致敏肾移植受者HLA抗体表位分析的研究进展

准确鉴定HLA抗体的特异性，阐明HLA抗体作用的表位（氨基酸残基），对于指导致敏受者的HLA配型、减少排斥反应、改善移植肾的存活率都有重要价值。本文综述了有关致敏肾移植受者HLA抗体表位分析的研究进展。

HLA-表位肽四聚复合物检测系统在研究HBV/HCV抗原特异性CTL中的应用

HLA I-表位肽四聚复合物检测系统(简称:四聚复合物检测系统)是以生物素-亲和素、人工制备的HLAI类分子、β2-M和特异性抗原表位多肽构建的四聚复合物,模拟靶细胞膜表面的HLAI类分子-表位复合物检测系统。它通过T细胞受体识别并结合相应表位的特异性CTL,以生物素-荧光标记的亲和素为标记物并利用流式细胞仪进行定量检测和分拣;它能在体外直接定性、定量检测T细胞群中的特异性CTL,因而对微生物感染、肿瘤、移植排斥等疾病的细胞免疫学研究将产生重大的影响。本文着重介绍了该技术在HBV/HCV感染研究中的应用进展。

因HLA和CD36复合抗体致血小板输注无效患者的配型策略

目的为HLA和CD36复合抗体所致血小板输注无效(PTR)患者寻求相合或相容的供者血小板输注。方法采用ELISA方法检测PTR患者的血小板抗体及HLA⁃Ⅰ类抗体特异性;运用MATCH IT!和HLA Matchmaker软件,分析患者HLA⁃Ⅰ类抗体特异性及相应抗原决定簇(epitopes);采用HLA⁃SSO分型技术,获得供、患者的HLA基因型;根据HLA⁃I类抗原交叉反应组(CREG)或HLA表位配型(Eplet)策略,寻找与PTR患者相合或相容的供者血小板;通过血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(MAIPA)和血小板免疫荧光流式检测(PIFT)鉴定匹配程度;最后,通过血小板计数纠正增加指数(CCI)评估血小板输注效果。结果2名PTR患者体内检测到针对HLA⁃Ⅰ类和CD36的复合抗体,且CD36流式表型为Ⅰ型缺失;抗体特异性检测结果显示,患者1和患者2的血清中存在高频的HLA⁃Ⅰ类抗体,PRA分别为56%(54/96)和53%(51/96);运用HLA的CREG和Eplet配型策略,在CD36缺失供者库分别筛选到与患者1匹配等级C的供者1名,与患者2匹配等级D的供者1名,且选择的供者均规避患者HLA⁃Ⅰ类抗体表位所针对的抗原;MAIPA和PIFT结果亦证实患者与供者血小板无免疫反应,且患者2输注相容血小板24 h CCI>4.5。结论针对HLA和CD36复合抗体所致PTR患者,可联合运用血清学交叉配型、HLA⁃CREG及Eplet配型策略,选择CD36缺失,规避HLA⁃Ⅰ类抗体对应抗原且HLA表位匹配的供者血小板。

妊娠合并再生障碍性贫血患者存在抗-HLA引起血小板输注无效的诊疗

目的为存在抗-HLA的妊娠合并再生障碍性贫血(简称再障)而血小板输注无效患者,从血小板供者库中寻找相匹配的血小板输注并追踪输注效果,确保患者顺利生产以及后续的治疗。方法对1名再障孕妇用ELISA方法检测血小板抗体、用Luminex方法检测抗-HLA特异性;提取患者及血小板供者(库)523名DNA做高分辨HLA基因分型检测;利用自行设计的"血小板输注无效风险评估"软件在血小板供者库中查找出与患者ABO血型相、HLA基因型与患者相容且不含患者特异性HLA Eplets(表位)及其抗体的供者,招募其来做单克隆抗体固相血小板抗体试验(MASPAT)配型后捐献1 U血小板输注给患者,并追踪输注24 h效果。结果血小板抗体检测:患者仅含抗-HLAⅠ类抗体;抗体特异性鉴定:针对Eplets为65QIA,相应的抗-HLA为HLA-B^(*)27∶08、B^(*)27∶05、B^(*)07∶02、B^(*)55∶01、B^(*)67∶01、B^(*)54∶01;抗-HLA-Ⅱ类阴性。高分辨HLA基因分型:患者与供者HLA基因型均为HLA-A^(*)02∶07、A^(*)11∶01,B^(*)46∶01、B^(*)46∶01,C^(*)01∶02、01∶03,DRB1^(*)04∶05、DRB1^(*)0901,DQB1^(*)03∶03、DQB1^(*)04∶01;MASPAT配型:阴性。患者输注该供者的配型血小板1 U后24 h血小板计数(Plt)(×10^(9)/L)由输注前1上升至33。4周后患者剖宫产1男婴,术后血小板低下,有出血倾向,再次招募该献血者,输注1 U血小板后24 h Plt(×10^(9)/L)由输注前5上升至37。追踪产后2 d母婴生命体征均正常。结论妊娠合并再障患者抗-HLA导致的血小板输注无效,可通过建立血小板供者库,及时筛选输注HLA基因型相容且不含患者特异性HLA表位供者的血小板,而得到有效治疗。

