新等位基因HLA-DRB1*1462的核苷酸序列分析

本研究验证一个新的HLA等位基因DRB1*1462的核苷酸序列。应用PCR-SSO和PCR-SSP基因分型技术对HLA分型,对怀疑是HLA新等位基因进行DNA测序。结果发现,该序列与已知的所有HLA-DRB1等位基因序列不一致,与HLA-DRB1*140101的序列差异仅表现在第2外显子区域中256位碱基发生了G->A的替换,导致相应的氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸。结论:该基因是HLA-DRB1位点的一个新等位基因,已经被WHOHLA命名委员会于2006年1月30日正式命名为HLA-DRB1*1462。

HLA-DRB1等位基因的多态性及其应用

HLA系统参与和调节机体免疫功能,是人类重要的遗传标志,具有种族、地域差异。HLA-II类系统中DRB1等位基因的多态性最丰富,它的准确分型直接影响器官移植的供体选择、法医学个体认定、HLA与疾病相关性及人类学等研究。本文综述了HLA-DRB1分型检测方法,不同种族人群HLA-DRB1等位基因的多态性,HLA-DRB1多态性研究在探讨人类起源、民族融合方面的价值,HLA-DRB1与肝炎、系统性红斑狼疮等疾病的相关性等。

广东地区CML患者中HLA-A,B,DRB1的表达与分析

为了调查慢性髓系白血病(CML)患者中HLA-A、B、DRB1基因多态性的表达,探讨HLA与CML之间的可能关联,采用DNA扩增基础上的反向序列特异性寡核苷酸杂交(PCR-RSSO)技术,对广东地区293例CML患者和随机同期采集的406名汉族健康献血者的HLA-A、B、DRB1位点进行基因多态性分型,并对2组间基因频率进行了比对分析。结果显示:CML组HLA-A*24基因频率为15.53%,显著低于对照组22.09%(RR=0.63,p=0.005),HLA-B*13基因频率为10.41%,与对照组6.74%相比则显著增高(RR=1.68,p=0.016),HLA-DRB1*14基因频率为7.51%,与对照组11.89%相比显著降低(RR=0.58,p=0.008)。结论:HLA-A*24、HLA-DRB1*14在广东地区CML患者中表达较正常人明显减低,HLA-B*13在广东地区CML患者中表达较正常人明显升高。HLA-A*24、HLA-DRB1*14是否为广东地区CML患者的保护性基因标记及HLA-B*13是否为其易感性基因标记尚需进一步研究明确。

寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的研究

对寡核苷酸DNAMicroarray用于HLADRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚 /氯仿法提取标准血样基因组DNA ,在DRB1的exon 2区域设计一对引物 ,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5 dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针 ,将探针固定在APS PDC法制作的DNAMicroarray上 ,用标记的PCR产物与之杂交 ,扫描仪对杂交结果进行扫描 ,Imagene软件对杂交图象进行分析。共检测了 33例标准血样的HLADRB1基因型。检测结果证明研制的DNAMicroarray准确、灵敏。DNAMicroarray技术可以有效地检测DRB1等位基因 ,对比常规的PCR SSP和PCR SSO方法、分型基因芯片方法更为直观 。

重庆地区汉族人群HLA-A、B、DRB1、DQB1等位基因多态性的研究

目的研究重庆地区人群HLA-A、B、DRB1和DQB1位点等位基因的多态性特点。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术对1 664名重庆籍健康人进行HLA-A、B、DRB1、DQB1等位基因的低分辨分型,并与国内其他地区汉族人群进行比较。结果本次研究共检出HLA-A、B、DRB1、DQB1位点等位基因62种,其中A位点14种,B位点27种,DRB1位点13种,DQB1位点8种。A位点中A*11(34.62%)、A*02(28.81%)、A*24(14.93%)、A*30(5.53%)为重庆人群的优势基因。B位点中B*46(14.92%)>B*40(12.96%)>B*13(12.39%)>B*51(7.26%)。DRB1位点中,频率最高的为DRB1*09(15.65%),其次为DRB1*12(14.78%)、DRB1*14(14.49%)、DRB1*04(14.49%)。DQB1位点中,频率最高的为DQB1*07(26.04%),其次为DQB1*05(19.94%)、DQB1*09(15.51%)。与其他地区不同人群相比,HLA-A、B、DRB1、DQB1各位点等位基因的分布均有显著的差异。结论重庆地区人群的HLA-A、B、DRB1、DQB1位点等位基因符合南方汉族人群分布特点,具有复杂的多态性,中国各地常见的基因均有分布,白血病及其他器官移植患者在重庆不难找到合适的供者。

