毛细管参考链介导的构象分析法在HLA-DRB1等位基因分型中的应用

目的 :探讨应用参考链构象分析法对HLA DRB1等位基因分型的准确性及实用性。方法 :应用毛细管参考链介导的构象分析法建立 31个等位基因的标准迁移率 ,对 5 0例样本进行分型 ,并与SBT法检测结果进行比较。结果 :5 0例样本中 4 7 5 0与测序法测得的等位基因一致 ,以DRB1 0 80 32、DRB1 0 90 12为参考链无法检测出DRB1 110 1、DRB1 14 0 3。结论 :毛细管参考链介导的构象分析法具有准确性高、分辨率高、成本低、高通量的特点 。

寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的研究

对寡核苷酸DNAMicroarray用于HLADRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚 /氯仿法提取标准血样基因组DNA ,在DRB1的exon 2区域设计一对引物 ,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5 dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针 ,将探针固定在APS PDC法制作的DNAMicroarray上 ,用标记的PCR产物与之杂交 ,扫描仪对杂交结果进行扫描 ,Imagene软件对杂交图象进行分析。共检测了 33例标准血样的HLADRB1基因型。检测结果证明研制的DNAMicroarray准确、灵敏。DNAMicroarray技术可以有效地检测DRB1等位基因 ,对比常规的PCR SSP和PCR SSO方法、分型基因芯片方法更为直观 。

HLA-DRB1高分辨测序分型与48例非亲缘性脐血移植者GVHD相关性分析

1998年6月至2003年7月,广州脐血库向国内21家移植中心提供非亲缘异基因脐血移植54例。本研究采用PCR产物直接测序法对HLA-DRB1进行高分辨分型(PCR-sequencing based typing PCR-SBT),并结合HLA-SSP低分辨分型结果,探讨非亲缘性脐血移植供/受者HLA-DRB1等位基因及其亚型与脐血移植GVHD发生率的关系。利用盐析或柱提法提取48例非亲缘性脐血及移植患者全血DNA,采用HLA-SBT方法分别对HLA-DRB1等位基因进行高分辨分型,并与HLA-SSP(HLA-sequencing specific primers)低分辨结果进行比较分析。结果表明:采用双盲法对48例非亲缘性脐血移植供/受者样本HLA-DRB1进行高分辨分型,结果HLA-DRB1等位基因亚型匹配全相合病例的GVHD发生率(25%)显著低于不完全相合病例的GVHD发生率(65.6%)(P=0.008)。结论:对HLA-DRB1采用高分辨分型方法在非亲缘性脐血移植HLA分型方面具有重要的临床应用价值。

武汉籍汉族类风湿关节炎患者HLA—DRB1＊04、＊01基因分型和临床相关性研究

为探讨人类白细胞抗原 (HL A) - DRB1 * 0 4、* 0 1基因与武汉籍汉族类风湿关节炎 (RA)的相关性。采用聚合酶链反应 -序列特异性引物法 (PCR- SSP) ,对 78例 RA患者和 12 6例健康者的 HL A- DRB1 * 0 1、* 0 4基因型进行检测。结果显示 RA患者 DR4基因频率为 5 2 .5 % ,对照组为 2 1.6 % ,两组有显著性差异 (P<0 .0 1) ,DR1 基因频率两组无差异 (P>0 .0 5 )。RA患者 HL A- DR4的主要亚型为 DRB1 * 0 40 5 (32 .1% )与对照组 (6 .3% )有显著性差异 (P<0 .0 1)。DR4阳性的 RA患者的关节压痛数、关节肿胀数、类风湿因子 (RF)阳性率、关节侵蚀性病变明显高于 DR4阴性的患者 (P<0 .0 1)。提示 HL A- DR4基因与 RA患者易感性及疾病严重性相关 ,其主要亚型为 DRB1 * 0 40 5、 DRB1 * 0 40 1。

