广西地区人群乙肝疫苗无、弱应答与HLA-DRB1*11等位基因的相关性研究

目的研究广西地区人群接种重组乙肝疫苗后无、弱应答与HLA-DRB1*11等位基因的相关性。方法选取广西籍912名健康大学生,按0,1,6方案标准全程接种重组乙肝疫苗,接种半年后采血检测血清中抗-HBs水平。对首次检测抗-HBs<10 mIU/ml者再行接种重组乙肝疫苗20 ug。4周后抗-HBs仍小于10 mIU/ml的65人作为无、弱应答组,随机抽取首次检测抗-HBs>10 mIU/ml的中、强应答者96名作为对照组。应用PCR-SSP方法检测外周血HLA-DRB1*11等位基因。结果HLA-DRB1*11等位基因在无、弱应答组的携带率为16.92%,在中、强应答组的携带率为14.58%,两组比较无统计学意义(P>0.05)。结论HLA-DRB1*11等位基因频率与广西地区人群乙肝疫苗免疫无、弱应答无明显相关性。

DNA序列分析鉴定HLA-DRB1新等位基因DRB1 1449

目的鉴定HLADRB1位点新等位基因。方法应用基因克隆和DNA测序技术对1例受检样本HLADRB1基因第2外显子(Exon2)作核苷酸序列分析,与已知等位基因序列比对并作血清学分型。结果基因组DNA和DNA克隆的测序结果一致;DRB1Exon2的核苷酸序列与已知等位基因序列均不相同,与同源性最高的HLADRB11432相比,存在4处碱基的改变;以Exon2的第1位碱基为记数起点,核苷酸71位C→>G,196位G→>A,244位T→>G和245位上G→>T,引起相应编码氨基酸28位上天门冬氨酸(Asp)→>谷氨酸(Glu),70位上精氨酸(Arg)→>谷氨酸盐(Gln),86位上缬氨酸(Val)→>氨基乙酸(Gly)。血清学分型结果表明新等位基因血清学特异性为DR14。结论被检标本HLADRB位点存在新等位基因,2005年2月WHOHLA命名委员会正式将其命名为HLADRB11449。

HLA—DRB1^＊等位基因与肺结核的相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原HLA-DRB1*等位基因与肺结核发病相关性,寻找与肺结核发病可能相关的HLA-DR易感基因。方法采用病例-对照的研究方法,用PCR-SSO分型技术对80名肺结核患者和105名健康对照者的HLA-DRB1基因分型,统计分析比较基因频率和相对危险率。结果肺结核病组中的HLA-DRB1*14频率明显高于对照组(10.63%vs3.81%),差异有显著性统计学意义(χ2=6.6955,P<0.05),相对危险率2.91。结论HLA-DRB1*14基因可能与肺结核的易感性相关。

HLAⅡ-DRB1等位基因与口腔扁平苔藓的相关性研究

目的:探讨人类白细胞抗原HLAⅡ-DRB1等位基因与新疆汉族口腔扁平苔藓(OLP)患者的相关性。方法:采用多聚酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,对34例OLP患者和123例正常对照进行HLAⅡ-DRB1等位基因表现频率检测。结果:OLP组DRB1*11等位基因表现频率(23.53%)高于正常对照组(9.76%)(P<0.05);OLP组DRB1*120x等位基因表现频率(5.88%)低于正常对照组(22.76%)(P<0.05)。结论:DRB1*11等位基因可能与新疆地区汉族人群OLP患者易感性相关;DRB1*120x等位基因可能是新疆汉族OLP患者的保护基因。

