人工合成HLA肽对淋巴细胞增殖反应的影响

人工固相合成两种ＨＬＡ肽（Ｐ１：ＨＬＡ－Ｂ０７０１．７５－８４；Ｐ２：ＨＬＡ－Ｂ２７０２．７５－８４），用ＭＴＴ法观察其在体外对具有不同ＨＬＡ表型淋巴细胞增殖反应的影响及其等位基因特异性。结果显示：Ｐ１和Ｐ２均可显著抑制淋巴细胞的增殖反应；且这种抑制作用无等位基因特异性。

合成HLA肽延长同种小鼠移植皮肤存活时间

目的 :本实验观察人工合成HLA肽 ,HLA -B 2 70 2 75 - 84,对同种小鼠移植皮肤存活时间的影响。方法 :将B6小鼠皮肤移植于受者Balb/c小鼠侧背部 ,并于围手术期给予HLA肽和亚治疗剂量CsA。结果 :HLA肽可显著延长同种异基因小鼠移植皮肤存活时间 ,与对照组比较 ,平均存活时间由 6 5天延长至 2 8 0天 (P <0 0 1)。结论

人工合成HLA衍生肽对CTL和NK细胞毒功能的影响

目的 :探讨合成HLA衍生肽对CTL和NK细胞毒功能的影响。方法 :人工固相合成 2种HLA衍生肽 (P1:HLA B 0 70 1 75 84和P2 :HLA B 2 70 2 75 84) ,分别用MTT法和LDH释放法 ,在体外观察HLA衍生肽对CTL和NK细胞毒功能的影响及其等位基因特异性。结果 :P2可显著抑制CTL的细胞毒效应 (P <0 0 1) ,这种抑制作用不具有等位基因特异性 ,而对NK的细胞毒功能则没有明显影响。结论 :合成HLA肽对CTL和NK细胞毒功能的影响只与HLA肽的序列有关 ,P2即HLA B 2 70 2 75 84,可抑制CTL的细胞毒功能。

HLA衍生肽对大鼠脾细胞增殖功能及HO-1活性的影响

目的 观察一种新型组织相容性白细胞抗原 (histocompatibilityleukocyteantigen ,HLA)衍生肽 (RDP12 5 8)的免疫抑制功能并探讨其机制。方法 人工固相合成一种HLA衍生肽 (RDP12 5 8) ,用 3 H TdR法观察其在体外对大鼠脾细胞增殖反应的影响 ,以酶化学法观察其对脾细胞血红素氧合酶 1(hemeoxygenase 1,HO 1)活性的影响。结果 RDP12 5 8可显著抑制淋巴细胞转化及MLR的增殖反应 ;该肽体外降低HO活性呈现出剂量依赖性。结论 RDP12 5 8能够显著抑制大鼠脾细胞经丝裂原或同种抗原刺激引起的增殖反应 ,这种作用可能是通过影响HO

可溶性HLA-A2-肽复合物的体外折叠与生物素化

目的 :可溶性HLA A2 抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化。方法 :原核高效表达的HLAH链及 β2m,在抗原肽 (EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2 CLGGLLTMV COOH残基 )的存在下 ,通过稀释复性折叠成HLA A2 抗原肽复合物 ,并在BirA酶的作用下进行生物素化 ,使生物素结合到HLA A2 抗原肽复合物中的H链C端。利用特异性抗体 (mAbW6 / 32和兔抗人 β2m抗体 )及链霉亲合素进行ELISA和Westernblot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果 :折叠复合物中 ,主要含有HLAH链聚合体、HLA A2 肽复合物单体及 β2m3种成分 ,其中H链聚合体与HLA A2单体可生物素化。结论 :成功地获得生物素化的HLA A2 抗原肽复合物单体 ,为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础 ,也为过程复杂的HLA