基因芯片在卵巢组织HLA-DRB1分型中的应用

目的用基因芯片对胎儿卵巢组织和成人卵巢组织进行HLA-DRB1分型,对于进一步了解胎儿卵巢基因型及其档案的建立进行了初步探索。方法将6份胎儿卵巢组织分别与育龄妇女及绝经后妇女卵巢组织的基因组DNA,通过组间特异引物不对称扩增,扩增中同时用荧光素Cy3标记。扩增标记后的产物与结合在HLA-DRB1基因分型芯片上的探针进行杂交,通过荧江扫描仪对杂交产生的荧光信号值进行分析,确定样品的HLA-DRB1基因型。结果18例卵巢组织样本中,纯合子只有1例,其余均为杂合子。其中两例胎儿卵巢组织的HLA-DRB1型别分别与一例育龄妇女卵巢组织及一例绝经后妇女卵巢组织相吻合。芯片重复率为100%。结论基因芯片是一种理想的分型方法,具有特异性高、重复性好、操作简便、所需时间少、结果判读容易、一次可作多份样本的优点。通过这种技术对胎儿卵巢HLA-DRB1进行快速分型,可为卵巢移植手术的供受体选择节约了时间和成本,并可进一步建立胎儿卵巢组织的基因型档案,为卵巢移植工作开展奠定基础。

HLA-DRB1基因分型与慢性乙型肝炎的相关性研究

目的探讨HLA-DRB1等位基因多态性与慢性乙型肝炎之间的关系。方法采用聚合酶链反应、反向特异性序列寡核苷酸探针(SSO)基因分型技术结合Luminex液态芯片技术对81例慢性乙型肝炎患者和90例正常人的HLA-DRB1等位基因进行分型比较。结果HLA-DRB1等位基因0901型在慢性乙型肝炎的等位基因频率明显高于对照组(33.33%、15.56%),两者相比差异有显著性(χ2=7.40,P<0.01,RR=2.71),而HLA-DRB1等位基因0403型在慢性乙型肝炎的等位基因频率明显低于对照组(16.05%、35.56%),两者相比差异有显著性(χ2=8.37,P<0.01,RR=0.37);其他型别的等位基因2组间没有明显差别。结论HLA-DRB1等位基因0901型与慢性乙型肝炎易感性密切相关,可能是慢性乙型肝炎的易感基因或连锁基因;HLA-DRB1等位基因0403型与慢性乙型肝炎抗性密切相关,可能是慢性乙型肝炎的抗性基因。宿主的HLA-DRB1是乙肝病毒感染转归的重要因素。

外阴硬化性苔藓中医辨证分型与HLA-A\B\DRB1基因多态性的相关性研究

目的:观察中国汉族妇女外阴硬化性苔藓患者中医辨证分型与HLA-A\B\DRB1基因多态性的相关性。方法:选取中国汉族妇女外阴硬化性苔藓中属肝肾阴虚型40例、肝经湿热型36例,正常健康中国汉族妇女62人(正常对照组),分别采用PCR-SSP方法进行基因多态性关联检测分析。结果:HLA-B*15、HLA-DRB1*12等位基因在外阴硬化性苔藓各中医证型出现的频率均升高,与正常对照组相比有极显著性差异(P<0.01);等位基因HLA-B*40在肝肾阴虚组患者中呈低表达,与正常对照组比较亦有极显著性差异(P<0.01)。结论:HLA-B*15、HLA-DRB1*12等位基因可能是中国汉族妇女VLS肝肾阴虚型与肝经湿热型的易感基因,HLA-B*40等位基因可能是中国汉族妇女VLS肝肾阴虚型的保护性基因,而与VLS肝经湿热型无相关性。HLA-B*40等位基因在两组中的显著性差异提示中医辨证分型的物质基础和异质性,对VLS的诊断、治疗、预测和中医辨证分型均具有重要意义。

HLA-DRB1等位基因的多态性及其应用

HLA系统参与和调节机体免疫功能,是人类重要的遗传标志,具有种族、地域差异。HLA-II类系统中DRB1等位基因的多态性最丰富,它的准确分型直接影响器官移植的供体选择、法医学个体认定、HLA与疾病相关性及人类学等研究。本文综述了HLA-DRB1分型检测方法,不同种族人群HLA-DRB1等位基因的多态性,HLA-DRB1多态性研究在探讨人类起源、民族融合方面的价值,HLA-DRB1与肝炎、系统性红斑狼疮等疾病的相关性等。