维吾尔族、汉族慢性胃炎患者中HLA-DRB1*12等位基因与幽门螺杆菌感染的关系

目的:探讨慢性胃炎患者HLA-DRB1*12等位基因与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法:采用Hp分离培养技术检测36例汉族、33例维吾尔族慢性胃炎患者的Hp感染情况,并采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法检测HLA-DRB1*12等位基因多态性。结果:汉族、维吾尔族慢性胃炎患者Hp阳性率分别为56%、79%,维吾尔族明显高于汉族(P<0.05);维吾尔族与汉族慢性胃炎患者Hp(-)者的HLA-DRB1*12等位基因检出率高于Hp(+)者,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:维吾尔族慢性胃炎患者Hp阳性率可能高于汉族,维吾尔族与汉族慢性胃炎患者中HLA-DRB1*12等位基因可能与Hp感染无关。

北方汉族寻常型银屑病与HLA-DRB1及DQB1等位基因相关性研究

目的:探讨HLA-DRB1及DQB1等位基因与北方汉族寻常型银屑病相关性。方法:利用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)分型技术,对63例寻常型银屑病患者和102例健康人的HIA-DRB!及DQB1等位基因进行检测。结果:(1)HLA-DRB1*070x、DRB1*1001及DOB`*020x等位基因与北方汉族寻常型银屑病呈正相关(P分别为0.001,0.005,0.009);HLA-DRB1*120x等位基因与北方汉族寻常型银屑病呈负相关(P=0.007)。(2)HLA-DRB1*070x及DQB1*020x等位基因仅与家族史阳性的早发型(Ⅰ型)银屑病发病相关(P<0.001)。(3)HLA-DRBq*1001等位基因频率在Ⅰ型及无家族史的晚发型(Ⅱ型)银屑病均显著性增高(P<0.05)。结论:(1)HLA-DRB1*070x、DRB1*1001及DQB1*020x等位基因可能是北方汉族寻常型银屑病的易感基因或与易感基因相连锁;HLA-DRB1*120x等位基因可能是阻止北方汉族人发生银屑病的保护基因。(2)Ⅰ型及Ⅱ型银屑病的遗传背景存在差异。

新等位基因HLA-DRB1*1462的核苷酸序列分析

本研究验证一个新的HLA等位基因DRB1*1462的核苷酸序列。应用PCR-SSO和PCR-SSP基因分型技术对HLA分型,对怀疑是HLA新等位基因进行DNA测序。结果发现,该序列与已知的所有HLA-DRB1等位基因序列不一致,与HLA-DRB1*140101的序列差异仅表现在第2外显子区域中256位碱基发生了G->A的替换,导致相应的氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸。结论:该基因是HLA-DRB1位点的一个新等位基因,已经被WHOHLA命名委员会于2006年1月30日正式命名为HLA-DRB1*1462。

毛细管参考链介导的构象分析法在HLA-DRB1等位基因分型中的应用

目的 :探讨应用参考链构象分析法对HLA DRB1等位基因分型的准确性及实用性。方法 :应用毛细管参考链介导的构象分析法建立 31个等位基因的标准迁移率 ,对 5 0例样本进行分型 ,并与SBT法检测结果进行比较。结果 :5 0例样本中 4 7 5 0与测序法测得的等位基因一致 ,以DRB1 0 80 32、DRB1 0 90 12为参考链无法检测出DRB1 110 1、DRB1 14 0 3。结论 :毛细管参考链介导的构象分析法具有准确性高、分辨率高、成本低、高通量的特点 。

大疱性类天疱疮与HLA-DRB1等位基因的相关性研究

目的:探讨山东汉族大疱性类天疱疮(BP)与HLA-DRB1等位基因的相关性。方法:运用聚合酶链反应-序列特异性引物寡核苷酸探针杂交(PCR-SSOP)方法,对山东地区汉族43例BP患者和125名健康对照组进行了HLA-DRB1等位基因分型。结果:BP患者组HLA-DRB1*10和DRB1*11等位基因的出现频率均高于对照组(P值分别为0.040和0.018),但经校正后P值均无显著性差异;HLA-DRB1*11与BP患者黏膜损害相关(P=0.003,Pc<0.05,RR=12.3)。结论:大疱性类天疱疮的遗传易感基因可能与HLA-DRB1等位基因无相关性。

