γ-干扰素基因的导入及删除对人肿瘤细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原表达的影响

目的：制备有效的细胞因子基因修饰的肿瘤细胞作为“瘤苗”。方法：用缺陷型逆转录病毒作为载体将人γ－干扰素（ＩＦ－γ）含信号肽ｃＤＮＡ转导入人胃癌细胞株ＭＫＮ、４５，经Ｇ４１８筛选后得－ＩＦＮ－γ基因修饰株ＭＫＮ－４５－ＩＦＮ。ＰＣＲ方法测得有标记基因ＮｅｏＲ及ＩＦＮ－γ基因的存在，但经３个月连续传代培养后，ＰＣＲ仅能检测到ＮｅｏＲ基因，而未检出ＩＦＮ－γ基因、ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类单抗间接免疫荧光法流式细胞仪测定了上述相应时期ＩＦＮ－γ基因修饰肿瘤细胞ＨＬＡ－Ｉ、Ⅱ类抗原的表达。结果：随着ＩＦＮ－γ基因在染色体中被删除，ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类的表达又恢复至与ＭＫＮ－４５相同的水平。结论：为确保ＩＦＮ－γ基因的作用，应不断检测其基因的存在。

人肝癌细胞的HLA-Ⅰ类抗原表达

为了为肝癌细胞毒性 T细胞疫苗设计、构建及免疫治疗策略的决策提供体外实验研究依据 ,采用免疫细胞化学 L SAB法及流式细胞术观察了体外培养人肝癌细胞的 HL A- 类抗原表达情况。结果显示 ,人肝癌细胞株 Alexander、Hep G2、SMMC- 772 1、QGY- 770 3都有较强的 HL A- 类抗原表达 ,这使细胞毒性 T细胞杀伤肝癌细胞成为可能。

酸洗脱血小板表面HLA-Ⅰ类抗原对血小板活化和凋亡的影响

目的探讨酸洗脱血小板表面HLA-Ⅰ类抗原对血小板活化和凋亡的影响。方法将10(人)份健康人机采血小板(0.5 ml/份)用pH3柠檬酸缓冲液处理(同时以PBS处理作对照组)后,利用多色流式细胞技术检测血小板表面HLA-Ⅰ类抗原及P-选择素(CD62p)的表达,Annexin V染色检测血小板的早期凋亡率。结果 pH3柠檬酸缓冲液及PBS处理后的血小板表面HLA-Ⅰ类抗原的表达为(23.83±9.93)%vs.(98.15±2.20)%(P<0.05),CD62p的表达为(45.94±10.13)%vs(20.29±4.24)%(P<0.05),血小板的早期凋亡率为(65.29±15.74)%vs(14.65±5.09)%(P<0.05)。结论 pH3柠檬酸缓冲液处理血小板可有效去除血小板表面HLA-Ⅰ类抗原,并同时诱导血小板的活化和凋亡。

96例血小板基因配型患者的HLA-Ⅰ类抗体特性分析及抗原免疫原性估算

目的 分析血小板基因配型患者的HLA-Ⅰ抗体特异性,并估算HLA抗原免疫原性。方法 标本来自医院送检本中心申请血小板基因配型的血小板输注无效(PTR)患者,共计96份。采用Luminex技术对患者标本进行HLA-Ⅰ抗体特异性检测,并根据MFI分析抗体表达水平。人群HLA抗原错配率、相对免疫原性根据HLA-A、-B位点等位基因频率分布和抗体检出频次分别进行估算。结果 96份患者标本均检出HLA-Ⅰ类抗体,但抗体种类分布较广。HLA-A、-B、-C磁珠包被抗原(共计97个)对应抗体的平均阳性检出率分别为0.38、0.47、0.28。在浙江人群中HLA-A和-B系统中,抗原频率较高的分别为HLA-A2、A11、A24和HLA-B60、B46、B58,其相对免疫原性分别为0.403、0.283、0.342和0.100、0.067、0.178。结论 PTR患者存在不同种类特性的HLA-Ⅰ抗体,证实不同HLA-A、-B抗原的相对免疫原性存在差异。

