儿童恶性肿瘤患者接受体外扩增HLA-半相合供者免疫细胞输注的不良反应分析

目的探讨儿童恶性肿瘤患者接受体外扩增人类白细胞抗原（HLA）-半相合供者免疫细胞输注（HDICIs）的不良反应，为如何护理此类患儿提供依据。方法2011年9月至2012年9月收治的12例儿童恶性肿瘤患者共接受92例次HDICIs，观察并记录每位患儿在HDICIs过程中、结束2h及24h内的不良反应，并为患儿提供心理护理，输注前护理，输注过程不良反应分析及护理，输注后出院宣教及随访。结果在92次HDICIs过程中，共出现20例次发热反应，其中有6例次伴畏寒、寒战，1例次伴高热惊厥，对症处理后缓解；共出现5例次轻微情绪改变；其余各例次HDICIs过程中及结束后生命体征均平稳，无恶心、呕吐、腹痛、腹泻、皮疹、水肿、过敏反应等异常反应的发生。每程HDICIs前后，所有患儿的血象及生化指标均未见明显异常。结论儿童恶性肿瘤患者接受HDICIs行免疫治疗是安全的；在整个治疗过程中重视心理护理，输注前的抗过敏治疗，重视体温监测、及时发现高热惊厥的前兆，重视不良反应的对症处理，重视随访和出院宣教对于儿童恶性肿瘤患者接受HDICIs行免疫治疗的顺利进行具有重要意义。

供、受体T细胞比例对HLA-半相合异基因造血干细胞移植移植物抗宿主反应的影响

目的研究移植物和受体的T细胞比例与移植物抗宿主反应(GVHD)的关系。方法①实验研究40对小鼠(受体SD小鼠和供体Wistar小鼠)按移植物和受体的T细胞1∶1、2∶1和4∶1比例和对照组分为4组进行移植,并观察移植后GVHD的发生和程度。②临床研究中5例9～18岁患者进行HLA-半相合异体外周血造血干细胞移植,其中4例进行CD34+细胞分选,并计算移植物和受体循环血中T细胞绝对值,按2∶1比例输入;另1例进行常规异体外周血造血干细胞移植。结果实验发现4组小鼠,1∶1和2∶1组的GVHD最轻,与对照组比较差异有统计学意义,而4∶1组的GVHD与对照组比较差异无统计学意义。临床中1例常规方法移植者出现超急性重度GVHD,死于并发间质性肺炎;其余4例仅出现轻度急性GVHD,1例在+155d时死于多发性神经根炎,3例病人移植成功,且均无病生存3年以上。结论移植物内T细胞与受体循环血内的T细胞绝对值之比介于1∶1和2∶1之间较为合适;临床按此比例进行移植,尤其对于HLA部分不相合或半相合的单倍体移植,可获得更好的抗肿瘤效果和较轻的GVHD。

确定半相合供者淋巴细胞输注治疗高危非霍奇金氏淋巴瘤最佳时间和浓度的实验研究

目的:寻找半相合供者淋巴细胞输注(DLI)抗高危非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)的DLI最佳时间和最佳浓度,为临床应用提供实验依据。方法:通过测定不同时间,加入不同浓度的半相合供者淋巴细胞(DLs)后淋巴瘤细胞的凋亡率,确定淋巴瘤细胞培养过程中加入半相合DLs的最佳时间及最佳浓度。结果:淋巴瘤细胞培养过程中加入半相合DLs的最佳时间为培养后24小时,最佳浓度为2.5×105/ml。结论:临床实践中,在高危NHL患者化疗结束24小时后给予患者浓度2.5×105/ml的半相合DLI治疗,可能达到半相合DLI最大的移植物抗淋巴瘤效应。