新疆维吾尔族慢性胃炎人群中HLA-DRB1*08等位基因与幽门螺杆菌感染的关系

目的:研究新疆维吾尔族慢性胃炎人群HLA DRB1*08等位基因与幽门螺杆菌感染的关系。方法:采用幽门螺杆菌分离培养技术检测慢性胃炎汉族36例,维吾尔族33例人群的幽门螺杆菌感染情况,并采用PCRSSP检测HLA-DRB1*08等位基因。结果:(1)新疆维吾尔族慢性胃炎人群H.pylori(Hp)阳性率为79%,高于汉族慢性胃炎人群(56%)(P<0.05)。(2)两组慢性胃炎人群Hp阳性组中HLA-DRB1*08等位基因频率在汉族为10.0%,在维吾尔族为15.4%,HLA-DRB1*08等位基因在汉族与维吾尔族慢性胃炎人群中检出频率无差异,维吾尔族与汉族慢性胃炎人群中HLA DRB1*08等位基因与Hp感染无关(P>0.05)。结论:(1)维吾尔族Hp感染率高于汉族慢性胃炎人群(P<0.05)。(2)维吾尔族与汉族慢性胃炎人群中HLA DRB1*08等位基因与H.pylori感染率无关。

寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的研究

对寡核苷酸DNAMicroarray用于HLADRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚 /氯仿法提取标准血样基因组DNA ,在DRB1的exon 2区域设计一对引物 ,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5 dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针 ,将探针固定在APS PDC法制作的DNAMicroarray上 ,用标记的PCR产物与之杂交 ,扫描仪对杂交结果进行扫描 ,Imagene软件对杂交图象进行分析。共检测了 33例标准血样的HLADRB1基因型。检测结果证明研制的DNAMicroarray准确、灵敏。DNAMicroarray技术可以有效地检测DRB1等位基因 ,对比常规的PCR SSP和PCR SSO方法、分型基因芯片方法更为直观 。

中国湖北汉族人群HLA-DRB1基因多态性研究

目的:调查湖北汉族人群人类白细胞抗原(HLA)-DRB1基因多态性,获得完整准确的遗传学数据。方法:应用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法对213名随机选取无亲缘关系的湖北籍汉族健康体检者或健康献血员进行HLA-PDRB1基因型检测。结果:在213名正常个体中,发现基因频率(GF)较高的有DRB1*1501-1502(GF=11.0%)、*1101-1105(GF=8.5%)、*0901(GF=6.8%)、*1301-1302(GF=6.6%)、DRB4*0101(GF=19.0%)、DRB5*0101(GF=16.9%),低频率等位基因是DRB1*04、*1001和*0101-0103。结论:从基因水平分析了HLA-DRB1基因在湖北汉族群体中的分布特征,提供了一套比较完整准确的DRB1基因频率,为人类学和疾病相关性等研究提供了重要的参考数据。

HLA-DRB1高分辨测序分型与48例非亲缘性脐血移植者GVHD相关性分析

1998年6月至2003年7月,广州脐血库向国内21家移植中心提供非亲缘异基因脐血移植54例。本研究采用PCR产物直接测序法对HLA-DRB1进行高分辨分型(PCR-sequencing based typing PCR-SBT),并结合HLA-SSP低分辨分型结果,探讨非亲缘性脐血移植供/受者HLA-DRB1等位基因及其亚型与脐血移植GVHD发生率的关系。利用盐析或柱提法提取48例非亲缘性脐血及移植患者全血DNA,采用HLA-SBT方法分别对HLA-DRB1等位基因进行高分辨分型,并与HLA-SSP(HLA-sequencing specific primers)低分辨结果进行比较分析。结果表明:采用双盲法对48例非亲缘性脐血移植供/受者样本HLA-DRB1进行高分辨分型,结果HLA-DRB1等位基因亚型匹配全相合病例的GVHD发生率(25%)显著低于不完全相合病例的GVHD发生率(65.6%)(P=0.008)。结论:对HLA-DRB1采用高分辨分型方法在非亲缘性脐血移植HLA分型方面具有重要的临床应用价值。