HLA-A,B,DRB1单体型频率计算及其在骨髓库中的应用

目的从群体资料计算HLAA,B,DRB1三座位单体型频率,并用于骨髓库寻找HLA匹配供者。方法根据HLA表型群体资料,使用最大数学预期值算法(ExpectationMaximization,EM)计算HLA三座位单体型频率。通过实例运算介绍HLA表型频率以及发现HLA匹配无关供者的概率。结果①使用DNA基因分型技术鉴定12193例无关汉族健康个体HLA表型,计算求得HLAA,B,DRB1单体型频率。②预期概率与观察结果吻合,并用于评估骨髓库的最适大小。结论使用EM算法估计大样本汉族群体HLAA,B,DRB1三座位单体型频率,结果可靠,可用于评估骨髓库的最适大小和组份。

DNA序列分析鉴定HLA-DRB1新等位基因DRB1 1449

目的鉴定HLADRB1位点新等位基因。方法应用基因克隆和DNA测序技术对1例受检样本HLADRB1基因第2外显子(Exon2)作核苷酸序列分析,与已知等位基因序列比对并作血清学分型。结果基因组DNA和DNA克隆的测序结果一致;DRB1Exon2的核苷酸序列与已知等位基因序列均不相同,与同源性最高的HLADRB11432相比,存在4处碱基的改变;以Exon2的第1位碱基为记数起点,核苷酸71位C→>G,196位G→>A,244位T→>G和245位上G→>T,引起相应编码氨基酸28位上天门冬氨酸(Asp)→>谷氨酸(Glu),70位上精氨酸(Arg)→>谷氨酸盐(Gln),86位上缬氨酸(Val)→>氨基乙酸(Gly)。血清学分型结果表明新等位基因血清学特异性为DR14。结论被检标本HLADRB位点存在新等位基因,2005年2月WHOHLA命名委员会正式将其命名为HLADRB11449。

HLA-DRB1基因多态性与慢性乙型肝炎病毒感染的相关性研究

目的研究HLA-DRB1等位基因与HBV感染慢性化的相关性。方法用PCR-SSP方法对陕西地区汉族慢性乙肝患者108例与正常对照108人以及慢性乙型肝炎表面抗原携带者32人进行HLA-DRB1等位基因分型比较,并进行HLA-DRB1等位基因分型与HBV复制状态相关性分析。结果陕西地区汉族人HLA-DRB1等位基因以DRB1*04(16.2%),DRB1*09(12.5%),DRB1*12(11.6%),DRB1*15(13.4%)最为常见;病例组HLA-DRB1*03的等位基因频率(10.6%)明显高于健康对照组(3.7%),(OR=3.10;P<0.05);HLA-DRB1*07等位基因频率病例组(17.6%)明显高于健康对照组(9.3%),(OR=2.09;P<0.05);DRB1*07基因位点在HBV高复制状态多见(OR=2.22;P<0.05)。结论HLA-DRB1*03、HLA-DRB1*07与陕西地区汉族人HBV感染后的慢性化相关联。该研究提示HLA-Ⅱ类基因与HBV感染慢性化有关联。

HLA-DRB1高分辨测序分型与48例非亲缘性脐血移植者GVHD相关性分析

1998年6月至2003年7月,广州脐血库向国内21家移植中心提供非亲缘异基因脐血移植54例。本研究采用PCR产物直接测序法对HLA-DRB1进行高分辨分型(PCR-sequencing based typing PCR-SBT),并结合HLA-SSP低分辨分型结果,探讨非亲缘性脐血移植供/受者HLA-DRB1等位基因及其亚型与脐血移植GVHD发生率的关系。利用盐析或柱提法提取48例非亲缘性脐血及移植患者全血DNA,采用HLA-SBT方法分别对HLA-DRB1等位基因进行高分辨分型,并与HLA-SSP(HLA-sequencing specific primers)低分辨结果进行比较分析。结果表明:采用双盲法对48例非亲缘性脐血移植供/受者样本HLA-DRB1进行高分辨分型,结果HLA-DRB1等位基因亚型匹配全相合病例的GVHD发生率(25%)显著低于不完全相合病例的GVHD发生率(65.6%)(P=0.008)。结论:对HLA-DRB1采用高分辨分型方法在非亲缘性脐血移植HLA分型方面具有重要的临床应用价值。

HLA-DRB1*7及*13等位基因与原发性肝癌的相关性研究

目的探讨HLA-DRB多态性与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的相关性。方法以37例按诊断标准确诊的原发性肝癌患者作为病例组、20例健康人作为对照组，应用PCR-SSP方法对HLA—DRB1^＊7及HLA-DRB1^＊13两个等位基因进行检测，分析这两个等住基因与原发性肝细胞癌发生的相关性。结果HIn—DRB1^＊07和HLA—DRB1^＊13在病例组的分布频率均较对照组显著下降（x^2=-8．707，P=0．003，OR．=19．38；x^2=21．808，P=0．000，OR=2．222）。结论HLA-DRB1^＊07和HLA-DRB1^＊13等住基因的缺失可能与原发性肝癌发生的遣传易感性存在相关性。