人类白细胞抗原半相合亲缘性骨髓移植联合中药治疗白血病的临床观察

目的探索半相合未去除T细胞骨髓移植联合中药治疗白血病的可行性.方法4例慢性粒细胞白血病和4例急性髓性白血病患者接受人类白细胞抗原（HLA）1-3个位点不相合骨髓移植,用阿糖胞苷、环磷酰胺和全身照射或马利兰进行预处理.供者每天应用粒细胞集落刺激因子（G-CSF）250μg,连用7天后采髓.移植物抗宿主病（GVHD）预防除用环孢霉素A（CSA）和甲氨喋呤（MTX）外,在移植前4天至前1天每天用抗胸腺细胞球蛋白（ATG）2.5mg/kg,移植后第7天开始每天加用骁悉（霉酚酸酯）1.0g,骨髓输入后采用益气养阴、健脾和胃等中药治疗.结果患者移植后均获得造血重建,中性粒细胞＞0.5×10^9/L和血小板＞20×10^9/L的中位时间分别是12天（10～14天）和20天（18～25天）.8例中7例有程度不一的皮肤GVHD,其中1例为Ⅳ度皮肤GVHD,2例并发Ⅳ度急性肠道GVHD,1例在81天合并感染死亡,1例在46天自动出院,2例出现出血性膀胱炎;中位随访时间18个月（2～32个月）,无病存活6例.结论供者应用G-CSF后采髓,多种免疫抑制剂联合中药治疗HLA不全相合未去除T细胞骨髓移植,在治疗白血病过程中,有效的降低了急性重症GVHD发生,提高了无病生存率.

HLA半相合外周血活化干细胞治疗晚期实体瘤的疗效

目的:观察HLA半相合外周血活化干细胞(HLA haploidentical peripheral blood stem cells,haplo-PBSCs)对晚期难治性实体瘤患者的临床抗肿瘤疗效以及不良反应。方法:入组42例全部为2004年10月至2007年10月天津医科大学肿瘤医院生物治疗科收治的晚期难治性恶性肿瘤患者(所有入组患者均知情同意,试验工作经医院伦理委员会批准),其中卵巢癌12例,肾癌9例,肺癌8例,乳腺癌8例,结肠癌2例,胃癌2例,恶性黑素瘤1例。供者为患者健康直系亲属,进行haplo-PB-SCs的动员、采集和体外rhIL-2活化。经HLA半相合外周血干细胞治疗后,分别通过CT/PET-CT检查、RESIST标准、KPS评分、临床症状缓解率等指标来评估HLA半相合外周血干细胞的临床疗效及不良反应情况。结果:42例患者接受1个疗程治疗后,全体患者中位无进展生存期(PFS)为6个月,临床获益率(CR+PR+SD)为73.8%;患者生活质量总获益率为76.2%,生活质量评分(KPS)较治疗前平均提高20分(0～30分)。其中,KIR不相合方向为GVH组的临床获益率、无进展生存期、生活质量总获益率均显著优于HVG(或相合)组[94.1%vs60.0%,(13.4±1.3)vs(8.0±0.9)个月,89.5%vs65.2%,均P<0.05];供受者关系为母子/女组的治疗有效率、患者生存期和生活质量均显著优于父子/女组(均P<0.05);肾癌和卵巢癌的临床获益率分别为90.0%和81.8%,相对于其他类肿瘤类型高,在治疗反应性和敏感性上可能占优势。结论:HLA半相合外周血活化干细胞治疗后,机体产生非特异性的抗肿瘤作用,对改善患者症状和提高生活质量有显著效果。

HLA半相合血缘性骨髓移植治疗慢性粒细胞白血病4例

目的:探索半相合未去除T细胞骨髓移植治疗慢性粒细胞白血病的可行性。方法:4例慢性粒细胞白血病患者接受HLA1或2个位点不相合亲缘骨髓移植。用阿糖胞苷、环磷酰胺和全身照射进行预处理,供者应用GCSF250μg/d,连用7d后采髓。移植物抗宿主病(GVHD)预防除用环孢菌素A(CsA)和甲氨蝶呤(MTX)外,在移植前第4天～第1天用抗胸腺细胞球蛋白ATG(兔抗)2.5mg/(kg·d),移植后第7天开始加用霉酚酸酯1.0g/d。结果:患者移植后均获得造血重建,中性粒细胞>0.5×109/L和血小板>20×109/L的中位时间分别是12.5(10～14d)和22d(18～25d)。4例患者发生急性Ⅰ度GVHD,其中1例2个位点不相合者进展为急性肠道和肝脏Ⅳ度GVHD,于+81d合并感染死亡。1例发生迟发性出血性膀胱炎。中位随访时间20个月(5～25个月)。无病存活3例,其中2例存活在1年以上。结论:供者应用GCSF后采髓,多种免疫抑制剂联合应用的HLA不全相合未去除T细胞骨髓移植,在治疗慢性粒细胞白血病过程中,有效地降低了急性重症GVHD发生,提高了无病生存。

