变化及其与心肌肥大的关系

目的观察压力超负荷所致肥大心肌中增殖细胞核抗原和周期素D1的表达变化,探讨其与心肌肥大的相互关系。方法采用腹主动脉缩窄法建立大鼠心肌肥大模型,在术后不同时间点用颈总动脉插管法动态测定心功能并观察左心室体重比及心肌细胞横径的变化,用免疫组织化学方法检测心肌细胞增殖细胞核抗原和周期素D1表达变化,分别计算其阳性细胞占总心肌细胞数的比率。结果腹主动脉缩窄术后各时间点左心室体重比及心肌细胞横径进行性增高(P<0.05),同时心功能也进行性增强(P<0.05)。增殖细胞核抗原和周期素D1阳性率术后1周时显著增高(P<0.01),随后逐步回降,6周时同对照组相比差异无显著性。结论心肌肥大中不仅有心肌细胞体积的增大而且早期伴有增殖指标高表达,这种增殖指标的高表达随着心脏对负荷的适应逐步回降至正常水平,而心肌细胞体积仍进行性增大。

沉默HLA A2表达的骨髓间充质干细胞安全性的研究

目的探讨人白细胞抗原A2(HLA A2)表达沉默后人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)的安全性。方法实验分为对照组(正常培养至第8代细胞组)及实验组1和实验组2(分别为HLA A2表达沉默后第5代、第15代)。复苏HLA A2表达沉默的hBMSCs,通过观察细胞的生长曲线、端粒酶活性和抑癌基因P27的表达水平、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)和Cyclin D2的表达水平,分析细胞的安全性。并将细胞接种于裸鼠的皮下,24周后观察荷瘤组织的种类。结果实验组1、实验组2与对照组相比,细胞生长曲线没有明显的左移或右移。HLA A2表达沉默的hBMSCs在沉默HLA A2表达后,3组间的端粒酶活性没有明显差异;3组的Cyclin D2、CDK4和抑癌基因P27的表达量也没有明显变化。细胞接种于裸鼠皮下24周,只有异位成骨,而没有形成肿瘤组织。结论人BMSCs的HLA A2表达沉默后,在实验周期内,没有明显证据表明有安全性的改变。

我国汉族Vogt—Koyanagi—Harada综合征患者人类白细胞抗原DQBI基因多态性研究

目的 探讨人类白细胞抗原（HLA）DQB1启动子和编码子在Vogt-Koyanagi-Harada（VKH）综合征发病中的作用.方法 88例汉族VKH综合征患者和88名正常对照者纳入本研究.VKH综合征患者中,男性41例,女性47例,发病年龄15～67岁,平均年龄（36±11）岁.正常对照者中,男性42例,女性46例,年龄24～68岁,平均年龄（41±19）岁.采用聚合酶链式反应-序列特异性引物（PCR-SSP）方法进行HLA-DQB1等位基因分型,聚合酶链式反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）-克隆-测序法检测HLA-DQB1基因启动子区（HLA-QBP）等位基因.应用x2检验或Fisher精确概率法进行统计分析.结果 VKH综合征患者中HLA-DQB1＊0401（0.318比0.045,x2=44.00,P=0.000,OR=9.8）和DQB1＊0303（0.068比0.006,x2=9.67,P=0.002,OR=12.81）频率明显高于正常对照者,差异有统计学意义.而HLA-DQB1＊0601（0.017比0.096,x2=10.39,P=0.001,OR=0.16）和HLA-DQB1＊0302（0.063比0.193,x2=13.48,P=0.000,OR=0.28）在VKH综合征患者中出现的频率显著低于正常对照者,差异有统计学意义.VKH综合征患者HLA-DQB1基因启动子区-189C/A的C等位基因频率显著高于正常对照者（0.324比0.074,x2=45.92,P=0.000）,而-227G/A等位基因频率低于正常对照者（0.011比0.108,x2=15.63,P=0.000）.VKH综合征患者中易感等位基因的组合（-189C和HLA-DQB1＊0401）频率明显高于正常对照者,正常对照者中抗性等位基因的组合（-227G和HLA-DQB1＊0601）频率显著高于VKH综合征患者.结论 VKH综合征发病可能与HLA-DQB1启动子和编码区相互作用有关.