HLA—DRB1^＊等位基因与肺结核的相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原HLA-DRB1*等位基因与肺结核发病相关性,寻找与肺结核发病可能相关的HLA-DR易感基因。方法采用病例-对照的研究方法,用PCR-SSO分型技术对80名肺结核患者和105名健康对照者的HLA-DRB1基因分型,统计分析比较基因频率和相对危险率。结果肺结核病组中的HLA-DRB1*14频率明显高于对照组(10.63%vs3.81%),差异有显著性统计学意义(χ2=6.6955,P<0.05),相对危险率2.91。结论HLA-DRB1*14基因可能与肺结核的易感性相关。

特应性皮炎与HLA-DRB1 DQB1基因的相关性研究

目的探讨HLA-DRB1和DQB1位点基因与汉族特应性皮炎的相关性。方法用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法,对59例特应性皮炎患者(来自27个家系)和60例正常对照者进行了HLA-DRB1和DQB1等位基因的分型,并分析了DRB1和DQB1基因在各组中的分布。结果特应性皮炎患者组DRB1*15,DR7,DQB1*0601等位基因频率较正常对照组增高(P<0.05);特应性皮炎患者组DQB1*0302频率较正常对照组降低(P<0.05)。特应性皮炎家系成员中对屋尘螨抗原皮试阳性者HLA-DR7等位基因频率较皮试阴性者均显著增高(P<0.05)。结论特应性皮炎的发病可能与DRB1*15,DR7,DQB1*0601相关;DQB1*0302对特应性皮炎的发病可能起保护作用。HLA-DR7在限定对屋尘螨抗原特异性IgE反应过程中起重要作用。

HLA-DRB1多态性对LCL TNF分泌能力的影响

通过对２７个已确定ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因型别的ＬＣＬ进行ＴＮＦ生物活性的检测，结果发现：ＴＮＦ的表达水平与特定的ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因型别关联，携带ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０７０Ｘ的个体，其ＬＣＬ经ＬＰＳ刺激后，ＴＮＦ生物活性水平比不携带ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０７０Ｘ的个体低（Ｐ＜０．０１），且以ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０７０Ｘ纯合子细胞表达量最低，杂合子次之。提示：ＨＬＡ－ＤＲＢ１遗传多态性参与调控ＬＣＬ的ＴＮＦ表达水平，影响ＴＮＦ的产生可能是ＨＬＡ复合体发挥免疫调节的重要因素之一。

用PCR-SSP方法研究重庆地区人群HLA-DRB1基因多态性

目的 了解重庆地区人群 HLA DRB1 基因多态性,分析人群 HLA DRB1 基因频率分布特征。方法 采用 PCR SSP方法对来自中国造血干细胞捐献者资料库重庆分库的3 219名无血缘关系的捐献者进行基因分型,计算 HLA DRB1 基因频率,并与南方汉族、北方汉族人群进行比较。结果 在重庆地区人群中检出了 HLA DRB1 基因型 14 种(低分辨率),其中以DRB1*09,DRB1*15,DRB1*12,DRB1*04 出现频率高。结论 重庆地区人群的 HLA DRB1 基因多态性与南方汉族接近,并有其特点。

河南汉族斑秃及其中医证型与HLA-DRB1基因的相关性研究

目的探讨河南汉族斑秃及其中医证型与HLA-DRB1基因的相关性。方法采用PCR-SSO流式荧光微珠检测技术(SSO,序列特异性寡核苷酸探针),对114例河南汉族斑秃患者的HLA-DRB1基因多态性进行研究,并对斑秃中医证型与HLA-DRB1的相关性进行分析。结果HLA-DRB1*12低于正常对照组(χ2=5.209,P=0.022),HLA-DRB1*15显著高于正常对照组(χ2=10.079,P=0.001)。这两个基因甚至HLA-DRB1*16都可能与发病轻重程度有关。各中医证型基因频率未发现显著性差异。结论河南汉族斑秃与HLA-DRB1相关联,中医证型基因频率差异不明显。

HLA-DRB1＊14，15等位基因与乙肝疫苗免疫应答水平的相关性研究

目的:研究HLA-DRB1*14,15等位基因与基因重组乙肝疫苗免疫应答水平的相关性。方法:选取完成基因重组乙肝疫苗标准全程接种的广西籍汉族健康大学生896名,于末次接种后第6个月检测血清抗-HBs水平。对无、低应答者再次接种基因重组乙肝疫苗20μg,4周后筛选出无、低应答者99名与随机选取的中、强应答者136名作为研究对象,应用PCR-SSP技术检测外周血HLA-DRB1*14,15等位基因。结果:HLA-DRB1*15在中、强应答组中的表达频率为23.53%,显著高于无、低应答组的表达频率(12.12%)(P<0.05);HLA-DRB1*14在无、低应答组和中、强应答组的表达频率分别为8.08%和15.44%,两组比较无明显差异(P>0.05)。结论:广西汉族人群HLA-DRB1*15表达与乙肝疫苗中、强应答相关,HLA-DRB1*14与该人群免疫应答水平无明确相关性。