HLA半相合造血干细胞移植的研究进展

异基因造血干细胞移植是治疗恶性血液病最有效的手段之一,但人类白细胞抗原(HLA)屏障限制了其广泛应用。随着免疫学、分子生物学、细胞生物学理论和技术的不断发展,HLA半相合造血干细胞移植日益受到关注。本文就其研究进展作一综述。

半相合细胞移植对CT-26结肠癌荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的:探讨半相合细胞移植的移植物对CT-26结肠癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及潜在机制。方法:取C57BL/6小鼠的脾细胞和骨髓细胞作为供体细胞;取18只CB6F1小鼠(受体),随机分成对照组、环磷酰胺组和移植组,每组6只,皮下种植小鼠结肠癌CT26细胞建立荷瘤小鼠模型;然后分别于尾静脉注射0.2 mL生理盐水、环磷酰胺、环磷酰胺+脾细胞+骨髓细胞,连续4周;于不同时间点检测3组小鼠肿瘤体积变化;于2周时取3组小鼠肿瘤、肝脏、小肠和皮肤组织,HE染色观察组织变化;ELISA法检测肿瘤组织中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α和TGF-β含量;流式细胞术检测移植组3 d、2周、4周时小鼠外周血细胞(H-2Kd/b)嵌合率;结果:2周时,环磷酰胺组和移植组小鼠肿瘤体积明显小于对照组(P均<0.01);与对照组和环磷酰胺组相比,移植组肿瘤组织中IL-2、IL-10、IFN-γ与TNF-α含量明显增高(P均<0.05),IL-4和TGF-β含量明显降低(P均<0.05);与移植3 d时相比,2、4周时移植组小鼠外周血中H-2Kb所占比例显著增加(P均<0.01)。结论:C57BL/6(H-2Kb)小鼠来源的脾细胞和骨髓细胞通过改变CB6F1(H-2Kd/b)小鼠肿瘤部位的免疫微环境,进而发挥抗荷瘤模型小鼠结肠癌效应。

荷载自体白血病抗原的HLA半相合DC-CIK联合CAG方案治疗老年AML

目的观察荷载自体白血病抗原的HLA半相合树突状细胞．细胞因子诱导的杀伤细胞（DC．CIK）联合CAG方案治疗老年急性髓系白血病（AML）的安全性和有效性。方法选取老年AML124例，采用化疗CAG方案，其中65例CAG方案化疗后输注荷载自体白血病抗原的HLA半相合DC．CIK细胞作为细胞组，其余59侧单纯使用CAG方案化疗作为对照组。对2组中达到完全和部分缓解的患者均按各自的原方案巩固治疗，半年内每2个月1次、半年后每3个月1次、1年以上每半年1次，并对其跟踪随访。结果所有124名患者均完成了2个以上的疗程，细胞组：65例中完全缓解（CR）54例（83．08％）、部分缓解（PR）7例（10．77％）、未缓解（NR）4例（6．15％），总有效率93．85％；对照组：59例中完全缓解34例（57．63％）、部分缓解10例（16．95％）、未缓解15例（25．42％），总有效率74．58％。巩固治疗实施后细胞组、已随访6—53个月，存活〉12个月者32例、〉24个月者16侧；对照组已随访7～31个月，存活〉12个月者22例、〉24个月者4例，使用Kaplan-Meier分析两组总生存率有统计学差异（P〈0．05）。