广东地区CML患者中HLA-A,B,DRB1的表达与分析

为了调查慢性髓系白血病(CML)患者中HLA-A、B、DRB1基因多态性的表达,探讨HLA与CML之间的可能关联,采用DNA扩增基础上的反向序列特异性寡核苷酸杂交(PCR-RSSO)技术,对广东地区293例CML患者和随机同期采集的406名汉族健康献血者的HLA-A、B、DRB1位点进行基因多态性分型,并对2组间基因频率进行了比对分析。结果显示:CML组HLA-A*24基因频率为15.53%,显著低于对照组22.09%(RR=0.63,p=0.005),HLA-B*13基因频率为10.41%,与对照组6.74%相比则显著增高(RR=1.68,p=0.016),HLA-DRB1*14基因频率为7.51%,与对照组11.89%相比显著降低(RR=0.58,p=0.008)。结论:HLA-A*24、HLA-DRB1*14在广东地区CML患者中表达较正常人明显减低,HLA-B*13在广东地区CML患者中表达较正常人明显升高。HLA-A*24、HLA-DRB1*14是否为广东地区CML患者的保护性基因标记及HLA-B*13是否为其易感性基因标记尚需进一步研究明确。

重庆地区汉族人群HLA-A、B、DRB1、DQB1等位基因多态性的研究

目的研究重庆地区人群HLA-A、B、DRB1和DQB1位点等位基因的多态性特点。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术对1 664名重庆籍健康人进行HLA-A、B、DRB1、DQB1等位基因的低分辨分型,并与国内其他地区汉族人群进行比较。结果本次研究共检出HLA-A、B、DRB1、DQB1位点等位基因62种,其中A位点14种,B位点27种,DRB1位点13种,DQB1位点8种。A位点中A*11(34.62%)、A*02(28.81%)、A*24(14.93%)、A*30(5.53%)为重庆人群的优势基因。B位点中B*46(14.92%)>B*40(12.96%)>B*13(12.39%)>B*51(7.26%)。DRB1位点中,频率最高的为DRB1*09(15.65%),其次为DRB1*12(14.78%)、DRB1*14(14.49%)、DRB1*04(14.49%)。DQB1位点中,频率最高的为DQB1*07(26.04%),其次为DQB1*05(19.94%)、DQB1*09(15.51%)。与其他地区不同人群相比,HLA-A、B、DRB1、DQB1各位点等位基因的分布均有显著的差异。结论重庆地区人群的HLA-A、B、DRB1、DQB1位点等位基因符合南方汉族人群分布特点,具有复杂的多态性,中国各地常见的基因均有分布,白血病及其他器官移植患者在重庆不难找到合适的供者。

HLA-DRB1基因多态性与慢性乙型肝炎病毒感染的相关性研究

目的研究HLA-DRB1等位基因与HBV感染慢性化的相关性。方法用PCR-SSP方法对陕西地区汉族慢性乙肝患者108例与正常对照108人以及慢性乙型肝炎表面抗原携带者32人进行HLA-DRB1等位基因分型比较,并进行HLA-DRB1等位基因分型与HBV复制状态相关性分析。结果陕西地区汉族人HLA-DRB1等位基因以DRB1*04(16.2%),DRB1*09(12.5%),DRB1*12(11.6%),DRB1*15(13.4%)最为常见;病例组HLA-DRB1*03的等位基因频率(10.6%)明显高于健康对照组(3.7%),(OR=3.10;P<0.05);HLA-DRB1*07等位基因频率病例组(17.6%)明显高于健康对照组(9.3%),(OR=2.09;P<0.05);DRB1*07基因位点在HBV高复制状态多见(OR=2.22;P<0.05)。结论HLA-DRB1*03、HLA-DRB1*07与陕西地区汉族人HBV感染后的慢性化相关联。该研究提示HLA-Ⅱ类基因与HBV感染慢性化有关联。