树突状细胞吞噬PLA-AFP_(218-226)微球后诱导细胞毒性T淋巴细胞反应

目的研究树突状细胞(DC)吞噬包被有甲胎蛋白HLA-A2限制性表位肽(AFP218-226,LLNQHACAV)的聚乳酸微球(PLA-AFP218-226)后诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞株HepG2和负载有AFP218-226的T2细胞株的毒性作用。方法用GM-CSF和IL-4诱导HLA-A2+的健康志愿者外周血单核细胞,LPS诱导成熟,使其分化为高纯度DC,在诱导过程中加入PLA-AFP218-226微球,用吞噬了PLA-AFP218-226微球的DC诱导自身T淋巴细胞,使其成为肝细胞癌(HCC)特异性CTL。用流氏细胞仪检测DC膜分子标志,T2细胞与AFP218-226结合实验检测HLA-A2分子与AFP218-226之间的亲合力,MTT法检测特异性CTL杀伤HepG2和T2细胞株的能力。结果AFP218-226与HLA-A2分子具有较高的亲合力,吞噬微球后的成熟DC高表达CD83、CD86、CD40等膜分子,其诱导的特异性CTL对HepG2和负载有AFP218-226的T2细胞株具有强的细胞毒作用。结论PLA-AFP218-226被DC细胞吞噬后,能够诱导HCC特异性CTL的产生,可能成为一种新型的抗肿瘤表位肽疫苗,在肝癌的防治中得到应用。

人类白细胞抗原抗体频率及PIRCHE评分与DSA产生及AMR发生的关系

目的分析肾移植供受者人类白细胞抗原(HLA)分布频率与受者HLA抗体分布频率,揭示预测间接可识别的HLA表位(PIRCHE)评分与供者特异性抗体(DSA)的产生和抗体介导排斥反应(AMR)发生的关系。方法选取西安交通大学第一附属医院肾移植科2013年11月至2017年6月798例肾移植病例。采用HLA高分辨分型LABType^TM SSO法,HLAⅠ、Ⅱ类抗体检测采用LABcreen Single Antigen试剂,Luminex 200技术进行检测。PIRCHE评分系统进行PIRCHE评分。结果798例受者,409例供者的HLA高分辨分型资料结果显示,常见供受体HLA A位点以A2、A11、A24最为常见;B位点以B13、B46、B51、B60、B35、B62、B61最为常见;DR位点以DR9、DR4、DR15、DR12、DR7、DR11最为常见;DQ位点以DQ7、DQ6、DQ5、DQ9、DQ2最为常见。术后HLAⅠ类抗体阳性105例,HLAⅡ抗体阳性40例,DSA阳性32例。HLAⅠ类抗体最常见为A24,B7抗体;HLA Ⅱ类抗体最常见为DQ抗体,包括DQ2,DQ9,DQ4,DQ6,DQ7,DQ8。活体移植供受者PIRCHE评分低于DCD供肾组(P<0.01),差异有统计学意义;DSA+组及DSA+AMR+组PIRCHE评分分别高于DSA-组及DSA+AMR-组(P<0.01),差异有统计学意义;ROC曲线对PIRCHE评分预测DSA产生及AMR发生进行了分析发现,DSA产生的AUC为0.80,临界值为115.5;AMR发生的AUC为0.89,临界值为133.5。结论常见的HLA抗原,免疫原性强,容易刺激机体产生HLA抗体;肾脏移植前应重视常见抗原位点的匹配以及HLAⅡ抗原的匹配。PIRCHE评分用于HLA配型,可有效预测DSA的产生和AMR的发生,具有比传统方法更灵敏,包含信息量更大的优势。