半相合基因DCs-CTL对小鼠黑色素瘤的抑制作用及GVHD反应

目的:探讨半相合基因来源肿瘤特异性树突状细胞活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞(the special cytotoxic T lymphocytes activated by dendritic cells,DCs-CTLs)体外静脉注射荷瘤鼠后观察其抑瘤效果及其移植物抗宿主反应(graft-versus-host disease,GVHD)的程度.方法:将B16黑色素瘤体外种植于健康C57BL/6小鼠成功后,全部在第10天给予60CO 7 Gy全身照射.将荷瘤小鼠随机分为阴性对照、自体治疗及半相合治疗组,分别于第10、17天给予小鼠自体红细胞、自体来源DCs-CTLs效应细胞、半相合鼠来源DCs-CTLs细胞经尾静脉注射治疗后,行GVHD评分;治疗后处死小鼠,取脾脏、肾和皮肤行病理检查,观察有无移植物抗宿主反应表现,并绘制肿瘤生长曲线、计算抑瘤率.结果:(1)3组GVHD反应评分结果:阴性对照组与自体治疗组、半相合治疗组相比差异均有统计学意义(P<0.05);自体治疗组与半相合治疗组之间比较无统计学意义,分别取3组小鼠的脾脏、皮肤和肾脏行病理检查,各组均未见明显移植物抗宿主反应的病理变化;(2)肿瘤生长曲线显示,自体治疗组和半相合治疗组均能明显抑制肿瘤生长,而阴性对照组对肿瘤的生长无明显抑制作用.自体治疗组和半相合基因治疗组瘤质量均低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);自体治疗组和半相合基因治疗组之间瘤质量对比差异无统计学意义(P>0.05);自体治疗组和半相合治疗组抑瘤率对比差异无统计学意义(P>0.05).结论:自体治疗组及半相合基因治疗组均有明显抑瘤作用,治疗后观察半相合基因治疗组未见明显移植物抗宿主反应.

“北京方案”开启人人都有移植供者新时代——访北京大学血液病研究所所长黄晓军教授

2021年1月20日伴随着移植舱内患者造血干细胞输入的顺利结束,北京大学血液病研究所团队造血干细胞移植突破10000例,并由此成为亚洲唯一一个达到这一程碑数据的骨髓移植中心。国家血液系统疾病临床医学研究中心主任、北京大学血液病研究所(以下简称“北大血研所”)所长黄晓军教授在接受采访时介绍说,从1964年第一例造血干细胞移植到现在的第10000例,从同胞人类白细胞抗原(HLA)完全相配到亲属HLA半相合,再到今天成熟的“北京方案”。

亲缘半相合与无关供者造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血的疗效比较

目的评价亲缘半相合造血干细胞移植（Haplo-HSCT）治疗重型再生障碍性贫血（SAA）的疗效，并且与同期进行的无关供者造血干细胞移植（UD-HSCT）进行比较。方法回顾性分析2012年9月至2014年7月接受替代供者造血干细胞移植的50例SAA患者临床资料；其中24例接受HaploHSCT，26例接受UD-HSCT。结果中位随访时间9（2-26）个月，总生存（0s）率为91．3％。UD-HSCT组和Haplo—HSCT组0s率分别为96．1％和86．0％（P=0．30）。3例（6％）患者原发植入失败。Haplo—HSCT组患者Ⅱ-Ⅳ度急性移植物抗宿主病、慢性移植物抗宿主病、CMV血症、EBV血症发生率分别为37．5％、37．5％、78．2％及43．1％，均明显高于UD．HSCT组（3．83％、15．3％、46．1％及16．0％）（P值分别为0．003、0．030、0．005、0．040）；出血性膀胱炎发生率差异无统计学意义（39．1％对23．0％，P=-0．120）。结论Haplo—HSCT治疗sAA0s率较高，疗效与UD—HSCT相近。

中国 造血干细胞移植半相合供者也可成为移植首选

近日,国际著名期刊《白血病》（Leukemia）在线发表了北京大学血液病研究所、北京大学人民医院黄晓军教授课题组完成的＂急性白血病首次缓解期异基因造血干细胞移植供者选择＂前瞻性临床研究。

