PCR-SBT技术在山东骨髓分库HLA高分辨分型工作中的初步应用

目的将基于测序分型(SBT)技术应用于中华骨髓库山东分库建设的探讨。方法使用ABI 3730 xlDNA测序仪,采用SBT直接测序法,对山东地区的3 500份志愿者血液标本进行DNA测序,其中HLAⅠ类基因对第2、3和4外显子双向测序,Ⅱ类基因对第2外显子双向测序,以得到其HLA高分辨分型结果;对部分呈现中分辨分型结果的标本,通过SSSP技术确认。结果 HLA-A、B、DRB1位点分别有48.23%、42.86%和76.91%得到高分辨结果。此3个位点均获得高分结果的比例为15.91%。在随机增选的760例中分辨标本中,659例(86.71%)经SSSP技术后,获得高分辨结果。结论 SBT技术是骨髓分库开展HLA高分辨分型工作的有力工具。

供、患者HLA-A、B、DRB1高分辨分型的无关供者外周血造血干细胞移植32例回顾分析

目的探讨供、患者的人类白细胞抗原HLA-A、B、DRB1基因高分辨相合及亚型相合,无关供者外周血造血干细胞移植后效果的情况,为临床造血干细胞移植治疗选择适配供者提供理论依据。方法采用PCR-SSP或SBT技术对供、患者HLA-A、B、DRB1的基因进行高分辨分型,定期随访患者在造血干细胞移植后状况,统计分析移植后效果。结果32例患者与供者的HLA低分辨分型结果完全相合,HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型全相合的患者与HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型不相合的患者,造血干细胞植活和两年半内的移植存活率比较,无统计学差异。结论HLA低分辨分型结果完全相合是临床医生选择造血干细胞移植的重要条件之一,供、患者HLA-A、B、DRB1高分辨分型是外周血造血干细胞移植治疗前组织配型不可少的实验之一,但HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型错配对无关供者外周血造血干细胞移植的造血干细胞植活和两年半内的移植存活率影响较小,HLA基因高分辨分型可以帮助临床医生选择合适的供者。

利用唾液标本进行HLA分型的可行性分析

目的探讨利用唾液样本提取DNA进行HLA高分辨分型的可行性。方法采集6例造血干细胞移植患者和10例供者唾液样本各2 m L,EDTA抗凝静脉全血3 m L。采用Qiagen全血基因组提取试剂盒和Oragene唾液DNA提取试剂盒分别于全血和唾液样本中提取DNA,琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。采用PCR-SSOP和PCRSBT方法对血液提取DNA和唾液提取DNA进行HLA高分辨分型,并对分型结果进行比较。结果唾液提取DNA浓度69.75±44.96,A260/A280比值为1.77±0.07;血液提取DNA浓度63.06±33.99,A260/A280比值为1.75±0.04。唾液来源DNA PCR-SSOP结果明确,DNA PCR-SBT高分辨分型中无杂峰和碱基错配。16例样本唾液来源DNA的HLA高分辨分型结果和血液来源DNA的结果完全一致,符合率为100%。结论唾液提取的DNA可用于HLA高分辨分型。