心脏移植中HLA-Ⅱ类抗原基因配型的实验研究

建立人类白细胞抗原 (HLA) Ⅱ型抗原 4个基因位点DRB1、DQA1、DQB1、DPB1的聚合酶链式反应 -单 -链构象多态分析 (PCR -SSCP)配型方法。实验分三部分 :1 通过预实验确定使用PCR -SSCP检测HLA -DRB1、DA1、DQB1、DPB14个位点的实验条件 ;2 使用以上方法对 1例拟行心脏移植的患者在 12 7例健康人群中进行基因位点的检测配型 ;3 对配型一致及不一致的供体和受体 ,进行体外混合淋巴细胞培养(MLC) ,以检验这种基因配型方法的可靠性。通过PCR -SSCP的检测配型 ,在 12 7例供体中 ,2例DRB1位点、2例DQA1位点、3例DQB1位点、2例DPB1位点与受体相一致。体外MLC证实与受体不一致的供、受体MLC中 ,受体淋巴细胞呈高度增殖反应 ;而与受体某一位点一致的供体 ,其MLC中受体淋巴细胞增殖反应明显降低 (P <0 0 1)。PCR -SSCP是一种快速、准确的HLA

HLA-Ⅱ类抗原与妇科恶性肿瘤的研究进展

HLA-Ⅱ类抗原主要表达于专职抗原递呈细胞表面,其生物学作用是将外源性抗原肽递呈给CD4+T细胞从而参与机体的免疫应答过程。HLA-Ⅱ类抗原的等位基因具有多态性从而导致其分子的抗原决定簇不同,可能与肿瘤的遗传易感性相关。HLA-II类抗原在恶性肿瘤组织中的异常表达,与肿瘤细胞逃避免疫监视形成肿瘤转移浸润相关。本文就HLA-Ⅱ抗原在妇科恶性肿瘤方面的研究作一综述。

原发性肝细胞癌的HLA-Ⅰ类抗原表达

目的 确定体内原发性肝细胞癌细胞的 HL A - 类抗原表达情况。方法 采用免疫组织化学L SAB法对 6例原发性肝细胞癌冰冻组织进行研究。结果 6例标本的肝癌细胞都有较强的 HL A- 类抗原表达。结论 从 HL A- 类抗原表达角度看 ,研制肝癌

牙髓中HLA-Ⅱ类抗原的免疫电镜研究

采用免疫电镜技术对正常牙髓中HLA-Ⅱ类抗原分子的分布和阳性细胞的超微结构进行了研究。结果表明:HLA-Ⅱ类抗原主要表达在细胞膜和胞浆内的内含体上,尤其是粗大的胞浆突上密度较高。说明对外源性抗原的处理和提呈的主要功能部位是阳性细胞的细胞突起。另外,内皮细胞也呈阳性反应,它可能与防御血源性感染有关。

慢性乙型病毒性肝炎、肝癌组织HLA-Ⅰ类抗原的表达及意义

目的:探讨慢性乙型肝炎、肝癌组织中人类白细胞抗原I(HLA-I)的表达和临床意义。方法:应用流式细胞仪对51例慢性乙型肝炎患者肝组织和43例原发性肝癌癌组织中的HLA-I抗原进行检测。结果:肝癌组织中HLA-I抗原表达为36.47±19.38,明显低于慢性乙肝的79.54±41.55和正常肝组织的81.86±46.53(P均<0.01),而慢性乙型肝炎肝组织和正常肝组织HLA-I类抗原表达无明显差异(P>0.05),伴有肝内和(或)淋巴结转移的肝癌组织中HLA-I抗原表达较无转移组明显降低(22.83±11.59 vs 46.28±23.16,P<0.05);HLA-I类抗原表达与血清AFP水平呈明显负相关(r=-0.741 1,P<0.01),但与肝癌组织分化程度呈明显正相关(r=0.805 1,P<0.05)。结论:HLA-I抗原表达异常与肝癌的发生和转移密切相关。

炎症和正常牙髓中HLA-Ⅱ类抗原表达细胞的免疫组织化学研究

HLA-Ⅱ类抗原是提呈外来抗原的物质基础,并参与免疫调节。本研究结果表明:炎症牙髓较正常牙髓中的Ⅱ类抗原表达细胞显著增多,阳性细胞形态多样,乳牙与悟牙中的阳性细胞形态有所不同,炎症牙髓中内皮细胞也部分地表达了Ⅱ类抗原。

抗HLA－Ⅰ、Ⅱ类抗原的抗体血清的筛选与特异性鉴定

抗ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类抗原的抗体血清的筛选与特异性鉴定内蒙古自治区医院（０１００１７）冯笑梅，李克延，鲁辛辛，韩晓芳北京友谊医院李哲先，尔秀江，贾保祥自１９５８年Ｄａｕｓｓｅｔ利用接受输血病人血清鉴定第一个白细胞抗原Ｍａｃ（ＨＬＡ－Ａ２）以来，ＨＬＡ已迅...