FBC预处理方案在HLA半相合异基因外周血干细胞移植中的应用

目的 观察降低预处理强度对HLA半相合异基因干细胞植入的影响。方法 用氟达拉宾 (30mg m2 × 6d)、白消安 (4mg kg× 2d)、环磷酰胺 [(30～ 6 0 )mg kg× 2d]组成FBC方案。将 12例白血病患者分成两组 ,HLA完全相合移植组 4例 ,移植前患者处完全缓解状态 ;HLA半相合移植组 8例 ,皆为难治性白血病 ,其中 1例HLA 3个位点不合 ,6例二个位点不合 ,1例一个位点不合 ,接受本处理方案后 ,进行G CSF动员的异基因外周血干细胞移植 ,并于移植后第 30天 (+30天 )、+6 0天、+90天输注供者淋巴细胞 ,观察异基因干细胞植入和长期植入情况。结果 HLA半相合组患者平均接受 4.87× 10 8 kg供者外周血单个核细胞 ,其中CD3 4+细胞平均数为 4.5 8× 10 6 kg,HLA全相合组平均接受 4.85× 10 8 kg供者外周血单个核细胞 ,其中CD3 4+细胞 4.47× 10 6 kg。HLA半相合组 7例白细胞升至 1.0×10 9 L的平均时间为 2 9d(11～ 90d) ,血小板升至 2 0× 10 9 L的时间为 36d(14～ 96d) ,1例HLA 3个位点不合的患者移植失败 ,但该患者于 +5 0天恢复自体造血。而HLA全相合的 4例患者白细胞升至 1.0×10 9 L平均需 14d(11～ 18d) ,血小板升至 2 0× 10 9 L平均需 15d(11～ 18d)。经STR PCR检测 ,两组患者除 1例表现为混合嵌合体 。

母体内微量子代细胞嵌合体在HLA半相合造血干细胞移植中的意义

HLA不全相合的血缘关系移植解决了异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）的供者来源，但供受体间的HLA差异屏障限制了其广泛应用。近年来发现在妊娠结束后，部分母亲体内可以检测到长期存在的微量子代细胞（FMC）。这一现象引起人们的高度重视，因为它提示由于母体长期接触胎儿细胞表达的遗传性父本抗原（IPA）而可能存在对胎儿细胞的部分免疫耐受。这样的免疫耐受可能有利于母体供者半相合移植的预后。我们回顾性分析18例母亲供者HLA半相合HSCT的疗效与供者体内FMC之间的关联来阐述两者之间的相关性。

优化H-2半相合造血干细胞移植物治疗急性白血病的实验研究

目的 探讨H 2半相合造血干细胞移植物中分离移植物抗宿主病 (GVHD)与移植物抗白血病 (GVL)作用的T淋巴细胞阈值。方法 建立 (C5 7BL 6× 6 15 )F1(H 2 b)白血病鼠模型作为受者 ,以C5 7BL 6 (H 2 b)小鼠为供鼠 ,应用免疫磁珠 (MiniMACS)纯化供鼠的CD34+ 和CD3+ 细胞 ,纯度分别为 ( 81.5± 2 .4) %和 ( 95 .4± 2 .9) %。 6 9只受鼠分为 7组 ,A为白血病自然生存组 ,其余各组均经6 0 Co 9GyTBI,除B组单纯TBI外 ,其余各组均经尾静脉输注供鼠CD34+ 细胞 10 5 只 ,D、E、F、G组移植物中还分别混合CD3+ 细胞每只 10 7,5× 10 7,10 8和 1.5× 10 8,饲养 6 0d ,根据病理确定死因。结果 E组 10 0 %存活 >6 0d ,明显长于其它组 (P <0 .0 0 0 1) ;生存 >6 0d者异性染色体为 10 0 %,D、E组因白血病复发死亡者明显少于C组 (P <0 .0 0 1) ,G组因GVHD死亡者明显高于E、F组 (P <0 .0 0 1)。结论 单纯CD34+ 细胞移植组白血病复发率最高。移植物中CD3+ 细胞 >10 8时因GVHD死亡者最多 ;5× 10 7 只时能够分离重度GVHD和GVL。