4082名上海骨髓库汉族无关供者HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因及单体型多态性研究

目的了解上海地区汉族人群HLA-A、B、DRB1在高分辨分型水平上的等位基因及单体型频率分布特征。方法采用PCR-测序分型技术(Sequence-based typing,SBT)对4 082名随机、无血缘关系、健康的中华骨髓库上海分库汉族造血干细胞捐献者进行HLA-A、B、DRB1高分辨基因分型,利用计数法和最大似然性原理方法分别计算HLA-A、B、DRB1等位基因及单体型频率。结果 4 082例样本中,共观察到204个HLA等位基因,其中频率>0.1的HLA-A、B、DRB1等位基因分别有A*11∶01、A*24∶02、A*02∶01、B*46∶01、DRB1*09∶01、DRB1*15∶01。841条A-B单体型中,70条单体型呈现显著的连锁不平衡(ALD>0,HF≥3.67×10-4,χ2>3.84),8条表现为强连锁不平衡(RLD>0.40),17条单体型的频率高于0.01;1 027条B-DRB1单体型中,99条单体型呈现显著的连锁不平衡(ALD>0,HF≥3.67×10-4,χ2>3.84),12条表现为强连锁不平衡(RLD>0.40),12条单体型的频率高于0.01;3 344条A-B-DRB1单体型中,681条单体型是"可靠的"(频率≥3.67×10-4),单体型频率高于0.001有135条。结论获得上海地区汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因频率和单体型分布数据及相关遗传参数,为临床移植供者的选择、中国人群CWD表的制订、骨髓库最适库容的评估及人类遗传学研究提供参考数据。

HLA-A,B,DRB1单体型频率计算及其在骨髓库中的应用

目的从群体资料计算HLAA,B,DRB1三座位单体型频率,并用于骨髓库寻找HLA匹配供者。方法根据HLA表型群体资料,使用最大数学预期值算法(ExpectationMaximization,EM)计算HLA三座位单体型频率。通过实例运算介绍HLA表型频率以及发现HLA匹配无关供者的概率。结果①使用DNA基因分型技术鉴定12193例无关汉族健康个体HLA表型,计算求得HLAA,B,DRB1单体型频率。②预期概率与观察结果吻合,并用于评估骨髓库的最适大小。结论使用EM算法估计大样本汉族群体HLAA,B,DRB1三座位单体型频率,结果可靠,可用于评估骨髓库的最适大小和组份。

DNA序列分析鉴定HLA-DRB1新等位基因DRB1 1449

目的鉴定HLADRB1位点新等位基因。方法应用基因克隆和DNA测序技术对1例受检样本HLADRB1基因第2外显子(Exon2)作核苷酸序列分析,与已知等位基因序列比对并作血清学分型。结果基因组DNA和DNA克隆的测序结果一致;DRB1Exon2的核苷酸序列与已知等位基因序列均不相同,与同源性最高的HLADRB11432相比,存在4处碱基的改变;以Exon2的第1位碱基为记数起点,核苷酸71位C→>G,196位G→>A,244位T→>G和245位上G→>T,引起相应编码氨基酸28位上天门冬氨酸(Asp)→>谷氨酸(Glu),70位上精氨酸(Arg)→>谷氨酸盐(Gln),86位上缬氨酸(Val)→>氨基乙酸(Gly)。血清学分型结果表明新等位基因血清学特异性为DR14。结论被检标本HLADRB位点存在新等位基因,2005年2月WHOHLA命名委员会正式将其命名为HLADRB11449。

HLA-DRB1*7及*13等位基因与原发性肝癌的相关性研究

目的探讨HLA-DRB多态性与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的相关性。方法以37例按诊断标准确诊的原发性肝癌患者作为病例组、20例健康人作为对照组，应用PCR-SSP方法对HLA—DRB1^＊7及HLA-DRB1^＊13两个等位基因进行检测，分析这两个等住基因与原发性肝细胞癌发生的相关性。结果HIn—DRB1^＊07和HLA—DRB1^＊13在病例组的分布频率均较对照组显著下降（x^2=-8．707，P=0．003，OR．=19．38；x^2=21．808，P=0．000，OR=2．222）。结论HLA-DRB1^＊07和HLA-DRB1^＊13等住基因的缺失可能与原发性肝癌发生的遣传易感性存在相关性。

HLA—DRB1^＊等位基因与肺结核的相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原HLA-DRB1*等位基因与肺结核发病相关性,寻找与肺结核发病可能相关的HLA-DR易感基因。方法采用病例-对照的研究方法,用PCR-SSO分型技术对80名肺结核患者和105名健康对照者的HLA-DRB1基因分型,统计分析比较基因频率和相对危险率。结果肺结核病组中的HLA-DRB1*14频率明显高于对照组(10.63%vs3.81%),差异有显著性统计学意义(χ2=6.6955,P<0.05),相对危险率2.91。结论HLA-DRB1*14基因可能与肺结核的易感性相关。