HLA-DRB1＊15与162例儿童急性淋巴细胞白血病发病的关系

为了研究HLA-DRB1*15与儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的关系,用特异性引物,对162例15岁以下儿童ALL患者进行HLA-DRB1*15检测,对HLA-DRB5*进行PCR扩增,并与1000份健康脐血做显著性比较,计算相对危险度。结果表明:儿童ALL患者DRB1*15的抗原频率为40.12%,等位基因频率为22.62%;对照组抗原频率为30.8%,等位基因频率为16.81%。两组比较,差别有显著的统计学意义(χ2=5.560,p=0.018,RR=1.506)。结论:儿童ALL患者HLA-DRB1*15的抗原频率和等位基因频率均显著高于正常对照,此结果对儿童ALL的发病机制研究有重要意义。

HLA-DRB1＊03等位基因与我国汉族人群慢性乙型肝炎关联性的Meta分析

[目的]用Meta分析的方法综合评价HLA-DRB1*03等位基因与我国汉族人群慢性乙型肝炎(CHB)的关联性。[方法]检索中国生物医学文献数据库、维普数据库和Medline数据库(2000-2006),依据纳入与排除标准,收集所有相关的病例对照研究,应用RevMan4.2软件对符合条件的研究结果进行Meta分析。[结果]符合纳入标准的共9篇文献,合计包含CHB组574例,正常对照组785例,经Egger’s检验未见显著发表偏倚。经综合分析:合并OR值=2.08,95%CI:1.21￣3.57,(Z=2.66,P=0.008),认为HLA-DRB1*03等位基因是我国汉族人群慢性乙型肝炎发生的易感基因。[结论]HLA-DRB1*03等位基因与我国汉族人群慢性乙型肝炎的发生具有显著的统计学关联,为易感基因。

昆明汉族人群HLA-DRB1、DQB1基因多态性分析

目的研究昆明汉族HLA-DRB1、DQB1基因的多态性,探讨其在昆明汉族人群中的遗传特征.方法应用PCR-SSP基因分型技术,对云南昆明地区72名汉族健康儿童进行了HLA-DRB1、DQB1位点的基因分型.结果在昆明汉族,HLA-DRB1位点共检出了12种等位基因,其中以HLA-DRB1*12(20.14%)、DRB1*0901(19.44%)、DRB1*04(18.06%)较常见,其他基因频率大于10%的等位基因还有HLA-DRB1*08(11.11%)、DRB1*15(10.42%);在DQB1位点共检出了7种等位基因,其中以HLA-DQB1*0301(27.08%)、DQB1*06(21.53%)较常见,其他基因频率大于10%的等位基因还有HLA-DQB1*0303(15.97%)、DQB1*05(13.19%).昆明汉族分别与南方汉族、北方汉族HLA-DRB1、DQB1分布进行了比较,均有明显的差异(P<0.001).结论昆明汉族HLA基因分布特点既不同于南方汉族人群,也不同于北方汉族人群,具有独特性.可能与复杂的民族迁移历史和民族融合及云南独特的地理环境有关.

HLA-DRB1基因多态性与汉族人溃疡性结肠炎的相关性研究

目的:研究HLA-DRB1基因多态性与汉族人溃疡性结肠炎(UC)的相关性,以期发现UC的易感基因.方法:采用序列特异性引物聚合酶链反应的方法对汉族72例UC患者和314例正常对照者HLA-DRB1基因分型.结果:UC患者携带DRB1*07等位基因的频率较正常对照组高(19.4%vs 9.2%,P=0.022 9,OR=2.372,95% CI:1.181～4.766),但经Bonferroni校正后PC＞0.05,差异无显著性.在临床亚型分析中,全结肠炎组和无肠外表现组的DRB1*07的频率明显增高.在中重度组中DRB1*07和DRB1*14的频率显著增高,轻度组的DRB1*16的频率明显增高,而携带DRB1*03的5例患者在临床上均表现为轻度,这些差异与正常对照组相比均有统计学意义.且在轻度组中的DRB1*16的频率同样明显高于在中重度组的频率.结论:在汉族人群中,HLA-DRB1*07与全结肠炎、无肠外表现以及中重度UC呈正相关,HLA-DRB1*14和HLA-DRB1*16分别与中重度和轻度UC呈正相关,而HLA-DRB1*03与中重度UC呈负相关,提示HLA-DRB1等位基因与中国汉族人群的UC临床表型有关.