抗原活化慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞的对比研究

目的探讨不同抗原在体外活化慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞（DC）及诱导特异性T细胞应答的能力。方法用无血清培养基从慢性乙型肝炎患者外周血中分离培养DC，在DC成熟前，分别加入HBsAg多肽、HBcAg多肽刺激，用流式细胞仪检测DC表型，用液闪计数仪观察DC对T细胞的增殖作用，用ELISA法检测混合淋巴细胞反应（MLR）中IL-12的分泌水平。结果经HBcAg多肽刺激DC的CD86表达率为（92．20±5．18）％，明显高于HBsAg多肽刺激组（76、19±3．90）％和未加抗原组（62、37±4．24）％，P〈0．01；经HBcAg多肽刺激组DC诱导同种异体静止T细胞增殖的能力每分钟液闪计数值cpm为34326±3088，明显高于HBsAg多肽刺激组20306±2897和单个核细胞组3454±409，P〈0、01；经HBcAg多肽刺激组DCMLR中IL-12（348±42、8）ng／L，分别高于HBsAg多肽刺激组（226±30、6）ng／L和未加抗原组（116±15．6）ng／L，P〈0．01。结论使用HBcAg多肽刺激DC可比HBsAg多肽更有效地提呈病毒抗原，提高诱导特异性T细胞应答的能力。

人视网膜色素上皮细胞与T淋巴细胞的激活

目的 观察人视网膜色素上皮（RPE）细胞人类白细胞抗原（HLA）-DP、-DQ、DR抗原和CD40抗原的表达，以确定它们在免疫应答过程中的分子表达和刺激T淋巴细胞活化的能力。方法人RPE细胞分别在γ-干扰素诱导和无诱导的条件下培养，免疫组织化学染色方法测定HLA—DP、-DQ、-DR抗原和CD40抗原在RPE细胞中的表达。体外共同培养人RPE细胞和外周血单个核细胞，荧光活化细胞分类仪测定其中活化的T淋巴细胞CD69的表达。结果γ-干扰素能够诱导HLA—DP、DQ、-DR抗原表达升高和CD40在人RPE细胞上的表达，CD69阳性的T淋巴细胞，在人RPE细胞与外周血单个核细胞的共同培养系统中的含量增加。结论人RPE细胞能够激活外周血中T淋巴细胞，是一种具有免疫学特性潜能的抗原递呈细胞。

T淋巴细胞亚群的早期活化对乙型肝炎疫苗接种后免疫应答的影响

目的探讨乙型肝炎疫苗接种后免疫应答与T淋巴细胞亚群活化的关系。方法采集18例乙型肝炎疫苗接种应答者、22例乙型肝炎疫苗接种无应答者、10例未接受乙型肝炎疫苗接种的健康对照者全血，用流式细胞术对其外周血单个核细胞的表面标志物CD69、CD4、CD8、CD3等进行检测。计算不同T淋巴细胞亚群百分比，并经f检验比较不同T淋巴细胞亚群CD69表达的差异。结果在应答者中，外周血激活型T辅助淋巴细胞（CD69＋CD4＋T淋巴细胞）数明显升高，而CD69＋CD8＋T淋巴细胞数则明显减少。应答者、无应答者、对照者外周血CD69＋CD4＋T淋巴细胞分别占CD4＋T淋巴细胞的（1．81±1．33）％、（O．64±0．48）％和（O．56±0．39）％，应答者分别与无应答者和对照者比较，差异均有统计学意义（t=3．444、3．940，均P〈0．01）。应答者、无应答者、对照者外周血CD69＋CD8＋T淋巴细胞分别占CD8＋T淋巴细胞的（0．43±0．25）％、（3．05i-1．69）％和（3．11±2．41）％，应答者分别与无应答者和对照者比较，差异均有统计学意义（t=7．997、5．944，均P〈0．01）。应答者、无应答者、对照者CD3＋CD4＋T淋巴细胞占CD3＋T淋巴细胞的百分比和CD3＋CD8＋T淋巴细胞占CD3＋T淋巴细胞的百分比比较差异均无统计学意义。结论乙型肝炎疫苗接种后无应答与Th细胞早期活化不足有关。