HLA-Ⅱ类抗原的表达调控及其在肿瘤组织中的表达

HLA Ⅱ类抗原在免疫应答和免疫调节中具有重要作用 ,其表达调节主要发生在转录水平上。在它的启动子区内存在W盒、Y盒、X盒等顺式作用元件 ,调节HLA Ⅱ类抗原的表达。HLA Ⅱ类抗原启动子区具有的高度多态性 ,也可通过多种途径影响HLA Ⅱ基因的表达。肿瘤细胞可异常表达HLA Ⅱ类抗原 ,干扰素、启动子多态性、CⅡTA。

HLA-Ⅰ类抗原在喉癌中的表达及意义

目的:研究HLA-Ⅰ类抗原在喉癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化方法检测HLA-I类抗原在40例喉癌组织及癌旁正常组织中的表达。结果:HLA-Ⅰ类抗原在喉癌组织中表达下调比例60%,缺失比例17.5%。有转移淋巴结组与无转移淋巴结组之间差异存在统计学意义。结论:HLA-Ⅰ类抗原在喉癌组织中表达下调或缺失,可能与淋巴结转移相关。

人群HBV易感性与HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因相关性研究

[目的]探讨人类白细胞抗原Ⅰ、Ⅱ类基因与乙型肝炎病毒（HBV）感染的相关性。[方法]2003～2004年，采用PCR-SSP方法对青岛市178例HBV感染者（实验组）和1383名无血缘关系的自愿骨髓捐献者（对照组）分别进行HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因分型检测。[结果]HLA-DR9、DR12的分布频率在实验组为30．9％（55／178）和28．0％（50／178），在对照组为20．7％（286／1383）和19．5％（270／1383）（P〈0．01）。[结论]HLA—DR9、DR12有助于HBV对宿主的感染，可能是HBV的易感基因。

CⅡTA反义基因体外转染对HLA-Ⅱ类抗原表达的抑制作用的研究

目的:针对同种异体细胞移植的免疫反应主要由HLA-Ⅱ类抗原介导,而CⅡTA基因对HLA-Ⅱ分子的表达起严格且专一性的调控作用,拟通过CⅡTA的反义cDNA抑制细胞表面HLAⅡ分子的表达。方法:以RT-PCR从HLAⅡ抗原组成型表达的Raji细胞株克隆CⅡTA反义片段(arⅡ),插入腺相关病毒载体psNAV中(pAarⅡ)。将该质粒通过脂质体稳定转染Heda细胞(pAar Ⅱ H),检测其表面HLAⅡ分子表达,并以RT-PCR检测其CⅡTA、HLA-Ⅱ(DR、DP及DQ)及Ii分子的mRNA水平。结果:pAarⅡH在重组人IFN-γ诱导下,DR、DP及DQ抗原表达分别降低了79±12%、90±15%及40±8%;同时HLA-Ⅱ及Ii分子的mRNA被明显抑制。结论:提示CⅡTA反义基因片段抑制了自身组成型及诱导型表达量,并相应阻止了CⅡTA所调控的基因(HLA-Ⅱ及Ii)的表达,从而为进一步探讨免疫耐受形成及其在组织工程中的应用奠定了基础。

下调人类细胞HLA-Ⅰ类抗原表达的初步试探

HLA抗原是组织器官异体移植排斥反应的主要决定簇,它由位于第6对染色体短臂上一组基因群所编码,其特点是具有高度多态性,其中HLA-Ⅰ类,是引起同种异体移植排斥的主要抗原。若能减弱或消除移植物中的此类抗原,可减轻宿主对异体移植细胞的攻击,从而有可能使移植物存活期延长。我们选用基因工程中几种有效手段,从不同方面改变细胞的遗传特性,以期下凋HLA-Ⅰ类抗原的表达。