一种新型HLA衍生肽对大鼠脾细胞免疫功能的抑制作用

目的:观察一种新型HLA衍生肽(RDP1258)的免疫抑制功能并探讨其机制。方法:人工固相合成一种HLA衍生肽(RDP1258),3H-TdR掺入法检测其在体外对大鼠脾细胞增殖反应的影响,并采用酶化学法观察其对脾细胞血红素氧化酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)活性的影响。结果:RDP1258可显著抑制淋巴细胞转化及MLR的增殖反应;该肽体外降低HO-1活性呈现出剂量依赖性。结论:RDP1258能够显著抑制大鼠脾细胞经丝裂原或同种抗原刺激引起的增殖反应,这种作用可能是通过影响HO-1活性而达到的。

新型HLA衍生肽对人外周单核细胞免疫功能的抑制作用

目的:探讨一种新型HLA衍生肽(RDP1258)对人外周血单核细胞增殖的免疫抑制作用及其机制。方法:人工固相合成RDP1258,用3H-TdR掺入法观察其在体外对人外周单核细胞增殖反应的影响,以酶化学法观察其对淋巴细胞血红素氧合酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)活性的影响。结果:RDP1258可显著抑制淋巴细胞转化及MLR的增殖反应;该肽体外降低HO-1活性呈现出剂量依赖性。结论:RDP1258能够显著抑制人外周单核细胞经丝裂原或同种抗原刺激引起的增殖反应,这种作用可能是通过影响HO-1活性而达到的。

生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物的制备

目的制备生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物。方法将原核高效表达的sHLA-A*2402-BSP融合蛋白及β2m和HLA-A*2402限制性抗原肽EB病毒BRLF1蛋白中的九肽NH2-TYPVLEEMF-COOH进行稀释、复性、折叠,形成HLA-A*2402-抗原肽复合物单体,并在BirA酶作用下进行生物素化,使生物素结合到HLA-A*2402-抗原肽复合物中H链C端的BSP序列上形成生物素化的sHLA-A*2402-抗原肽复合物单体。利用特异性单克隆克体(W6/32和兔抗人2β微球蛋白抗体)及链霉亲合素进行ELISA和Western blot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果折叠复合物中,主要含有HLA-A*2402-肽复合物单体及β2m两种成分,其中HLA-A*2402-肽复合物单体可生物素化。结论成功制备出生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物单体,为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础。

HLA衍生肽诱导移植免疫耐受机制的研究概况

器官移植排斥是移植领域久未攻克的医学难题。诱导受者产生特异性移植免疫耐受是克服移植排斥反应较为理想的办法。人工合成HLA肽 (peptidesderivedfromHLA)可诱导受者产生特异性移植免疫耐受 ,但HLA衍生肽诱导耐受机制目前尚不清楚 。

HLA-表位肽四聚复合物检测系统在研究HBV/HCV抗原特异性CTL中的应用

HLA I-表位肽四聚复合物检测系统(简称:四聚复合物检测系统)是以生物素-亲和素、人工制备的HLAI类分子、β2-M和特异性抗原表位多肽构建的四聚复合物,模拟靶细胞膜表面的HLAI类分子-表位复合物检测系统。它通过T细胞受体识别并结合相应表位的特异性CTL,以生物素-荧光标记的亲和素为标记物并利用流式细胞仪进行定量检测和分拣;它能在体外直接定性、定量检测T细胞群中的特异性CTL,因而对微生物感染、肿瘤、移植排斥等疾病的细胞免疫学研究将产生重大的影响。本文着重介绍了该技术在HBV/HCV感染研究中的应用进展。

可溶性HLA-A2-肽组装复合物的研制及初步鉴定

目的:诱导表达HLA-A2的两个亚基-重链(HC)和轻链β2m,并将其纯化产物和特异性肽段结合为HLA-A2-肽复合体。方法:将HC工程菌和β2m工程菌经0.5 mmol/L IPTG诱导5 h。经超声破菌及专利技术处理获得精制包涵体,再复性、 超滤浓缩后,用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析进行纯化。然后,将HC、β2m与两条特异性肽段分别结合,用Superdex 75凝胶过滤纯化,并用其天然结构的单克隆抗体(mAb)W6/32进行初步鉴定。结果:HC工程菌和β2m工程菌诱导表达的水平分别为43％和47％,HC和β2m纯化后的纯度均达到95％。两条特异性肽段与HC和β2m可组装成HLA-A2-肽复合体,纯化的HLA-A2-肽复合物在4℃可保存2个月左右,并可与mAb W6/32特异性结合。结论:HLA-A2的HC工程菌和轻链β2m工程菌均具有较高的表达水平,与相应的特异性肽段可形成稳定的可溶性HLA-A2-肽复合物,为进一步研究细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的识别和应答奠定了基础。