特应性皮炎与HLA-DRB1 DQB1基因的相关性研究

目的探讨HLA-DRB1和DQB1位点基因与汉族特应性皮炎的相关性。方法用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法,对59例特应性皮炎患者(来自27个家系)和60例正常对照者进行了HLA-DRB1和DQB1等位基因的分型,并分析了DRB1和DQB1基因在各组中的分布。结果特应性皮炎患者组DRB1*15,DR7,DQB1*0601等位基因频率较正常对照组增高(P<0.05);特应性皮炎患者组DQB1*0302频率较正常对照组降低(P<0.05)。特应性皮炎家系成员中对屋尘螨抗原皮试阳性者HLA-DR7等位基因频率较皮试阴性者均显著增高(P<0.05)。结论特应性皮炎的发病可能与DRB1*15,DR7,DQB1*0601相关;DQB1*0302对特应性皮炎的发病可能起保护作用。HLA-DR7在限定对屋尘螨抗原特异性IgE反应过程中起重要作用。

河南汉族斑秃及其中医证型与HLA-DRB1基因的相关性研究

目的探讨河南汉族斑秃及其中医证型与HLA-DRB1基因的相关性。方法采用PCR-SSO流式荧光微珠检测技术(SSO,序列特异性寡核苷酸探针),对114例河南汉族斑秃患者的HLA-DRB1基因多态性进行研究,并对斑秃中医证型与HLA-DRB1的相关性进行分析。结果HLA-DRB1*12低于正常对照组(χ2=5.209,P=0.022),HLA-DRB1*15显著高于正常对照组(χ2=10.079,P=0.001)。这两个基因甚至HLA-DRB1*16都可能与发病轻重程度有关。各中医证型基因频率未发现显著性差异。结论河南汉族斑秃与HLA-DRB1相关联,中医证型基因频率差异不明显。

HLA-DRB1多态性对LCL TNF分泌能力的影响

通过对２７个已确定ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因型别的ＬＣＬ进行ＴＮＦ生物活性的检测，结果发现：ＴＮＦ的表达水平与特定的ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因型别关联，携带ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０７０Ｘ的个体，其ＬＣＬ经ＬＰＳ刺激后，ＴＮＦ生物活性水平比不携带ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０７０Ｘ的个体低（Ｐ＜０．０１），且以ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０７０Ｘ纯合子细胞表达量最低，杂合子次之。提示：ＨＬＡ－ＤＲＢ１遗传多态性参与调控ＬＣＬ的ＴＮＦ表达水平，影响ＴＮＦ的产生可能是ＨＬＡ复合体发挥免疫调节的重要因素之一。

HLA-DRB1*07/09/11等位基因对广西肝癌高发区肝癌家族聚集性的影响

目的探讨人类白细胞相关抗原复合体的DRB1*07/09/11等位基因对广西肝癌高发区肝癌家族聚集性的影响。方法以配对方法选取广西肝癌高发区的肝癌高发家族成员、肝癌单发家族成员及无癌家族成员各153例作为研究对象,应用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR-SSP)方法检测HLA-DRB1*07/09/11等位基因,统计分析各等位基因与原发性肝癌家庭聚集性的相关性。结果 (1)HLA-DRB1*07/09等位基因在肝癌高发家族成员组、肝癌单发家族成员组和无癌家族成员组的基因频率分别为0.70%和2.00%、2.60%和19.00%、23.50%和16.30%(P>0.05);HLA-DRB1*11为2.60%、13.70%和11.10%(P<0.01);(2)HLA-DRB1*07/09/11等位基因在乙型肝炎病毒感染成员组(HBsAg阳性组)及非乙肝病毒感染成员组(HBsAg阴性组)中的基因频率分别为:0%、2.60%;19.00%、19.90%和9.50%、9.00%(P值均>0.05)。结论 (1)HLA-DRB1*11等位基因可能是广西肝癌高发区原发性肝癌发生的拮抗基因,其缺失可能是导致广西肝癌高发区肝癌家族聚集性原因之一。(2)HLA-DRB1*07、09、11等位基因与广西肝癌高发区乙肝病毒感染的易感性似无明显关联。