可溶性HLA-Ⅰ类抗原的含量在干扰素治疗慢性乙型肝炎中的变化及意义

测定可溶性HLA -I类抗原的含量在干扰素-α治疗慢性乙型肝炎中的变化,并分析其意义。血清可溶性HLA -I类抗原的含量用夹心ELISA方法测定。治疗第8周,完全反应组患者可溶性HLA -I类抗原的含量显著高于治疗前的水平;治疗第16周和第2 4周,可溶性HLA -I类抗原的含量均显著低于治疗前。部分反应组和无反应组在治疗过程中可溶性HLA -I类抗原的含量与治疗前相比无显著变化。可溶性HLA -I类抗原含量的变化反映了慢性乙型肝炎治疗中患者免疫功能受到调节。

可溶性HLA-Ⅰ类抗原及其临床意义的研究进展

ＨＬＡ是一类复杂的人类遗传多肽性系统，其研究工作在医学实践中有十分重要的意义。其中，ＨＬＡ－Ⅰ类抗原在移植排斥反应中起着重要作用，是组织排斥应答的主要抗原，同时对细胞毒Ｔ细胞起约束作用，ＨＬＡ－Ⅰ类抗原除了以膜抗原形式存在于细胞膜表面外，目前也已从人类的血清和淋巴液，尿液及乳汁中检出，称为可溶性ＨＬＡ抗原（ＳｏｌｕｄｌｅＨＬＡＡｎｔｉｇｅｎｓ，ｓＨＬＡ）。本文综述了ｓＨＬＡ－Ⅰ分子的分泌、结构、检测、在免疫调节及在自身免疫病、器官移植、感染等生理、病理状况下的意义。

HLA-I类抗原的组织配型基因芯片的建立及应用

目的:应用基因芯片技术进行北方汉族人群HLA-I类抗原中分辨度分型研究,建立稳定的HLA检测芯片。方法:采用寡核苷酸芯片分型方法,依据第十三届国际组织相容性工作会议报告及相关文献,同时考虑遗传的连锁不平衡,及强脊炎、幼年型糖尿病等与HLA密切相关的遗传病等因素,选择了中国人群基因频率较高的等位基因,根据HLA-I类不同基因亚型的独特序列,完成了探针的设计与筛选,最后设计了122条探针(HLA-A56条,HLA-B66条)制成基因分型芯片。采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLA-I类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交。杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断阳性探针,以此确定样品基因型。结果:所有样本的HLA-I类抗原基因分型均获成功。此中分辨度探针可分出598个I类抗原等位基因,可检出I类抗原特异性57个。结论:基因芯片用于HLA-I类抗原分型可行。其分辨率高,特异性强,可用于HLA基因分型、骨髓移植、器官移植的HLA配型、与HLA有密切关系的遗传性疾病的人群筛查。

大肠癌组织HLA-I类抗原及相关分子的表达意义

目的:探讨大肠癌组织HLA-Ⅰ类分子及相关分子表达及其意义. 方法:用免疫组化的方法,以切端黏膜作为正常对照,检测大肠癌组织、癌旁组织和正常黏膜组织中HLA-Ⅰ类分子及相关分子的表达,并结合肿瘤的临床病理资料综合分析. 结果:受检的大肠癌组织中重链HLA-A位点、B/C位点及轻链beta2微球蛋白(β2M)较其相应正常黏膜表达明显下调(P=0.0001);肠癌中低分子量多肽(LMP2)(P=0.0001),钙联蛋白(calnexin)(P=0.004)较正常黏膜表达明显下调;肠癌中HLA-Ⅰ类分子表达与肿瘤分化无关;随着肿瘤的Dukes 分期,癌组织中HLA-Ⅰ类分子表达渐次降低,但各位点表达情况并不相同,HLA-B/C表达水平与肿瘤分期相关,其在Dukes A期表达水平高于D期(P=0.0262). 结论:肠癌组织及癌旁黏膜中HLA-Ⅰ类分子、低分子量多肽及钙联蛋白较正常黏膜表达明显下调;肠癌组织中HLA- B/C位点随着肿瘤Dukes分期演进其表达下调.