GD药物引起粒细胞减少与等位基因的关系

采用多聚酶链式反应-序列特异引物(pcr-ssp)方法检测65例GD病人抗甲状腺药物引起粒细胞减少(1)组,65例GD病人并发粒细胞减少(2)组,65例非GD病人粒细胞减少(3)组,65例正常参照人群(4)组的HLA-DRB1*08032 DRB1*1501的等位基因频率。结果1:(1)组HLA-DRB1*08032 DRB1*1501的基因频率高于(2)组(P<0.05)。2:(1)组HLA-DRB1*08032 DRB1*1501的基因频率明显高于(3)组(4)组,(P<0.01)。3:(2)组HLA-DRB1*08032DRB1*1501的基因频率高于(4)组(P<0.05)。结论:GD病人应用抗甲状腺药物引起粒细胞减少与HLA-DRB1*08032DRB1*1501等位基因频率增加有关。

中国人类风湿关节炎与PADI4功能基因多态性及部分HLA-DRB1等位基因相关性研究

目的分析类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）中4型肽精氨酸转亚胺基酶（peptidylargininedeiminaseⅣ，PADI4）功能基因多态性，探讨PADI4基因多态性与RA易感性的关系，以及编码与RA易感性相关HLA共同表位（sharedepitope，SE）的HLA—DRB1等位基因与PADI4基因多态性的相关性。方法采用逆转录合成cDNA、DNA测序和T载体克隆方法分析67例RA患者、81名正常人PAD髓基因外显子4个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs），包括PADi4_89＊A／G，PADI4_90＊C／T，PADI4_92＊C／G，PADI4_104＊C／T；采用PCR-序列特异性引物方法分析HLA—DRB1＊01、＊04、＊10基因型。结果RA患者PAD／489、90、104位基因多态性分布与正常对照组比差异有统计学意义，携带PADI4少见等位基因者对RA的危险性较携带常见等位基因者显著增加；分析编码SE等位基因与PADI4 SNPs的相关性发现，SE＋／PADI4_89G-携带者较SE-／PADI4_89e携带者发生RA的危险性高4．7倍（OR=4．7，95％CI：1．6～13．4，P=0．003），携带SE＋／PADI4_89G＋者高5．6倍（OR=5．6，95％CI：2．0～15．7，P=0．003）。在PADI4_90、92、104位均出现相似的情况。结论PADI4功能基因多态性与中国人RA的易感性相关，编码SE的HLA—DRB1等位基因仍然是RA的重要遗传标记，而且HLA—DRB1等位基因与PADI4的少见等位基因间可能存在一定的协同作用。

江苏7地市汉族人群HLA—DRB1等位基因多态性分析

目的分析江苏7地市汉族造血干细胞捐献志愿者人类白细胞抗原（HLA）-DRB1位点的基因频率，研究比较该7地市人群HLA—DRB1基因多态性。方法采用聚合酶链反应-直接测序分型（PCR—SBT）和聚合酶链反应一反向序列特异性寡核苷酸探针（PCR—rSSOP）基因分型技术，对中华骨髓库江苏分库2787名无关供者的HLA—DRB1位点进行高分辨分型，分别计算并比较各地市HLA．DRB1基因频率。结果淮安、徐州、泰州、宿迁、南京、常州、扬州HLA—DRB1位点分别检出等位基因38、33、26、36、37、31、26个。在淮安、徐州、宿迁，频率最高的HLA—DRB1等位基因分别是DRB1＊07：01、09：01、15：01、12：02。在南京，频率最高的HIA—DRB1等位基因分别是DRB1＊09：01、07：01、15：01、12：02。在扬州，频率最高的HLA-DRB1等位基因分别是DRB1＊09：01、07：01、15：01、08：03。在泰州，频率最高HLA-DRB1等位基因是DRB1＊09：01、07：01、04：05、15：01；在常州，频率最高的HLA—DRB1等位基因是DRB1＊09：01、07：01、12：02、08：03。结论本资料反映了江苏7地市汉族人群HLA．DRB1基因分布，具有丰富的多态性，其中南京、扬州基因频率相近最接近中国北方群体的特征。淮安、徐州、宿迁、常州、泰州5地市相近，除了DRB1＊09：01、07：01两高频基因频率有所差异外也接近中国北方。本研究为HLA与疾病相关研究和我国人群群体遗传学研究等提供有意义的基础性资料。