HLA衍生肽诱导移植免疫耐受的机制

HLA衍生肽能诱导移植免疫耐受 ,其机制目前尚不清楚。本文将就阻碍TCR和MHC结合 ,降低CTL和NK毒性反应 ,T细胞无能、排除 凋亡 ,抑制血红素氧化酶活性 ,阻断细胞周期 ,诱导Th免疫偏离 。

可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的构建与鉴定

为制备HLA-A*0201-PR1四聚体,本课题构建了可溶性的HLA-A*0201-PR1复合物。以原核表达的HLA-A*0201-BSP融合蛋白为重链,β2-微球蛋白(β2m)为轻链,与人工合成的HLA-A2限制性抗原肽PR1(蛋白酶3的第169-177氨基酸,VLQELNVTV)进行共折叠复性,以生成可溶性HLA-A*0201-PR1复合物。应用BirA酶对复性混和物进行生物素化,再经阴离子交换柱纯化,得到生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物。应用凝胶过滤高效液相色谱分析可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的生成率。利用HLA-A2构象特异性抗体(BB7.2)及链霉亲和素进行Western blot和ELISA分析,对生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物进行鉴定。结果表明:在折叠体系中,主要含有HLA-A*0201-BSP聚合体、HLA-A*0201-PR1复合物及β2m,其中可溶性复合物生成率约18%。获得的HLA-A*0201-PR1复合物可在BirA酶作用下被有效生物素化。结论:成功地获得了生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物,为进一步制备HLA-A*0201-PR1四聚体创立了基础。

新型HLA衍生肽对大鼠脾细胞免疫功能的抑制作用

目的 观察一种新型组织相容性白细胞抗原(HLA)衍生肽(RDP1258)的免疫抑制作用并探讨其机制。方法 人工合成一种HLA RDP1258,用3H胸腺嘧啶( 3H TdR)掺入法观察其在体外对大鼠脾细胞增殖反应的影响;以酶化学法观察其对脾细胞血红素氧合酶 1(HO 1)活性的影响。并与HLA衍生肽(HLA 2702.75 84)进行对比。结果 HLA RDP1258 抑制大鼠脾细胞增殖作用比HLA B2702.75 84 强,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05);HLA RDP1258 对淋巴细胞增殖具有显著的抑制作用,抑制率大约是 HLA B2702.75 84 的 8 倍以上;HLA RDP1258 具有较明显的体外HO 1抑制作用,是HLA B2702.75 84抑制作用的5倍以上,呈剂量依赖性。结论 HLA RDP1258能够显著抑制大鼠脾细胞经丝裂原或同种抗原刺激引起的增殖反应,这种作用可能与影响HO 1活性有关。

RDP1258对大鼠脾细胞增殖及HO-1活性的抑制作用

目的 :观察一种新型HLA衍生肽 (RDP12 5 8)的免疫抑制作用 ,并探讨其机制。方法 :用化学方法合成一种HLA衍生肽(RDP12 5 8) ,以3 H TdR掺入法观察其在体外对大鼠脾细胞增殖的影响 ;以酶化学法观察其对脾细胞血红素氧合酶 1(hemeoxygenase 1,HO 1)活性的影响。结果 :RDP12 5 8可显著抑制大鼠脾细胞增殖并以剂量依赖的方式降低HO 1的活性。结论 :RDP12 5 8能够显著抑制丝裂原或同种抗原刺激所致大鼠脾细胞的增殖反应 ,其抑制作用可能是通过降低HO

RDP1258对人外周血单核细胞增殖能力及HO-1活性的影响

目的 观察一种新型HLA衍生肽 (RDP12 5 8)针对人外周血单核细胞由丝裂原以及同种异体抗原刺激导致的增殖能力的影响 ,并探讨其机制。方法 人工固相合成RDP12 5 8,3 H TdR掺入法观察其在体外对人外周单核细胞增殖反应的影响 ,以酶化学法观察其对淋巴细胞血红素氧合酶 1(hemeoxygenase 1,HO 1)活性的影响。结果 RDP12 5 8可显著抑制人外周血单核细胞的转化及MLR增殖反应 ;该肽体外降低HO 1活性呈现出剂量依赖性。结论 RDP12 5 8能够显著抑制人外周单核细胞经丝裂原或同种抗原刺激引起的增殖反应 ,这种作用可能是通过影响HO 1活性而达到的。

HLA衍生肽RDP1258延长大鼠移植心脏存活时间

目的 观察HLA衍生肽RDP1258对大鼠同种移植心脏存活时间的影响。方法人工合成HLA衍生肽RDP1258;建立大鼠心脏腹部移植模型,随机分为4组。(1)对照组:心脏移植前后不用任何药物;(2)环孢素A(CsA)组:心脏移植前后给予CsA灌胃;(3)RDP1258组:心脏移植前后给予PDP1258腹腔注射;(4)RDP1258+CsA组:心脏移植前后联合给予RDP1258和CsA。分别观察人工合成的RDP1258纯度、移植心存活时间及移植心组织的光镜及电镜检查情况。结果RDP1258纯度达95%以上,分子量与理论值相符。大鼠移植心脏存活时间:对照组为(8.00±2.90) d,CsA组为(13.38±3.62)d,RDP1258组为(33.29±10.09)d,RDP1258+CsA组为(85.38±18.34) d。RDP1258组和RDP1258+CsA组与对照组比较,移植心脏存活时间显著延长。RDP1258组和RDP1258+csA组移植心病理改变较轻,超微结构无明显改变。结论RDP1258能抑制急性排斥反应,围手术期给予RDP1258和CsA,能够明显延长大鼠移植心脏存活时间。

合成HLA衍生肽延长同种移植心肌存活时间的实验研究

目的 探讨人工合成HLA衍生肽 HLA B 2 70 2 .75 84(P)对同种移植心肌存活时间的影响。方法 采用小鼠耳后心肌移植模型 ,受者鼠随机分为 5组 ,每组 8只。对照 1组 :不给药 ;对照 2组 :仅给予环孢素A(CsA) ;对照 3组 :给予无关对照肽 (cP) ;对照 4组 :仅给予P ;实验组 :给予P和CsA。在手术显微镜下观察移植心肌跳动作为移植心肌存活和排斥反应的指标。结果 对照 1组移植心肌的平均存活时间 (MST)为 ( 7.5± 0 .5 )d ;对照 2组为 ( 8.5± 1.5 )d ;对照 3组和对照 4组均为 ( 7.0± 1.0 )d ;实验组为 ( 2 6 .5± 3.5 )d。实验组与各对照组比较 ,差异有极显著性 (P <0 .0 1)。结论 用合成HLA B 2 70 2 .75 84衍生肽结合应用亚治疗剂量的CsA ,能显著延长小鼠同种移植心肌的存活时间。

RDP1258免疫调节功能在大鼠体内实验研究

目的观察一种新型HLA衍生肽(RDP1258)的体内免疫抑制功能并探讨其机制。方法人工固相合成HLA衍生肽(RDP1258),以3H-TdR法观察其在体内对大鼠脾细胞增殖反应的影响;与HO-1酶活性激动剂HEM IN及拮抗剂ZNPP相对比,采用酶化学法及免疫组化方法观察其对体内脾细胞血红素氧合酶-1(hem e oxygenase-1,HO-1)活性的影响。结果RDP1258体内应用可显著抑制淋巴细胞转化及MLR的增殖反应;该肽能够明显提高体内HO-1活性,并增强HO-1的表达。结论RDP1258体内应用能够显著抑制大鼠脾细胞由丝裂原或同种抗原引起的增殖反应,这种作用可能是通过影响HO-1活性而达到的。