结节病患者HLA—A、HLA—B、HLA—DRB1等位基因多态性

结节病是多系统受累的非干酪性类上皮细胞肉芽肿性疾病。病因尚不清楚，目前认为，结节病主要是遗传易感人群暴露于原因未明的可传播因素，引起过度的细胞免疫反应导致肉芽肿所致。人类白细胞抗原（HLA）具有多态性，是人体免疫功能的细胞分子学基础。在不同的种族研究中发现，结节病与HLA基因有一定的相关性。本研究对华东地区汉族结节病患者进行HLA—A、HLA—B、HLA—DRB1基因分型，探讨HLA基因多态性与汉族结节病的相关性。

家庭成员中反复腹痛与无反复腹痛者的幽门螺杆菌感染和HLA—DQB1、DRB1等位基因频率分析

目的研究家族成员中反复腹痛和无反复腹痛患者的幽门螺杆菌（Hp）感染和人类白细胞抗原（HLA）-DQA1等位基因频率分布。方法应用胶体金标免疫渗滤法和免疫印迹法检测20个反复腹痛患儿家族118名成员血Hp—IgG抗体和亚型。118人被分为Hp感染有腹痛症状组69例和无腹痛症状组49例；用聚合酶链反应一序列特异性引物（PCR—SSP）方法对两组家族成员进行HLA—DQB1和DRB1基因分型检测。结果20个家族中Hp抗体和Hp亚型阳性率分别为100％和96．6％，Ⅰ型Hp感染占55．1％，Ⅱ型Hp感染为41．5％。家族中Hp感染有腹痛症状组HLA-DQB1＊09和DRB1％09的等位基因频率高于无腹痛症状组，但经等位基因多项比较校正后差异消失（14％vs6％，x^2=4．012，P=0．045，Pc〉0．05；10％VS5％，x^2=5．636，P=0．018，Pc〉0．05）。结论在Hp感染的家族成员中，反复腹痛者与无腹痛者之间存在免疫遗传学差异，HLA—DQB1＊09和DRB1＊09等位基因和Hp感染后反复腹痛的相关性需深入研究。

HLA新等位基因HLA-DRB1＊09：01：07的序列分析及确认

目的研究并确认在中国汉族人群中发现的1个HLA新等位基因序列。方法应用聚合酶链式反应一序列特异性寡核苷酸探针（polymerase chain reactionsequence—specific oligonucleotide probes，PCR—SSOP）基因分型技术和基于测序的分型技术（sequencing-based typing，SBT）对1名中华骨髓库辽宁分库汉族捐献者的HLAA、-B、-DRB1基因进行分型，通过软件分析该基因序列及与最相近等位基因序列的差异。结果PCR—SSOP分型时该个体HLA—DRB1基因型为DRB1＊09：03，15GEP，但探针反应格局出现异常；测序结果为DRB1＊15：01：01和一个DRB1＊09新等位基因，比较新等位基因与序列最相近的等位基因DRB1＊。9：01：02在nt306 C→T，导致相应的第73位密码子GCC→GCT，但其编码的氨基酸未改变，仍为丙氨酸。结论发现一个HLA—DRB1新等位基因，被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA—DRB1＊09：01：07。